1、分类号 S828 学校代码 10129 U D C 11.220 学 号 08201051 羊鼻蝇蛆病病理学及 鼻黏膜 免疫学研究 Research of Pathological and Immunology of Nasal mucosa on Oestrus ovis 申 请 人： 杜长春 学科门类： 农 学 学科专业： 基础兽医学 研究方向 ： 动物传染病与免疫病理学 指导教师： 王凤龙 教授 论文提交日期：二 一一 年四 月 摘 要 通过对山西黄土高原区域羊鼻蝇蛆感染情况调查、病理学及鼻黏膜免疫学的研究，以明确该地区羊鼻蝇蛆的感染率、该病的病理学及 鼻 黏膜免疫学变化。从春季至秋季对
2、羊鼻蝇蛆感染情况进行调查，对 307 例绵羊进行羊头剖检，检查羊鼻蝇蛆病的各龄幼虫感染情况，同时观察病理变化，并采取感染羊的鼻黏膜、咽后淋巴结、脑和肺组织进行病理组织学检查，采用 ELISA检测鼻腔分泌物 IgA、 IgG 含量 ，通过 流式细胞仪 对 鼻黏膜 、咽后淋巴结中 T淋巴细胞亚群进行检测。 春 季检查 157 例，鼻蝇蛆感染患羊 34 例，感染率达 22%；秋季检查 150 例，感染患羊 70例，感染率达 47%；春秋两季平均感染率为 34%。 鼻蝇蛆感染绵羊鼻 黏膜出现不同损伤和增生性炎，咽后淋巴结炎性细胞浸润，有的病例出现肺气肿，脑组织水肿。 检 出虫体的羊与未检出虫体羊比较，
3、咽后淋巴结 IgA 分泌细胞和 IgG 分泌细胞呈增高趋势，尤其是淋巴结髓质中 IgA 分泌细胞和 IgG 分泌细胞明显增多 ； 感 染绵羊鼻腔分泌物中 IgA、 IgG 水平显著高于 未感染绵羊， 咽 后淋巴结、鼻黏膜 CD4+水平显著性高于未感染绵羊， 鼻 黏膜CD8+水平较高于未感染绵羊，而咽后淋巴结中 CD8+水平二者无明显差异， 咽 后淋巴结、鼻黏膜 CD4+/CD8+的比率显著高于未感染绵羊。 关键词： 羊鼻蝇蛆；流行病学；病理学； 鼻黏膜免疫学 Research of Pathological and Immunology of Nasal mucosa on Oestrus o
4、vis Abstract In order to make clear the area of sheep nasal flies maggots infection,the pathological changes and nasal mucosa immunology of the disease,we carried out an infection survey,pathology and nasal mucosa immunology study of Oestrus ovis in the loess plateau area in Shanxi province from spr
5、ing to autumn. 307 samples were dissected to check the infection status of nasal flies maggots larvae, while histopathology methods were used to observe pathological changes. And then， we examined the sheep nasal mucosa、retropharyngeal lymph nodes、 brain and lung histologic. Then, the content of IgA
6、 and IgG in nasal chambers secretion were tested By ELISA, the T lymphocyte subsets were examined by using the flow cytomytor. 34 cases were detected in 157 sampled cases in spring， detection rate was 22%; 70 in 150 were detected in autumn detection rate was 47%; the average infection rate was 34%.
7、nasal mucosa appeared different injury and proliferative inflammation, retropharyngeal lymphadenitis cells were infiltrated, others appeared emphysema , brain tissue edema. Compared with no parasite detected cases, the quantity of IgA secretory cells and IgG secretory cells in parasites detected cas
8、es increased significantly,especially in lymph node medulla. IgA and IgG in nasal secretion from infected sheep were significantly higher than uninfected one. CD4+ in retropharyngeal lymph nodes and nasal mucosa of infected sheep was the highest. CD8+ as same as CD4+. CD8+ in retropharyngeal lymph n
