1、,肿瘤免疫tumor immunology 林 苹,Contents,前言肿瘤抗原机体抗肿瘤免疫的机制 肿瘤的免疫逃逸机制肿瘤患者免疫功能的检测与免疫诊断肿瘤的免疫治疗,第一节 前 言,肿瘤免疫学概念 研究肿瘤的抗原性和机体对肿瘤抗 原的免疫应答 探索肿瘤发生、发展的免疫学原理 达到用免疫学方法诊断目的 达到用免疫学方法治疗肿瘤目的,肿瘤免疫学发展过程中有代表性的实验研究,1908年 肿瘤从一个动物移植到另一动物、排斥 1943年 Gross用近交系C3H进行肿瘤免疫移植,免疫小鼠对第二次接种发生排斥,未引起关注.,1953 年 Foley用MCA诱发C3H小鼠肉瘤 中途切除 第二次接种 同种
2、肿瘤排斥 异种肿瘤不排斥,Tumor rejection antigens are specific to individual tumors,1957年 Preha 设计了更完善的实验，证明肿瘤致敏的小鼠只排斥该肿瘤，对供体皮肤无排斥作用。,实验研究证实:肿瘤特异性抗原的存在肿瘤抗原诱导的免疫应答具有抗肿瘤作用,机体免疫功能状态 与肿瘤的发生发展,免疫监视机制： 1967年 Burnet提出 NK、 K、 M能识别肿瘤细胞并特异性地杀伤，免疫功能低下或受抑制时，肿瘤发生率上升。,年龄与肿瘤发生的关系,肿瘤发病率最高的婴幼儿期（60y )是机体免疫系统发育不全和功能衰退期。,1、原发性免疫缺陷
3、与肿瘤发生 先天性免疫缺陷患者2-10%发生恶性肿瘤 2、继发性免疫缺陷性与肿瘤发生 实验肿瘤学研究人类继发性免疫缺陷与肿瘤发生 医源性免疫缺陷：由于长期使用免疫抑制剂而引起。,免疫缺陷与肿瘤的发生,医源性免疫缺陷：器官移植：5-6%生癌，高于普通人群100倍。多发瘤：原有肿瘤放、化疗治愈，但又发生另一种肿瘤。自身免疫性疾病：SLE、类风湿、肾病综合征等用细胞毒性药物治疗。,DNCB皮试：肺癌阳性率52%，良性疾患：96% 癌组织中淋巴细胞、 M 、DC、浆细胞浸润反映免疫状态 患者 T细胞、 M 的功能状态与病程、预后有关,机体免疫功能与肿瘤发展 I,肿瘤自然消退和尸检肿瘤的发生率高于发病率
4、，说明机体可正常带瘤生存。 NK活性高低与肿瘤发生发展密切相关，瘤细胞在NK活性低的个体易发生转移，NK活性高肿瘤预后较好。,机体免疫功能与肿瘤发展 II,第二节 肿瘤抗原(tumorantigen),肿瘤抗原概念,定义：细胞癌变过程中出现的新抗原及过度表达的抗原物质的总称 分布：肿瘤细胞表面、细胞浆、细胞核 理化性质：蛋白质，糖蛋白，蛋白多糖或糖脂,肿瘤抗原的产生机制,(1)物理致癌剂: 放射线、热辐射、UV 等，高能量破坏DNA的结构，发生DNA断裂，影响细胞的基因转录、蛋白质合成，产生新的蛋白,（2）化学致癌剂：MCA、DBNA等在体内经代谢活化后产生致癌活性基团，与DNA、RNA结合或
5、使之烷化，出现新的肿瘤蛋白。（3）病毒致癌：病毒基因与宿主基因整合，产生带有病毒蛋白成分的新的抗原蛋白。,（4）致癌因素直接或间接使胚胎基因、癌基因活化。 机体某些基因组去阻抑，胚胎性蛋白重现，使原癌基因突变、活化过量表达出现各种癌基因产物。,抗原分类,根据肿瘤抗原的特异性肿瘤特异性抗原 肿瘤相关抗原,根据编码抗原的基因不同正常基因编码的肿瘤抗原突变基因编码的肿瘤抗原病毒基因编码的肿瘤抗原,根据诱发因素不同理化因素诱发的肿瘤抗原病毒诱发的肿瘤抗原自发肿瘤抗原胚胎抗原,（1）肿瘤特异性抗原（Tumor Specific Antigen,TSA) 仅存在于某种肿瘤细胞的表面，不存在于相应正常细胞，
