1、微免实验整理 第 1 页 共 11 页 整理 by 陆 （一） 实验一 大吞噬现象、小吞噬现象 吞噬功能的测定计数方法： 吞噬百分率 :计数 100 个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数 ,即为吞噬百分率。 吞噬指数： 观察 100 个中性粒细胞，计数被吞噬的细菌总数，求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。 大吞噬现象要认识“巨噬细胞” 小吞噬现象主要认识“中性粒细胞”（马蹄状形） （二）实验二 淋巴细胞转化试验（原理、分型、意义） 1、 原理： T 淋巴细胞可以在分裂剂的刺激下，向母细胞转化。促分裂剂能选择性地激发T 淋巴细胞合成 DNA 与细胞分裂。转化百分率正常值为 70%左右 2
2、、 分裂相： 即 染色体型 3、 母细胞： 较小淋巴细胞大 4-5 倍；核质疏松呈网状结构，有 1-3 个核仁；核周透明区；胞浆嗜碱性，有空泡 4、 过渡型： 较小淋巴细胞略大；核质略疏松；着色较淡 5、 小淋巴细胞： 核质致密；着色深；胞浆少 6、 意义： 体外淋巴细胞转化反应，可为测定机体细胞免疫状态的指标之一。 E 玫瑰花环实验 1、 原理： T 细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成 E 玫瑰花环，由此可区分 T 淋巴细胞与 B 淋巴细胞 2、 判定结果： 凡是淋巴细胞周围围绕 4 个以上绵羊红细胞者为阳性 血清学反应 1、基础 ： 抗原决定簇 抗体的互补决定区
3、 微免实验整理 第 2 页 共 11 页 整理 by 陆 2、特点： 特异性、可逆性、 比例性、阶段性 3、抗原抗体反应因素： 电解质、温度、酸碱度 4、抗原或抗体的检测方法： 凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术 I 凝集反应：（直接、间接） 概念： 抗原 + 抗体 = 凝集团块 直接凝集： 颗粒性抗原 + 抗体 = 凝集团块（ 玻片法、试管法 ） 直接凝集反应 玻片凝集反应 定性；用已知抗体检测颗粒性抗原；细菌的诊断和分型，红细胞 ABO 鉴定 出现白色凝集块，属于阳性反应 直接凝集反应 试管凝集反应 （半定量，诊断 伤寒副伤寒） 间接凝集： 可溶性抗原包被于载体 + 抗体 = 凝集团块 反向
4、间接凝集： 抗体包被于载体 + 抗原 = 凝集团块 协同凝集： 抗体结合金葡菌 SPA + 抗原 = 凝集团块 II 沉淀反应：（单项、双向） 概念： 可溶性抗原 + 抗体 = 沉淀物 单向琼脂扩散 单向琼脂扩散试验是一种定量试验。将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现 白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。 主要用于测定血清各种 Ig 和补体成分的含量 双向琼脂扩散 可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分（抗原、抗体 同时扩散（自由、定向） 对流免疫电泳 在相应抗原抗体孔之间可见 白色沉淀线 。 火箭电泳：抗原定量试验（抗体琼脂板、
5、抗原扩散（自由、定向） 将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成 锥形沉淀峰 ，状如火箭，称火箭电泳。 沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。敏感度与单扩相仿，但需时较短。 III 直接凝集反应 玻 片凝集 微免实验整理 第 3 页 共 11 页 整理 by 陆 （三）实验三 补体结合实验 中和反应实验：（病毒中和实验、毒素中和实验） 略 免疫标记技术： 1、 概念： 将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。 2、 原理： 免疫标记技术是在免疫学、生物化学
6、及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素（常用异硫氰基荧光黄，简称 FITC）与特异性抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发 产生荧光，而从荧光显微镜加以观察。 3、 常用的标记物有： 酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。 微免实验整理 第 4 页 共 11 页 整理 by 陆 E L I S A（酶联免疫吸附试验） 1、 原理： 把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和
7、酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。 2、 方法： 主要有间接法（用于测抗体）和双抗体夹心法（用于测抗原）。 革兰染色 1、 意义： 对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究 细菌致病性等有重要意义。 2、 原理： 与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。 阴性 红色 阳性 蓝色 细菌学总论 细菌是一类 具有细胞壁的单细胞微生物 ，形体微小，一般以 微米（ m） 作为测量单位。 细菌按其外型可分为 球菌、杆菌、螺型菌 三大类。 不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直径约 1m，杆菌长 25m，宽 0.31m