9、odes were no obvious difference in infected and uninfected sheep. The ratio of CD4+/CD8+ in retropharyngeal lymph nodes and nasal mucosa of infected sheep were higher. Key words: Oestrus ovis;Epidemiology;Pathology;Immunology of Nasal mucosa Directed by: Prof Wang Fonglong Applicant for Master degre
10、e: Du Changchun (veterinary pathology) (Animal Science and Animal Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Huhhot, 010018, China) 目 录 1 引言 . 1 1.1 羊鼻蝇蛆 概述 . 1 1.1.1 病原体及形态学 . 1 1.1.2 流行病学 . 1 1.1.3 发育生物学 . 2 1.1.4 免疫学诊断 . 4 1.1.5 病理学 . 4 1.1.6 危害及临床症状 . 4 1.1.7 羊鼻蝇蛆病的防治 . 5 1.2 鼻腔免疫部分 . 6 1
11、.2.1 鼻腔组织学特点 . 6 1.2.2 鼻腔的免疫功能 . 6 1.2.3 鼻相关淋巴组织 . 7 1.2.4 鼻腔免疫研究进展 . 7 1.3 本课题研究的目的和意义 . 9 2 实验研究 . 9 2.1 实验一 山西黄土高原地区羊鼻蝇蛆病流行病学调查及病理组织学观察 . 9 2.1.1 材料 . 9 2.1.2 方法 . 11 2.1.3 实验结果 . 13 2.1.4 讨论 . 18 2.2 实验二 羊鼻蝇蛆病鼻黏膜免疫应答研究 . 20 2.2.1 材料 . 20 2.2.2 方法 . 22 2.2.3 实验结果 . 25 2.2.4 讨论 . 33 3 结论 . 35 致 谢
12、. 36 参 考 文 献 . 37 作 者 简 介 . 44 缩 略 语 表 ADCC （ antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity 抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用 APC（ antigen present cell） 抗原提呈细胞 ASC（ antibdy secretory cells） 抗体分泌细胞 CD4（ helpercell） 辅助性 T 细胞 CD8（ SUPPRESSOR T cell） 抑制 /杀伤 T 淋巴细胞 DC（ dendritic cell） 树突状细胞 DMSO（ dimethyl sulfoxide） 二甲基亚
13、砜 FCA（ Flow cytometric analysis） 流式细胞仪 GALT（ gut-associated lymphoid tissue） 肠 黏膜 相关淋巴组织 ELISA（ enzyme linking immunosorbent assay） 酶联免疫吸附试验 HEV（ high epithelialvenules） 后微静脉 IgA（ immunoglobulin A） 免疫球蛋白 A IgG（ immunoglobulin G） 免疫球蛋白 G IFN（ interferon） 干扰素 IL（ intierleukin） 白细胞介素 M c（ melnbranous c
14、ell） 微皱细胞 MALT（ mucosal-associated lymphoid tissue） 黏膜相关淋巴组织 NALT （ Nose associated lymphoid tissue） 鼻腔黏膜相关淋巴组织 slgA（ secretory lgA） 分泌性 lgA TNF（ tumor necrosis factor） 肿瘤坏死因子 内蒙古农业大学硕士学位论文 1 1 引言 1.1 羊鼻蝇蛆概述 羊鼻蝇 (Oestrus ovis Linnaeus,1761)亦称羊狂蝇，属双翅目 (Diptera)，狂蝇科 (Oestridae)，狂蝇属 (Oestrus)1。羊鼻蝇蛆病是羊鼻
15、蝇的幼虫寄生在羊的鼻腔及其附近腔窦中引起 羊 只 不安、呼吸困难、 慢性鼻炎 和额窦炎 症状为主的寄生虫侵袭疾病 2。羊狂蝇宿主呈 世界各地养羊区广泛分布 ，感染率高，成蝇飞行距离长 3。该 病主要危害绵羊，山羊受害较轻 ，在欧洲有寄生于骆驼和人的报道。羊 狂 蝇蛆病在我国西北、内蒙古、东北地区 感染较为严重，流行严重地区感染率可高达 80% 1。研究表明，患羊增重降低 3.58% 8.29%，每只羊月均活重损失 0.479 0.6kg4，而胴体肉损失达 1.19 4.6kg，羊毛损失 200 500g，产奶量下降 10%5，严重影响羊只生长发育并给畜牧业带来严重经济损失。 1.1.1 病原体