6、宿主免疫系统将其识别为外来物质，诱发特异的体液和细胞免疫反应。,（2）肿瘤相关抗原（Tumor Associate Antigen,TAA) 并非肿瘤细胞所特有，但在癌变时含量明显增加，因此这类抗原只是量的变化，缺乏严格的特异性，不能引起宿主的免疫反应。,理论上讲TSA显得很重要，但在实际应用中TAA更有意义，如黑色素瘤抗原： I型 个体特异 TSA 用途有限 II型 黑色素瘤共有TAA 用于组织类型相同肿瘤诊断治疗 III型 黑色素瘤及其他正常组织共有TAA 量大于正常组织 有一定诊断价值。,实验动物实验抗原,肿瘤移植实验证明TSTA确实存在，化学、病毒和物理因素诱发的肿瘤同样都有TSA。
7、抗原性的强弱与病因有关：病毒诱发的肿瘤抗原性最强，化学诱发的肿瘤其次，抗原性最弱的是物理因素诱发的和自发的肿瘤。,（1）个体特异性：同一致癌物在同系动物诱发组织类型相同的肿瘤，其抗原特异性有个体差异。 （2）抗原有较强的免疫原性：属膜蛋白，易被机体识别、攻击排斥。,1.化学、物理物质诱发的肿瘤抗原,个体特异性,A,B,remove tumors A & B,2.病毒诱发的肿瘤抗原 （1）同一病毒诱发的不同种属、不同品系动物的肿瘤，即使组织类型不同，都存有相同的肿瘤抗原。 （2）抗原的免疫原性最强,DNA病毒（乳多空、SV40）诱发的肿瘤抗原 TSTA 病毒编码核抗原 肿瘤特异性细胞表面抗原RN
8、A病毒（Rous 、Gross)诱发的肿瘤抗原 TSTA 病毒包膜抗原 病毒抗原 病毒内抗原（含逆转录酶） 病毒相关的肿瘤特异性表面抗原,3.胚胎性抗原,4.自发性肿瘤抗原,自发性肿瘤较化学和病毒诱发的肿瘤抗原性弱，有明显的个体特异性。,人类常见的肿瘤抗原,胚胎抗原 病毒诱发的肿瘤抗原 突变的癌基因与抑癌基因编码的蛋白质 人黑色素细胞瘤上表达的TATAs,分化抗原：人类肿瘤细胞可异常地表达存在于正常细胞上的分化抗原，亦即一些正常抗原出现异常分布。 组织交叉反应抗原：不同个体相同组织类型的肿瘤存在共同的（交叉反应）抗原成分，可被异体的免疫细胞识别。,人类肿瘤抗原,胚胎抗原 AFP 胎肝细胞合成，
9、出生后迅速消失，肝细胞癌变时血清AFP水平明显升高。且比临床症状早 3-8个月，是肝癌的早诊指标。 CEA 存在于2-6月胎儿的肝、肠、胰腺，正常人仅存在于肠腔液、血清中极少。结直肠细胞癌变后，分泌的CEA畸形改变可进入血液。动态监测对评价疗效和判断肿瘤复法有意义。 CA125,：,病毒相关抗原,人黑色素细胞瘤上表达的TATAs,MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE-1、GAGE-2肿瘤胚胎抗原人黑色素细胞瘤和多种肿瘤细胞上表达率较高但在正常成熟组织细胞（睾丸除外）均不表达黑色素细胞瘤特异性免疫治疗的重要靶抗原,肿瘤抗原的分离方法：主要包括超声波、氮气减压法、去污剂抽提、蛋白酶消化、
