1、肿瘤细胞能量代谢机制1正常细胞能量代谢以及 warburg 效应三磷酸腺苷（adenosine triphosphate, ATP）是细胞中的能量通货，用于储存和传递化学能。ATP 是一种高能磷酸化合物，它与二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）的相互转化实现了储能和放能。细胞中产生 ATP 主要通过胞液中进行的糖酵解（glycolysis，Gly）和线粒体中进行的氧化磷酸化（oxidative phosphorylation，OxPhos）两种途径产生。在正常组织中,90%ATP 来源于氧化磷酸化，而仅有 10%来源于糖酵解1。并且在有氧条件下，糖酵解受到抑制，称为
2、 Pasteur 效应。1920 年，Nobel 奖获得者 Warburg 发现肝癌细胞糖酵解活性明显强于正常肝细胞，并且进一步研究表明，在有氧条件下，糖酵解活性也很强。肿瘤细胞在氧气充足条件下，依然呈现葡萄糖高摄取率,增强的糖酵解代谢及代谢产物乳酸增加的这一现象则是普遍存在,并被称之为 Warburg Effect2。Warburg 认为这种糖酵解活性增强是由于肿瘤细胞线粒体呼吸链出现不可逆性损伤造成的。但是现在对于这一观点有很多不同看法。2糖酵解优势虽然肿瘤细胞中糖酵解占据优势，但是 Koppenol 表明肿瘤细胞中氧化磷酸化产生的 ATP 与正常细胞大致相同，但是肿瘤细胞葡萄糖摄取量却是
3、正常细胞的 10 倍。而且，每 13 个葡萄糖分子中一个被氧化磷酸化而 12 个进行糖酵解。所以通过氧化磷酸化产生 36 分子 ATP 同时经糖酵解产生 24 分子 ATP3。所以可以看出肿瘤细胞糖酵解活跃。尽管糖酵解的效率低，但是肿瘤细胞可以从糖酵解中受益：由于肿瘤细胞生长迅速，所以对能量需求量大，而糖酵解多产生的 ATP 也有利于肿瘤生长。糖酵解的中间产物 6-磷酸葡萄糖，丙酮酸可以合成脂肪酸、核酸，调节细胞代谢和生物合成，有助于肿瘤细胞的迅速生长。糖酵解酶己糖激酶（hexokinase ，HK）拮抗细胞凋亡。糖酵解产物使肿瘤周围微环境酸化，这种酸化的微环境不利于正常细胞生长，但有利于肿瘤
4、细胞的浸润和转移4。3糖酵解活跃机制肿瘤细胞中糖酵解活跃的机制比较复杂，是多种因素综合作用调节引起的。主要包括以下几个方面：有利于糖酵解的跨膜结构，酶代谢异常，肿瘤微环境，癌基因及信号转导通路异常等。3.1 有利于糖酵解的跨膜结构肿瘤细胞摄取葡萄糖能力是正常细胞的 10 倍左右，所以肿瘤细胞膜表面应存在大量葡萄糖转运体（GLUT） ，并且肿瘤细胞糖酵解活跃，生成大量乳酸，所以细胞膜表面应存在大量的单羧酸转运泵以及氢离子相关转运体，否则会造成细胞内乳酸堆积，导致酸中毒，致使细胞死亡。3.1.1 葡萄糖转运体葡萄糖以被动转运的方式进入胞内，由于葡萄糖为水溶性有机物，所以需葡萄糖转运体（GLUT）协
5、同进入胞内。GLUT 至少有 14 种，其中GLUT1，GLUT3，GLUT4 与葡萄糖亲和力较高，具有转运葡萄糖的活性。且在大量恶性肿瘤 GLUT3，GLUT4 过量表达，GLUT1 在正常组织中表达，在恶性肿瘤组织中表达增高5。3.1.2 单羧酸转运泵和氢离子相关转运体糖酵解最终产物是乳酸，研究表明糖酵解的乳酸通过单羧酸转运泵（MCT）转运至肿瘤微环境中。因此肿瘤微环境 PH 较低，从而不利于正常组织生长，有利于肿瘤扩散。先发现 MCT 至少有 14 种，其中 MCT1MCT4 有转运乳酸的能力，而 MCT2 和 MCT4 与乳酸亲和力最高，并且在恶性肿瘤中过量表达。MCT1 在正常组织表