16、及 形态学 羊 狂 蝇成虫的形态学特征的 描述开始 由 Linne在分类时即进行了 论述 ， 将 成虫翅脉的特征 用来 种的鉴定 6。 成虫体长 10 12毫米，淡灰色，略带金属光泽体态似蜜蜂，头大呈黄色，口器已退化 1，全身密生绒 毛，胸部结节上长有细长毛，腹部长有银白色闪光点。产完幼虫（蛆）后，雌蝇立即死亡；雄蝇与雌蝇交配后，雄蝇立即死亡 7。 其不同龄期幼虫间的形态学差异多采用 Capelle8与 Zumpt3 报道的分类鉴定方法。即 期 幼 为浅黄白色 ， 体 长约 1mm， 前方有两个黑色强大的口钩向后弯曲，口钩高度角质化 。 尾部末端突起上有 10个或 11个小刺 。 背部第 3节
17、片 上 有 3排刺，其余节片 上 有 2排完整的刺和位于中间部分的 8 12个刺。腹面的每个节片 上 有 3排刺，最后 2节有不完整的第 4排刺。 期 幼龄虫 体 长 9 20mm。 体表的刺不明显 。 期 幼虫体形似圆柱形， 前端尖， 强壮而弯曲， 体 长 25 30mm。 有两个强大的黑色口前钩，较发达，内部连接于咽部骨架上。 虫体背面无刺，成熟后各节上具有 颜色深浅不一的 带斑 (随成熟程度不同颜色深浅不同 )。 腹面各节前端具有小刺约 11列 。 虫体后端平齐，凹处有两个“ D”型气门板，中央有钮孔 ， 两后气门板明显黑色且几乎相接 ，封闭着气门钮 8 9。 Guitton10和 Do
18、rchies11 还对幼虫进行了电镜扫描观察，他们发现 期 幼虫体表有许多 小 刺，且口钩 发达 强壮； 期 幼虫刺较少； 期 幼虫腹侧有 很多 小刺。 1.1.2 流行病学 自 上个 世纪 30 年代以来，人们开始研究羊 狂 蝇蛆流行病学。目前，对 羊 狂 蝇蛆 的流行动态已完成野外调查的国家有法国 12、美国 13、乌克兰 14、津巴布韦 2、南非 15、印度 16 等。我国新疆石河子 17、宁夏固原 18和四川阿坝地区 19做过一个完整年度的调查。 2 羊鼻蝇蛆病病理学及鼻黏膜免疫学研究 有关报道称 羊 狂 蛆 原是一 种 古 北区的物种，后随人类 和 宿主动物迁移而被带往各地 6； 现
19、在普遍认为羊 狂 蝇 蛆 为全球性 分布，由其幼虫侵袭引起 羊的 狂 蝇蛆病亦在世界各国养羊区 广泛 流行 20。如美国西南部羊 狂 蝇 蛆 感染率为 91.5%，平均感染强度 25.613；法国西南部 感染率为 33.2%，强度 为 4.911； 乌克兰 感染率为 58% 90%，强度 为 1414； 非洲各养羊 区 普遍流行；南非 感染率 73.4%21。由于羊 狂蝇 的感染率随 地区差异而变化 较大，故 只有 调查 地区 相对一致才 具 有可比性。就同一地区而言 ，绵羊的感染率高于山羊 8，夏秋季高于冬春季， 幼龄羊高于成年羊 17。羊 狂 蝇蛆病的致死率不高，偶而可由大量的虫体阻塞呼吸
20、道 致患 羊窒息或继发病菌 感染死亡 22。其发病情况通常在夏秋季成虫大批出 现 时以表现卡他性鼻炎为主要症状，采 食羊只为躲避成虫侵袭常将鼻孔紧帖 于 地面，或将头藏于其他羊只两后肢中间；冬季无明显症状，春季则多 摇头、 打喷嚏 16。 羊 鼻蝇 的宿主特异性较强，通常寄生于羊科动物 6，主要是绵羊 。但达胡巴雅尔等 23报道还可寄生于 骆驼和 驯鹿， 杨晓野等人研究表明驯鹿狂蝇蛆与羊狂蝇蛆 不是 一个 种 22。 1.1.3 发育生物学 在羊 狂 蝇 蛆 各虫态发育 期的研究中对 期 幼虫化蛹、羽化及成虫的寿命研究报道 比 较多，如 Cobbett and Mitchell24观察美国新墨
21、西哥 和 德克萨斯羊 狂 蝇 期 幼虫化蛹需 13 72h，羽化需 17 70 天。印度的 Jagannath25经实验 研究 认为化蛹需13 24h，羽化期 17 37 天，成虫的寿命 为 3 25 天 26。 Fallis27发现在加拿大成虫的存活期为 10 28 天，大多 数在 16 天。我国汪世钟 28，郑经鸿等 20， 张永森等 17报道成虫存活期为 10 天左右。 各国对羊 狂 蝇 各 期 幼虫 寄生所需时间 这一 重要的报道 较 少，美国的 Cobbett24和 Mitchell29首先于 1933 年剖 检 仅有 2.5 3.5 月龄春羔时发现， 并 有成熟的 龄幼虫寄生，从而
22、断定幼虫从 期 到 期 仅用 2.5 3.5 个月的时间。随后他们 捕获 到雌蝇，挤出其腹部的 期 幼虫，然后 人工感染羔羊，隔期剖杀 检查 ，结果发现， 期 幼虫发育为成熟的 期 幼虫，在夏季仅需 25 35 天的时间，而在寒冷的季节里，幼虫则 以 期 幼虫的虫态滞育达 9 个月之久。因此，两位学者 据羊 狂 蝇在夏季化蛹羽化仅需 17 70 天，成虫寿命平均 约 16 天的结论推断：温暖季节里羊 狂 蝇 蛆 整个生活周期约需 3.5 4.5 个月的时间。加拿大学者 Fallis27同样用剖 检 春羔的方法发现，羊 狂 蝇幼虫在初夏的寄生期仅需 30 天，这一点证实了 Cobbett24和Mitchell291933 年的工作结论。 Dorchies11等用同样方法研究认为夏季 期 到 期幼虫的发育时间不到 20 天。 因此，本虫在北方 寒冷地区 每年仅繁殖一代，而在温暖地区则可每年两代。 根据前人对 羊狂蝇 幼虫寄生 期的研究，对世界各地区羊 狂 蝇的年发生世代 归结 如下：