10、低渗和高渗抽提等方法。纯化肿瘤抗原的方法：主要有凝胶过滤、离子交换层析、聚丙稀酰胺凝胶电泳、电聚焦亲合层析等方法。蛋白组学,肿瘤抗原的研究方法,肿瘤抗原的应用,1、肿瘤的免疫诊断 （1）血清中的抗原（CEA CA19-9等）抗体（EB病毒）的检测。 （2）鉴别诊断：如根据分化抗原的不同区分白血病的类型。2、高危人群的普查3、肿瘤复发、转移的监测及疗效观察、预后判断,4、肿瘤免疫治疗 （1）制备肿瘤单抗用于靶向药物治疗 （2）制备肿瘤疫苗用于特异性主动免疫治疗,5、研究肿瘤抗原在肿瘤发生、发展中的作用 （1）参与细胞间的信号传递：如sis 基因产物P28，erb-2基因产物P65。 （2）物质运
11、输：如唾液酸糖蛋白gp97属转铁蛋白超家族。 （3）细胞间及细胞与基质间的相互作用，如粘附分子与肿瘤的浸润转移有关。,第三节机体抗肿瘤免疫机制,体液免疫应答细胞免疫应答,CDC ADCC调理作用,一、体液免疫,1、CDC（Complement Dependent Cytotoxicity,CDC) (1)机理：IgG 、IgM与癌细胞表面抗原结合，可激活补体系统，其中C8 C9可直接插入细胞膜，最终导致肿瘤细胞的溶解。 （2）意义：溶解分散的悬浮细胞或少量经体液转移的实体瘤细胞,(1) 机理：参与的细胞有 K 、M和粒细胞， 这些细胞表面有Fc受体。 当抗体的Fab端与瘤细胞表面抗原结合后，其
12、Fc段可与效应细胞上的Fc受体结合，激活效应细胞，破坏肿瘤细胞。 （2）意义： ADCC作用比CDC更有效。需抗体量少，这种抗体比CDC中的抗体产生地快，在肿瘤形成早期有重要的免疫监视作用。,2、ADCC(Antigen Dependent Cell-mediated Cytotoxicity),抗体与肿瘤细胞表面抗原结合后，可修饰其表面结构，从而干扰肿瘤细胞的粘附特性，有助于控制肿瘤细胞的生长和转移。 粘附特性的重要性体现： 1）是瘤细胞建立克隆所必需的 2）肿瘤播散之前，循环中的瘤细胞需先与血管内皮细胞发生粘附,3.抗体修饰肿瘤细胞表面结构,4、Ab封闭肿瘤细胞上的某些受体：如用抗体封闭肿
13、瘤细胞表面的转铁蛋白受体，阻碍其功能，抑制细胞增殖。5、免疫调节作用抗体存在条件下，可增强效应细胞的作用。,二、细胞免疫机制,细胞免疫T 细胞NK 细胞mLCKTILK细胞DC,1、T细胞 抗肿瘤的T细胞免疫效应包括两种T细胞亚群的功能： MHC-II类限制性的Th: CD3+CD4+CD8- MHC-I类限制性的Tc(CTL):CD3+CD8+CD4-,T细胞活化需要双重信号刺激Th第一信号: APC表面MHC-II类递呈的肿瘤抗原 第二信号:APC表面的共刺激分子,如B7,ICAMCTL 第一信号:MHC-I 类分子递呈的肿瘤抗原肽 第二信号:细胞因子(如IL-2 等)的辅助作用,T细胞抗
