1、阿司匹林抗血小板聚集及抗血栓形成的作用,血栓形成可导致急性心肌梗死、中风、肺栓塞等心、脑、肺循环疾病，是外科手术中常见的并发症，也是介入性血管形成术后再闭塞的重要因素,血小板活化在心脑血管疾病发病中占有重要地位, 抗血小板聚集药已作为常规治疗用于心脑血管疾病,Background,血栓形成是血液在流动状态下, 止血机制过度激活的一种病理性结局, 是血小板、 白细胞、内皮细胞等多细胞间相互作用的结果, 而血小板的活化和聚集是其中重要因素之一。用电刺激大鼠颈动脉血栓形成, 其原理是损伤动脉内皮, 导致其功能紊乱, 激活白细胞和血小板, 引起血小板聚集, 形成混合型血栓, 此模型重复性好, 误差小,
2、 与人体动脉血栓相似。,小剂量阿司匹林能明显延长电刺激大鼠颈动脉血栓形成时间, 从而说明其有较强的抗动脉血栓形成作用.,在正常的循环血液中, 血小板处于静息状态,而在某些生理或病理状态下, 血小板可以被激活。血小板激活是指血小板在刺激物(诱导剂) 作用下发生的各种改变, 如变形、粘附和聚集等, 其中血小板的活化聚集是血小板的重要改变形式。,阿司匹林已应用百年，成为医药史上三大经典药物之一，至今它仍是世界上应用最广泛的解热、镇痛和抗炎药，也是作为比较和评价其他药物的标准制剂。在体内具有抗血栓的作用，它能抑制血小板的释放反应，抑制血小板的聚集 临床上用于预防心脑血管疾病的发作。,aspirin,血
3、小板活化聚集,AA 途径,ADP途径,PAF途径,阿司匹林,TXA2,腺苷酸环化酶,cAMP,促进血小板聚集,花生四烯酸,环氧化酶,PGG2,PGH2,PGF2,PGE2,还原酶,异构酶,前列环素合成酶,PGI2,血栓烷合成酶,阿司匹林,腺苷酸环化酶,cAMP,抑制血小板聚集,(-),(-),研究和开发疗效好，新型的抗血栓药物是当代医药界的重要任务之一,作为预防血栓性疾病一线用药。选用何种剂量较为合适, 一直是临床争论的问题。,阿司匹林,验证阿司匹林抗血小板的聚集及抗血栓作用,探讨阿司匹林的临床治疗量，指导临床用药,Purpose,Reagents and Instrument,阿司匹林( a
4、spirin, ASP) 结晶花生四烯酸( arachidonicacid, AA )血小板活化因子( platelet activating factor,PAF) 腺苷二磷酸( adenosine diphos2phate, ADP)戊巴比妥钠,三道电子刺激器，超声血液流量计，四道血液凝聚仪，离心机,电刺激大鼠颈动脉血栓形成,雄性SD大鼠40只, 随机分成4组, 每组10只。A 组: 0.19 % NS 作为空白对照组; B-D组:10、20和30 mg/kgASP组。大鼠用30mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,上述各组份均以0.11mL/100g体重大鼠股静脉注射.给药后15min,分
5、离大鼠左颈总动脉, 置两根银制电极,超声探针置远心端, 用电刺激器以115mA的直流连续刺激大鼠颈动脉7min, 用超声血流量仪记录血栓形成时间(即从刺激开始至颈动脉血流量为“零”的时间, occlusion time, OT)。观察刺激开始后60min内的血流量变化, 如血管仍未栓塞,则以60min作为最大OT。,血小板聚集体内试验,健康家兔40只, 随机分成4组, 每组10只。A 组: 0.19 % NS 作为空白对照组; B-D组:10、20和30 mg/kgASP组。给药前取血1次, 然后按上述分组分别沿兔耳缘静脉给药后, 分别于30、60、120 和180 min取血。各时间点所取血