6、达，并且在肿瘤细胞中表达升高6。肿瘤细胞表面氢离子转运体如 Na+-H+交换体，空泡型质子泵也明显上调，使肿瘤细胞内 PH 维持稳定，使肿瘤不受高糖酵解活性产生的大量乳酸的威胁7。3.2 己糖激酶（HK）酶是生物体内生化进程中不可缺少的催化剂，生物体中的能量代谢也大多由酶来调节。在肿瘤细胞中，氧化磷酸化的酶合成受到抑制，比如细胞色素C（COX） ，琥珀酸脱氢酶（SDH） ，延胡索酸水和酶（FDH）等等，而糖酵解酶合成增多，例如己糖激酶（HK） ，磷酸果糖激酶(PFK)、乳酸脱氢酶(LDH)和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)等。己糖激酶（HK）催化葡萄糖转化为 6-磷酸葡萄糖（glucose-6-
7、phosphate，G-6-P） ，是糖酵解的第一步，也是糖酵解的限速步骤。人体中 HK共有 4 个亚型，分别为 HK1HK4，分布在不同的组织，并且 HK1HK3 对葡萄糖亲和力较高，HK4 对葡萄糖亲和力较低。恶性肿瘤中，HK2 表达明显上调。HK2表达水平的上调和 DNA 甲基化有着密切联系。正常肝细胞中，DNA 甲基化程度高，HK2 基因几乎不表达，而肝癌细胞中 HK2 基因甲基化程度低，HK2 基因表达较高8。HK 不仅在调节糖酵解过程中起关键作用，HK 还可以促进细胞增殖抑制细胞凋亡。HK 可与线粒体外膜的孔蛋白 VDAC 相结合，并且相互作用，促进细胞增殖抑制细胞凋亡。HK 促进
8、细胞增殖抑制细胞凋亡的具体机制并不清楚，抑制细胞色素 C 释放可能是原因之一。总之 HK 在肿瘤细胞中不仅可以促进糖酵解的活性，还可以通过与线粒体结合，发挥促进肿瘤细胞增殖和抑制肿瘤细胞凋亡的功能。3.3 微环境与低氧诱导因子（HIF）肿瘤细胞生长迅速，当肿瘤细胞生长到一定程度时，原有的毛细血管已经不能提供足量的氧气和营养物质维持肿瘤的生长，所以就会有新的毛细血管生成，增加血流量和营养物质的供应。促进血管新生的细胞因子主要为血管内皮生长因子（VEGF） 。而低氧诱导因子（HIF）促进 VEGF 的表达，缺氧条件下，二者表达均显著增高9。在缺氧条件下，肿瘤细胞内发生最明显的变化就是 HIF 表达
9、升高。HIF 是由异源二聚体组成，包括一个不稳定的 亚基和稳定的 亚基。可以与靶基因启动区的缺氧应答元件(hypoxia response element, HRE)识别，启动靶基因表达。根据 亚基不同，HIF 分为 3 个亚型，HIF-13，分别存在于不同组织10。HIF-1 广泛表达于各种细胞中,而 HIF-2 仅表达于内皮细胞,肾,心脏,肺及小肠组织中,HIF-3 的作用至今不明11。在氧气充足的条件下，HIF 通常被泛素化途径讲解，因此含量很少。主要机制为，HIF 被 PHD 家族成员羟化，形成与肿瘤抑制蛋白 VHL(von Hippel-Lindau)结合的位点，HIF 与 VHL
10、蛋白结合形成复合体，然后被引导至蛋白酶体降解12。氧气缺乏时，PHD 活性受到抑制，不能使 HIF 羟化，VHL 不能识别，所以可以稳定存在。HIF-1 与 HIF-1 结合,进入细胞核,与靶基因启动子区的缺氧应答元件(HRE)识别并结合,启动靶基因的转录。HIF-1 转录活化的基因有 100200 个，包括GLUT1、GLUT3、糖酵解酶类、单羧基转运体 4(MCT4)等。HIF-1 通过上调GLUT1，GLUT3 增强肿瘤细胞对葡萄糖的摄取，为活跃的糖酵解提供充足原料；通过上调糖酵解通路中的多个酶的转录,增强糖酵解代谢;通过上调 MCT4 表达，促进细胞内乳酸的排除，维持胞内 PH 稳定；
11、通过上调血管内皮生长因子(VEGF)和促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)等的表达,促进新生血管的生成13;通过增强丙酮酸脱氢酶激酶(pyruvate dehydrogenase kinase isozyme1,PDK1)的表达,减少线粒体氧化磷酸化的底物生成从而影响线粒体的功能14。3.4 基因人类线粒体 DNA 编码 13 种参与线粒体呼吸链的蛋白分子。线粒体 DNA 由于与细胞内活性氧产生位点在物理位置上非常接近，缺乏组蛋白并且修复能力弱，所以容易受损而发生突变。肿瘤细胞线粒体 DNA 变异现象较为普遍。线粒体DNA 突变可引起线粒体氧化磷酸化呼吸功能下降,糖酵解代谢