14、肿瘤作用的机制： CD4+Th 细胞 识别由13-17个氨基酸残基组成的抗原肽，受 MHC类分子限制 产生大量细胞因子促进CD8+T细胞活化激活B细胞、巨噬细胞、NK细胞 参与抗肿瘤作用,2. CD8+细胞毒性T细胞 识别由8-10个氨基酸残基组成的抗原肽，受MHC类分子限制 CTL特异性识别杀伤肿瘤抗原 （直接杀伤）分泌细胞因子如IFN-、TNF- (间接杀伤),颗粒酶granzyme是一组丝氨酸蛋白酶，具有胰蛋白酶特征，表达酯酶活性。 穿孔素(perforin)是一种糖蛋白，具有补体C9样的成孔功能区，能聚合成多聚穿孔素，插入靶细胞膜形成穿膜的管样结构。,Killing of tumor
15、cells by CTL,CTL抗肿瘤机制,2、NK细胞：CD3-CD16+CD56+ （1）概念：NK细胞是不依赖胸腺，不依赖抗体或补体，不需预先致敏即能分泌细胞因子和杀伤肿瘤细胞的细胞。 NK先于T细胞发挥作用，被认为是抗肿瘤的第一道防线。 （2）NK杀瘤机制： 直接细胞溶解:通过表面受体（NKR)、识别结合杀伤瘤细胞。 NK迅速分泌大量细胞因子（IFN-、 TNF-、GM-CSF、IL-3、M-CSF)，这些细胞因子的主要意义是调节吞噬细胞的功能。,作为APC可启动抗肿瘤免疫反应 潜在的抗肿瘤效应细胞 肿瘤抗原、MAF、 IFN- 、 TNF、 CSF等可激活M 的杀瘤活性。,3、巨噬细
16、胞（Macrophage, M),M 识别和溶解肿瘤细胞的可能方式：（1）处理和递呈抗原，激活T细胞，产生特异抗肿瘤免疫应答。 （2）直接杀伤瘤细胞：与肿瘤细胞密切接触、膜互融，溶酶体进入靶细胞，使其溶解破坏。 （3）ADCC作用： M 表面有Fc受体。 （4）激活的M 分泌细胞毒介质IFN-、 TNF等参与杀伤。,NK细胞或淋巴细胞在细胞因子(IL-2)诱导下形成的一类对肿瘤细胞具有杀伤活性的细胞； 溶瘤作用是MHC非限制性的 抗瘤谱更广 过继性细胞免疫治疗。,4. LAK细胞(lymphokine activated killer cells),是存在于肿瘤组织间质内的以淋巴细胞为主的异质
17、性淋巴细胞群体 TIL具有比LAK细胞更强的抗肿瘤作用。,5.肿瘤浸润淋巴细胞TIL(tumor infiltrating lymphocyte),一类特殊的、缺乏T、B细胞标志的淋巴样细胞。 细胞表面存在Fc受体、C3b受体 没有肿瘤抗原结合受体； 通过ADCC效应发挥抗肿瘤作用。,6. K细胞,抗原递呈细胞（APC）,树突状细胞 dendritic cell, DC巨噬细胞 macrophage,proDC-preDC-imDC-mDC,Ag,Indirect Antigen Presentation,第四节肿瘤免疫逃逸机制,与肿瘤细胞有关的因素与宿主有关的因素,一、与肿瘤细胞有关的因素,
18、肿瘤细胞的免疫原性弱及抗原调变肿瘤细胞表面“抗原覆盖”或被封闭肿瘤细胞MHC类分子表达低下或缺失肿瘤细胞缺乏协同刺激分子肿瘤细胞分泌免疫抑制因子,Escape from immunosurveillance,抗原调变,肿瘤细胞膜构成与行为的改变，而致细胞膜表面抗原不能被识别抗原调变，抗原可减少、减弱或丢失、重新分布-暂时失去抗原,Escape from immunosurveillance,“抗原覆盖”或被封闭,抗原封闭 可溶性抗原分子 +抗体=复合物抗体Fc段+FcR 封闭FcR 妨碍ADCC,可溶性抗原封闭抗体,抗体Fc段+FcR 封闭FcR 妨碍ADCC,缺乏MHC I分子,缺乏协同刺激