6、液用3.5mg/mL肝素抗凝(血与抗凝剂的体积比为9: 1),收集于塑料离心管中, 以900g离心9min, 取上层液即为富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP),剩余血液继以25000g离心10 min取上层液得贫血小板血浆(platelet-poor plasma PPP)。,实验过程中, PRP中的血小板数应控制在约5 108 cell / mL。按Born比浊法进行血小板聚集性测定, 用PPP 300L 调零, 于比浊管中加入PRP 300L,分别加入3 种诱导剂:AA终浓度0.35 mmol/L, ADP终浓度3mol/L,PAF终浓度7.2nmol/L,
7、并记录300s内最大聚集率。,Results,ASP对电刺激大鼠颈总动脉血栓形成的影响( x s n = 10),ASP对ADP、AA、PAF诱导血小板聚集的影响( x s, n = 10),临床试验设计,1 人体内血栓形成很难直接观察到, 从而给血栓及抗血栓的研究和疾病的防治带来困难。通过模拟血栓状况来判断心脑血管疾病发病期间患者体内血栓形成与栓塞程度, 以此来预测心脑血管疾病前期(潜伏期) 体内隐性血栓的存在和发展, 其临床意义是十分明显的。本实验用CAST仪形成的体外血栓与体内血栓有十分相似的结构, 可分为头体尾三部分。血栓指数Q值下降是因为小剂量阿司匹林使血小板内血栓素(TXA2)的生
8、成减少，从而抗血栓形成。,2 血小板聚集率是间接反应血小板代谢所产生的TXA2的含量与血栓形成的可能性及关联度。血栓形成是反映血液在循环中由血管壁、血小板、血细胞、纤维蛋白原及各种凝血因子在流体效应尤其是在TXA2 作用下所形成的病理性塞子以及其危险性。二者在临床和实验中都呈正相关。,Materials and methods,仪器 CASTI型体外血栓模拟仪，MG型血小板聚集仪， TXA型天平称一般资料 选取符合如下条件的心脑血管疾病患者160 例。无应用 ASP 禁忌证, 用药前测定血小板聚集率 50 %者为入选条件。,服用指征 MASP：10mg片；安慰剂：相当于l0mg片 M ASP大
9、小 MASP服用指征：男性，血栓指数Q值40患者每天餐后分别服用10、20、30、40、50mg；女性，血栓指数Q值8l6者每天餐后服用10mg，余同男性。,临床试验,1、血栓指数Q值：餐后2h用一次性注射器自静脉取血l ml注入硅化硅胶管内，置CAST 一I型血栓仪(37)。自控旋转8min后止。将血栓平铺在滤纸上，测其长度(mm)。再用滤纸吸干水分(以栓体在滤纸上无渗透为准)。用TXA型天平称重量(mg)。,临床试验,2 血小板聚集率(PAG)；用）0.2ml枸橼酸钠加静脉血1.8ml混匀。500rmin分离血小板层，用血小板聚集仪和花生四烯酸（AA）诱导剂测其1min和最大聚集率。3 统
10、计学处理将服用M-ASP和安慰剂前后3、6个月的各项指标作配对比较t检验，并计算x s值。,Expected results,服MASP前血栓指数Q值、小板聚集率与服药后36个月比较血栓指数Q值、血小板聚集率明显下降。,Conclusion,小剂量有明显的抗血小板聚集与抗血栓形成的作用,小剂量阿司匹林在心脑血管疾病中抗血小板疗效显著。,References,1 李家增抗血小板药的临床应用J中国处方药，005，(6)22 BORN G V R1Aggregation of blood p latelets by adeno2 sine diphosphate and its reversal J 1 Nature, 1962,194 (6) : 927 - 9293糜贤凤,闭雄杰,蒋红,等.阿司匹林与血小板抑制关系的临床研究。临床血液学杂志,1998,11:60-63.4 包承鑫. 抗血小板药物研究某些进展J . 中华血液病学杂志, 1990, 11 (10) : 553.5 忻伟均. 阿司匹林每日10mg 治疗脑缺血J . 新药与临床. 1993 ,3(12) :69716 杨荫中译话量阿斯匹林对壶小板聚集和血栓素生成抑毒I的悻外观察医学生物物理学，1992 44,Thank You!,