8、。 细菌的特殊结构：荚膜、鞭毛、芽孢、菌毛 【实验】 毒力试验：（ Elek 平板） 鉴定分离出的细菌能否产生外毒素 方法： 在含血清的琼脂平板中央贴上一条浸有白喉抗毒素血清的滤纸条，将待检菌垂直划过滤纸条接种 现象： 如产生外毒素，则产生白色沉淀线（毒素与抗毒素特异性结合） 本质： 抗原抗体沉淀实验 【实验】细菌划线分离、药物敏感试验（观察抑菌圈的直径， mm 来计数） 、抗酸染色方法 微免实验整理 第 5 页 共 11 页 整理 by 陆 （四）实验四 细菌生长情况 （ 1）液体培养基 沉淀生长、混浊生长、表面生长 （ 2）半固体培养基（ 0.1%0.3%琼脂粉） 混浊生长、线状生长 （
9、3）固体培养基（ 1.4%2%琼脂粉） 菌落、 菌苔 细菌变异 1、 菌落变异（ S R 变异） S 型菌落 (Smooth)光滑菌落 表面光滑有光泽，边缘整齐。 微免实验整理 第 6 页 共 11 页 整理 by 陆 R 型菌落 (Rough) 粗糙菌落 表面粗糙而暗淡，边缘不整齐。 菌落变异是由于菌体本身起变化。 一般光滑的细菌有毒力；粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。 2、 鞭毛变异（ H O 变异） 细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有鞭毛的细菌。 细菌色素 金黄色葡萄球菌产生脂溶性金黄色色素 铜绿假单胞菌（俗称绿脓杆菌）产生水溶性绿色色素 细菌生化反应 （五）实验五 化脓性球菌： 葡
10、萄球菌（左上）、链球菌（右上）、肺炎球菌（左下）、淋球菌（右下） 甲型（）乙型（）丙型（）溶血链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌 1、 甲型 草绿色，不完全溶血 2、 乙型 透明完全溶血 3、 丙型 不溶血 4、 肺炎链球菌 G+ （血琼脂平板）（草绿色不完全溶血） 5、 淋病奈瑟菌 G-（巧克力血琼脂平板） 6、 其中，链球菌的致病：扩散因子（透明质酸酶）使脓液稀释扩散。 微免实验整理 第 7 页 共 11 页 整理 by 陆 白喉杆菌 G+（亚碲酸钾血琼脂）（ Albert 染色 异染颗粒） （ Elek 平板 白喉杆菌毒力试验） 下面图片的 Eleck 平板写错了，正确是 Elek 平板 微
11、免实验整理 第 8 页 共 11 页 整理 by 陆 结核杆菌 （齐 -尼抗酸染色 红色） （罗氏培养基（绿色） 菜花样（黄色） （六）实验六 肥达反应 1、 概念： 用已知的伤寒沙门菌菌体（ O）抗原和鞭毛（ H）抗原，以及引 起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌 H 抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。 2、 结果判断： 微免实验整理 第 9 页 共 11 页 整理 by 陆 3、 【实验】 血清学诊断：肥达反应 原理： 用已知 伤寒沙门菌的 O、 H抗原、甲、乙副伤寒沙门菌的 H抗原 与患者血清做定量凝聚试验，根据抗体效价的增
12、长，辅助肠热症的临床诊断。 用途： 辅助诊断伤寒、副伤寒 【带菌者检查： Vi 抗体】 【实验】 方法： 试管凝集法 （定量） 当 TO 1： 80， TH 1： 160， PA、 PB 均 1： 80 才有意义 动态观察： 双份血清抗体四倍升高有诊断意义 临床意义： 辅 助诊断伤寒和副伤寒 O 抗体（ IgM）， H 抗体（ IgG） * O 、 H 抗体均升高，患伤寒的可能性大 * O 、 H 抗体不升高，患伤寒的可能性小 * 只有 H 升高，则可能是预防接种过或非特异性回忆反应， * 只有 O 升高而 H 不高，则可能是感染早期或其他沙门菌的交叉反应 。 分析结果时应注意： 正常人抗体水
13、平。一般伤寒杆菌 O 抗体效价在 1： 80 以上， H 抗体效价在 1： 160 以上，甲、乙副伤寒杆菌 H 抗体效价在 1： 80 以上才有诊断价值； 动态观察：一般随病程延长第 2 次检测抗体 效价比第 1 次高 4 倍或 4 倍以上才有诊断意义。 区别 H、O 抗体增高的意义：两者同时升高有辅助诊断意义；两者同时低于正常无意义； O 抗体效价高而 H 抗体效价低，可能是感染的早期或其他沙门菌感染引起的交叉反应。若 H 抗体效价高而 O 抗体效价在正常范围内，则可能是以往接种过疫苗或非特异性回忆反应所致。 肠道杆菌 G-（ SS、双糖培养基） 生化反应表 微免实验整理 第 10 页 共 11 页 整理 by 陆 炭疽杆菌 G+ （普通琼脂培养基）（灰白色粗糙型菌落）（卷发状边缘） 霍乱弧菌 G- （碱性蛋白胨水） 厌氧芽孢梭菌（破伤风、产气荚膜、肉毒梭菌） 1.破伤风梭菌 G+ （庖肉培养基）（毒素动物实验） 2.产气荚膜梭菌 G+ （庖肉培养基）（血琼脂平板 双层溶血环）（高层琼脂断裂试验）（汹涌发酵试验） 3.肉毒梭菌 G+ （庖肉培养基）（血琼脂平板 完全溶血）