19、分子,肿瘤分泌免疫抑制分子,二、与宿主免疫系统有关的因素,机体免疫系统功能障碍先天性免疫缺陷后天获得性免疫功能低下者肿瘤直接或间接抑制机体免疫功能恶性肿瘤可直接侵犯免疫器官激活体内抑制性免疫细胞,免疫抑制,1967年Burnet 免疫监视： 1011细胞复制，10710细胞突变,及时识别和清除 免疫机能低落时,免疫监视作用减弱,不能及时地、有效地将恶变细胞消灭，导致肿瘤的发生与发展。 肿瘤诱发免疫抑制,肿瘤诱导产生免疫抑制细胞,Ts: CD4+ or CD8+ 抑制B 、Th、TcTregsMacrophage ：过度激活 分泌可溶性抑制物（前列腺素、活性氧分子） 抑制 lymphocyte
20、proliferation NK、CTLNS：大颗粒lymphocyte, 抑制T cell,免疫耐受,抗原量少，抗原性弱，多次刺激宿主并能诱发宿主脱敏。,肿瘤细胞免疫赦免,肿瘤细胞造成局部微环境的免疫逃逸 FasL FasR抗原提呈功能障碍：体内、局部,免疫刺激说,挑战 早期肿瘤患者的T细胞在低度效/靶比率时，可表现其对体外肿瘤细胞有刺激生长效应 肿瘤抗原刺激淋巴细胞增殖信号,第五节肿瘤患者免疫功能的检测与免疫诊断,肿瘤标志物的免疫学检测肿瘤抗体的检测肿瘤病人免疫功能状态的检测,肿瘤标志物 (Tumor Marker),1978年Herberman在美国NCI召开的“人类肿瘤免疫诊断”会上提
21、出。 定义：是指肿瘤组织和细胞由于癌基因、抑癌基因或其它肿瘤相关基因及其产物异常表达所产生的抗原和生物活性物， 可在肿瘤患者组织、体液及排泄物中检出。,TM分类,原位性肿瘤相关物质 Bence-Jones蛋白 异位性肿瘤相关物质 NSE 胎盘和胎儿性肿瘤相关物质 病毒性肿瘤相关物质 癌基因、抗癌基因产物,肿瘤标志物在临床应用的价值和意义个有所长,甲胎蛋白（AFP) AFP在胚胎肝脏和卵囊合成，出生后含量很低。新生儿AFP可高达50000-150000ng/ml, 一岁急速下降，正常人血清甲胎蛋白含量在25ng/ml以下。,原发性肝细胞癌患者血清中甲胎蛋白含量多在300ng/ml以上。在排除其他
22、因素引起的AFP高以外，结合定位检查，即可做出肝癌的诊断。 AFP低持阳者是一组肝癌高危人群，应对其进行密切随访观察。 甲胎蛋白含量虽不高，但持续阳性，或随病情进展而上升，提示肝癌发展趋势。,癌胚抗原 （Carcinoembryanic Antigen) 1965年由Gold和Freeman等首先从大肠癌中发现，现发现除在胚胎性肿瘤组织外，在成人结肠、胃、肺、乳腺等腺癌组织中表达。,放射免疫法或酶联免疫法测定 正常人血清 低于5ng/ml, 5-10ng/ml时可疑，大于20ng/ml以上时，极有可能为癌症，不能单一凭证。 82%结直肠癌、56%肝癌、38%胰腺癌患者CEA增高，呈“宝塔”状，