12、增高15。3.4.1 癌基因Ras，Src，PI3K/Akt，Bcr-Abl 等癌基因有促进糖酵解并减弱线粒体氧化磷酸化的功能。Ras 基因活化导致 ROS 增加，抑制 HIF-1 羟化。使肿瘤细胞中 GLUT1 表达增高，肿瘤细胞摄取葡萄糖增高，糖酵解增加16。另外 Ras 可以通过PI3K 与 AKT1 的活化性突变所致的 mTOR(mammalian target of rapamycin)通路的活化，会促进 HIF1 的转录和翻译，促进糖酵解活性。Bcr-Abl 也可以促进糖酵解活性。3.4.2 抑癌基因LKB1、PML、PTEN 和 TSC1/TSC2 抑癌基因功能性失活，也可通过
13、mTOR 信号通路促进 HIF1 的转录和翻译、诱导代谢相关的基因表达，使糖酵解活性增强。肿瘤抑制蛋白 p53 在调节线粒体呼吸与糖酵解平衡间起重要作用。p53 可以通过直接激活 SCO2（synthesis of cytochrome c oxidase 2）转录调节有氧呼吸。p53 与 SCO2 基因中的 p53 结合序列特异结合启动 SCO2 基因转录17。此外，p53 可以通过调控 TIGAR（Tp53-induced glycolysis and apoptosis regulator）表达来抑制糖酵解。TIGAR 表达产物可降解 2，6-二磷酸果糖，而2，6-二磷酸果糖可以激动糖酵
14、解的发生，所以 TIGAR 可抑制糖酵解通路。p53缺失使 TIGAR 表达受抑制，可导致糖酵解活性增强18。4.癌症治疗目前肿瘤对化疗放疗的耐受性给肿瘤治疗增加了很大难题。但是由于肿瘤细胞的糖酵解活性高，所以可以通过靶向抑制肿瘤的糖酵解，从而抑制肿瘤的增殖。具体的方法包括抑制葡萄糖转运、直接抑制糖酵解、抑制 HIF 作用、抑制 mTOR通路等多种途径来治疗肿瘤。现在已经有多种药物进入临床应用，还有很多正在进行临床试验（如表一19）5.展望虽然在肿瘤能量代谢方面已经取得了显著的成就，但是还是有很多问题现在还很难解释。肿瘤细胞糖代谢中糖酵解活跃，而脂质代谢，蛋白质代谢又有什么异常呢？这些代谢之间
15、互相又有什么联系呢？肿瘤不同时期的代谢类型又有什么不同？这些问题都有待于进一步的研究。通过进一步研究，进一步揭示肿瘤代谢改变，定将为肿瘤的靶向治疗提供新的突破。【参考文献】1 Gillies RJ, Gatenby RA. Hypoxia and adaptive landscapes in the evolution of carcinogenesisJ. Cancer Metastasis Rev, 2007,26(2):311-317.2 Warburg O. On the origin of cancer cells J. Science, 1956, 123(3191): 309-3
16、14.3 Koppenol WH，Bounds PL.The Warburg effect and metabolic efficiency :recrunching the numbersEB/OL.(2009-09-14)2011-04-16.http:/www.sciencemag.org/content/324/5930/1029/reply4 Gatenby RA, Gillies RJ. Why do cancers have high aerobic glycolysisJ. NatRev Cancer, 2004, 4(11): 891-899.5Zhao FQ, Keatin
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