23、食管癌阳性低。,一些非肿瘤患者（如结肠多发性息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎、肝硬变）血清中可有一过性增高。 肿瘤早期诊断不敏感，可用于肿瘤发展的监测，疗效判断和预后估计，肿瘤复发的参考指标，化疗后一过性升高。 CA19-9、 CA125 、 CA424,肿瘤抗体的检测,间接免疫荧光法或间接酶联免疫法检测 血清中EBV抗体 鼻咽癌（如VCA- IgA抗体EA-D-IgG) 和Burkitt淋巴瘤（如膜抗体）的辅助诊断。 EBV-VCA-IgA 抗体 NPC阳性率 93%,对肿瘤患者免疫功能系统的免疫学分析,T细胞检测 外周血淋巴细胞计数 T细胞计数及亚群：CD3、4、8单克隆抗体 E花结形成细胞（E
24、-RFC、 CD2） 淋巴细胞转化实验：PHA 、ConA 细胞介导的淋巴细胞毒性试验（测CTL 、 LAK等活性） 结核菌素（或SK-SD DNCB DNFB)试验 移动抑制试验（对白细胞和巨噬细胞）,NK细胞活性测定 抗体和B细胞检测 Ig定量测定：IgG、 IgM 抗体形成能力检查:伤寒菌苗激发或锡克试验 外周血淋巴细胞计数：SmIg 免疫荧光检查,吞噬细胞检测 外周血白细胞计数和分类: 中性粒细胞、单核细胞 趋化试验 粒细胞吞噬和杀菌功能试验 NBI还原试验及/或化学发光试验 斑菌素发疱吞噬试验,判断其预后和疗效 T细胞亚群： CD3 、CD4、 CD8 CTL、 LAK活性 T-AN
25、AE NK 活性,其 他,淋巴细胞亚群分离 FACS Beads,应用技术,血清学诊断 ELISA RIA 抗体芯片免疫组织化学免疫显像基因诊断研究及抗癌药物筛选,生物芯片,微阵列技术是在一小片固相载体上存储大量的生物信息 具有高通量的优势基因芯片组织芯片蛋白芯片抗体芯片,第六节肿瘤的免疫治疗,运用免疫学原理达到治疗肿瘤的手段属于肿瘤综合治疗之一,肿瘤免疫治疗原则,早期 或手术减少到最小负荷：少于106患者要有一定的免疫功能： 手术减轻抑制 放化疗对其有损伤多靶点,间接或直接 宿主 肿瘤 防御能力 更敏感 有害反应 改变微环境 增殖 侵袭 能力 耐受力 转移 损伤修复 转化 分化、成熟、逆转
26、正常,免疫治疗分类,特异性 主动免疫治疗（疫苗） 被动免疫治疗（单抗） 继承性细胞免疫治疗CTL 非特异性 主动免疫治疗（免疫调节剂） 继承性细胞免疫治疗 (LAK 、TIL、CD3AK),免疫调节剂在肿瘤治疗中的研究,细菌制剂及其产物，干扰素及其诱导剂，植物多糖双向作用 卡介苗、短小棒状杆菌、OK-432、中草药 CpG-ODN,细胞因子在肿瘤治疗中的应用,细胞因子是指一类由免疫细胞和相关细胞产生的调节细胞功能的高活性多功能蛋白质多肽,目前已成功地制备并纯化了大量的人、牛、鼠的重组IL-2 IL-2处于调节免疫应答的细胞因子网络的中心环节,IL-2的作用,在荷瘤小鼠模型上观察到单独高剂量静脉
27、注射 IL-2有显著的抗肿瘤效果。但临床试验的效果并不理想，一般可用作局部治疗，包括瘤内注射、胸腔内注射、膀胱内灌注等。 多用于LAK细胞及其他继承性细胞免疫治疗的联合应用，对IL-2的基因导入亦有较多的研究。IL-2全身应用时毒副作用明显。,荷瘤鼠肿瘤的出血、坏死TNF-a 巨噬细胞TNF- 活化的淋巴细胞淋巴毒素直接杀瘤，损伤肿瘤血管内皮，促进血栓形成，抑制肿瘤生长、转移。调控细胞因子网络细胞生长、增长和分化，诱导巨噬细胞分泌细胞因子（GM-CSF,IL-1, IL-2, IL-6, IFN）,TNF,局部瘤内、瘤周、腔内。 皮肤癌、黑色素瘤、胸腹水全身联合 毒性反应明显,由成纤维细胞、内
28、皮细胞、活化的巨噬细胞产生。刺激骨髓粒细胞定向造血干细胞向中性粒细胞分化、增殖，进入血细胞。临床应用： 减轻放、化疗引起的骨髓抑制，恢复外周血WBC 体外高剂量化疗后自体骨髓移植 外周血造血干细胞移植,G-CSF粒细胞集落刺激因子,发 展,改造细胞因子剂型，减轻毒副反应，延长体内生物半衰期，定向缓释多因子综合治疗体外诱导 LAK,CTL, CD3AK. DC基因治疗疫苗 继承治疗,继承性细胞免疫治疗（Adoptive Cellular Immunotherapy),给患者转输免疫细胞以传递并发挥其免疫效应，达到治疗肿瘤和其它疾病的目的。 LAK、CD3-LAK CD3AK、 TIL 、CTL,
29、LAK,前体细胞 大颗粒淋巴细胞能够被IL-2活化成抗肿瘤细胞的细胞均可称为LAK细胞杀伤作用：识别对胰蛋白酶敏感的蛋白质标志物。杀伤肿瘤，不杀伤正常细胞直接杀伤分泌细胞毒颗粒穿孔素 分泌细胞因子,CTL,特异抗肿瘤免疫的主要效应细胞 CD8+ CD3+CD4+CD8- TCRab CD3+CD4-CD8- TCRrd 非 MHC限制,CIK细胞治疗,CIK细胞： 将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞， 兼具T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的广谱的杀瘤优点 新一代肿瘤继承性细胞免疫治疗的首选方案,单克隆抗体治疗,抗体库制备单抗,国产人源化EGFR单抗实
30、体肿瘤治疗新药泰欣生 美国食品药品管理局（FDA）批准美国ImClone系统有限公司的西妥昔单抗（cetuximab/Erbitux）合用放射疗法治疗手术不能切除的头颈部鳞瘤 利妥昔单抗治疗恶性淋巴癌症（弥漫大B细胞淋巴癌症和肿瘤、惰性淋巴癌症和肿瘤(FL)的一线治疗 ）,抗体药物 抗体毒素 抗体核素 双功能抗体 独特型抗体 基因工程抗体,鼠源问题、抗原特异性、抗原异质性体外预先用单抗处理骨髓，杀死隐藏在面的癌细胞，再回输给患者。,抗体导向酶前体药物疗法 溶酶体内 降解性的导向治疗药物 生长因子受体单抗 抗血管 人源化抗体 抗体库技术 所有抗体可变区基因 + plasmid, phage Ag
31、 fish out 特异的 Ab 问题:未免疫 亲合力低 完全性,新的思维：,主动免疫治疗（疫苗）,肿瘤疫苗或主动特异性免疫治疗（Active Specific Immunotherapy,ASI),又称肿瘤疫苗治疗：利用肿瘤细胞（或肿瘤抗原）或和修饰过的肿瘤细胞物质，诱导机体的特异性抗肿瘤活性，以阻止肿瘤的生长、扩散和复发。,主要在于提高抗原性、刺激免疫反应能力,肿瘤ASI的条件,分类,粗制抗原+佐剂小分子肽细胞：灭活、 凋亡基因工程疫苗核酸疫苗： DNA、RNA抗独特型抗体异种疫苗DC疫苗,活的肿瘤细胞疫苗,用自体或异体瘤细胞制成，仅见于动物试验,灭活的肿瘤细胞疫苗,制备简便、易行，但有一
32、定盲目性。,修饰或改变的肿瘤细胞疫苗,物理：加热、冷冻、照射化学：碘乙酸盐、牛血清白蛋白重组病毒疫苗用酶处理肿瘤细胞如刀豆素A、霍乱弧菌神经氨酸酶、木瓜蛋白酶（papain）或ConA等，可去除肿瘤细胞表面的唾液酸暴露肿瘤抗原，增强其免疫原性共刺激分子修饰肿瘤细胞加入BCG佐剂或预先给予环磷酰胺等处理肿瘤细胞,亚细胞成分疫苗,提取分离细胞膜成分、粗制的细胞浸出物及纯化可溶性表面TAA而制得疫苗,人工合成抗原多肽,免疫机制研究发现CD8+T细胞所认别的是蛋白质一级结构中的一小段肽。有一些小肽合成成功，并作为瘤苗进行了一些研究。,基因工程疫苗,采用基因转导的方法以某些功能基因修饰肿瘤细胞，提高其免
33、疫原性或活化效应细胞的能力，制成的疫苗称为转基因疫苗。,基因工程疫苗：用逆转录病毒、腺病毒等载体将外源基因靶向导入肿瘤细胞内重组病毒疫苗外源基因与灭活病毒 (如SV40、痘苗病毒、腺病毒等 )重组后制成的疫苗将相关基因导入抗原提呈细胞,细胞因子基因工程瘤苗,IL-2、 IL-4 、IL-6、IL-7 、TNF、 IFN- 、M-CSF 、GM-CSF ,IL-12、 Flt3 、,MHC抗原和共刺激分子、粘附分子基因瘤苗,B7多基因导入 MHC-I 、 MHC-II B7和IL-12基因导入Lewis肺癌，其诱导的CTL活性比单独基因导入的疫苗诱导的CTL活性强的多,肿瘤抗原基因瘤苗,HER2
34、/neu、CEA、MART-1、gp100、MAGE、酪胺酸酶等。新基因 将编码上述肿瘤抗原的基因转导到肿瘤细胞中，可有效提高瘤苗免疫原性。肿瘤抗原基因修饰DC等抗原提呈细胞更是一种值得重视的瘤苗设计方案。,核酸疫苗,即裸DNA肿瘤疫苗。将携带肿瘤抗原基因(特定编码序列及含有必要表达调控原件)的表达型质粒，通过基因枪皮内注射、肌注、脂质体包裹等手段，直接在体内表达，诱导高特异性的抗肿瘤免疫应答。直接注射到肌肉等部位比蛋白或肽疫苗免疫效果好，且保护反应持续时间长。其原因之一就是质粒DNA骨架结构中存在的某些特征性序列(immunostimulaty sequence , ISS)能起到免疫佐剂的
35、作用，可使免疫反应强度增加，倾向TH1介导应答并有利于免疫记忆的产生。,实验表明：B16黑素瘤裸鼠模型，皮下注射人黑素瘤相关抗原gp100表达质粒，每次注射62.5ng即可产生明显的抗肿瘤保护作用。同时导入GM-CSF表达质粒可明显抑制肿瘤生长。 构建出一种双基因表达质粒，它可以明显提高疫苗的作用。,抗独特型疫苗,表达于肿瘤细胞的肿瘤相关抗原刺激小鼠产生相应的抗体(Ab1),用这种Ab1免疫另一小鼠可诱导产生针对Ab1的抗独型抗体,其中Ab2（模拟肿瘤相关抗原）注入荷肿瘤的动物或病人可诱导出称之为抗-抗-独特型抗体的Ab3，由于这种Ab3与最初肿瘤相关抗原所诱导的Ab1具有相同的抗原特异性，因此又称为Ab1,树突状细胞（Dendritic cell)对肿瘤抗原有效提呈，能有效刺激静息的T淋巴细胞，诱发初次免疫应答，而巨噬细胞和B细胞均需激活后才能进行有效的抗原提呈。,树突状细胞疫苗,诱导 来源 人 鼠 条件分化 前体imDC mDC疫苗 抗原多肽 肿瘤mRNA 基因修饰 细胞因子,Thank you,
