1、第九章 革兰阴性球菌,奈瑟菌属 （Neisseria）,奈瑟氏菌属是一群革兰阴性球菌，常成双排列，无鞭毛，无芽胞，有菌毛 。人类为奈瑟氏菌属的自然宿主，在奈瑟菌属10个种中，对人致病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，两种细菌DNA序列有70的同源性，其余8个种视为条件致病菌。主要区别点为，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系统疾病；而脑膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。脑膜炎奈瑟菌有多糖成分。,第一节 脑膜炎奈瑟菌,N. meningitismeningococcus,1. 脑膜炎奈瑟菌,脑膜炎奈瑟菌（N. meningitidis）简称为脑膜炎球菌（meningococcus），是
2、流行性脑膜炎（简称流脑）的病原菌。,脑膜炎奈瑟菌,1.1 生物学性状形态,脑膜炎奈瑟菌纯培养的镜下形态（革兰染色）脑膜炎奈瑟菌为革兰染色阴性，常呈双排列，直径约为0.6-0.8m的双球菌。单个菌体呈肾形或豆形。成双排列时，两个凹面相对。无鞭毛，不形成芽胞。新分离菌株大多有荚膜和菌毛。,在脑脊液(CSF)直接涂片中，常位于中性粒细胞内外。,1.1 生物学性状培养,专性需氧，但在5%10% CO2条件下生长最佳。营养要求高，需血液血清，最常用巧克力平板。形成光滑透明“露滴样”菌落。可产生自溶酶，需及时转种，培养物如不及时转种，超过48h可死亡。,巧克力平板：成分：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），氯
3、化血红素，万古霉素（多粘菌素），辅酶A制法：取所需要量的普通营养琼脂，加蒸馏水溶解后，高压灭菌。冷却至60度左右加入一定量的羊血，置85度水浴中摇动10-15分钟，冷却到50度左右后加入相应量的万古霉素和辅酶A，摇匀后倾注平板。用途：除可以分离奈瑟菌，嗜血杆菌外，由于加入了万古霉素，可抑制绝大多数的革兰阳性菌的生长，在分离培养基上具有重要意义。血液中有V、X因子是位于红细胞中的，一般细菌不能利用，轻微的加热使红细胞破坏释放到细胞外方可利用。,脑膜炎奈瑟菌在巧克力琼脂平板上的菌落特征,脑膜炎奈瑟菌在巧克力平板上形成圆形、凸起、湿润、光滑、透明露滴状菌落。,血平板：成分：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼
4、脂），脱纤维羊血制法：取所需要量的普通营养琼脂，加蒸馏水溶解后，高压灭菌。冷却至50度，加入一定量（5%）羊血，倾注平板。用途：适于各类细菌的生长。,脑膜炎奈瑟菌在血琼脂平板上的菌落特征,脑膜炎奈瑟菌在培养基上形成圆形隆起、表面有光泽、透明或半透明、直径约1mm5mm的露滴样粘液型菌落。无色素形成。血平板上无溶血现象。,1.1 生物学性状生化反应,可产生自溶酶，人工培养时若不及时移种，48h后菌体自溶。大多数脑膜炎奈瑟菌分解葡萄糖和麦芽糖，产酸，不产气。氧化酶和触酶实验阳性。,1.1 生物学性状抗原构造,根据荚膜多糖抗原不同，分为13个血清群。目前我国流行的血清群，95%以上A群，B群次之，C
5、群较少见，但致病力最强。,1.1 生物学性状抵抗力,很弱：对干燥、热力、化学因素敏感，室温3h即死亡。各种消毒剂敏感。,1.1 生物学性状致病性及免疫性,致病物质荚膜（抗吞噬作用，增强细菌侵袭力）菌毛（黏附细胞表面，利于进一步侵袭）内毒素（主要致病物质）所致疾病流行性脑膜炎（简称流脑）人类是唯一的易感宿主，常存在于患者或带菌者的鼻咽腔黏膜中，主要通过飞沫直接从空气中传播。致病机制目前尚未完全清楚。免疫性6月2岁年龄组婴儿免疫力最低，是易感人群,1.2.1 标本采集与分离培养,1.病人脑脊液、血液和出血点渗出液的分离培养脑脊液离心取上清液检测脑膜炎奈瑟菌特异抗原，沉淀物直接接种巧克力琼脂平板，5
6、%CO2，37培养，同时直接染色镜检。病人急性期静脉血用葡萄糖血清肉汤增菌， 5%CO2，37培养24-72h。每日从肉汤培养物中取样分离培养，余下的血液分离血清检查抗原和抗体效价，病人恢复期血液血清也检测抗体效价。新鲜出血点渗出物接种巧克力平板，同时直接染色镜检。2.健康者咽拭子的分离培养咽拭子直接接种含多粘菌素B和万古霉素的巧克力平板。,1.2.2 脑膜炎奈瑟菌的鉴定,生化鉴定（光滑露珠样菌落）,氧化酶： +DNA酶： - 营养琼脂生长： -葡萄糖： +麦芽糖： +,氧化酶又名细胞色素氧化酶(C)、或呼吸酶。原理：氧化酶在有分子氧或细胞色素C存在时，可氧化四甲基对苯撑二胺出现紫色反应。用于
7、检测细菌是否有该酶的存在。细菌在与试剂接触10秒内呈紫红色，为阳性。,氧化酶实验(oxidase test),1.3 鉴 定 标 准,1.菌体和菌落特征典型。2.生化反应为分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气。3.普通培养基上不生长。4.能与脑膜炎球菌分群诊断血清发生凝集反应。,1.4 防治原则,综合性预防措施隔离病人、检查带菌者、预防性投药，室内通风流脑疫苗：6个月-2岁接种两次，间隔1月A群脑膜炎球菌多糖抗原。制备疫苗青霉素、磺胺大剂量治疗,脑膜炎接种,第二节 淋病奈瑟菌,Gonococcus,淋病奈瑟菌,通称淋球菌，是淋病的病原体。主要引起人类泌尿生殖系统黏膜的急性或慢性化脓性感染。淋病是危害比
8、较大性传播疾病，也是目前我国流行的发病率最高的性传播疾病。,2.1 生物学性状形态,革兰染色阴性，0.6-0.8m 肾形、成双排列有菌毛，无芽胞和鞭毛，新分离株有荚膜,2.1 生物学性状形态,男性急性淋病患者的尿道分泌物标本直接涂片,淋球菌（n. gonorrhoeae）为严格的人体寄生菌，常存在于急性尿道炎与阴道炎的脓性分泌物的白细胞中，形态染色类似于脑膜炎球菌。图片显示白细胞内挤满了革兰阴性双球菌，此种表现为典型的淋病柰瑟菌的特征。,男性慢性淋病患者尿道分泌物涂片（革兰染色）急性病人：细菌位于中性粒细胞内慢性病人：细菌位于细胞外,女性急性淋病患者阴道分泌物涂片（革兰染色）,2.1 生物学性
9、状培养,专性需氧，首次分离时，需供给5%CO2。营养要求高，常用巧克力平板。抵抗力弱，不耐干燥和寒冷，对一般消毒剂敏感，对磺胺、青霉素较敏感，但易产生耐药性。,2.1 生物学性状生化反应,生化反应只分解葡萄糖，产酸不产气，不分解其它糖类。不分解麦芽糖，区别于脑膜炎球菌。氧化酶及触酶试验均阳性。,淋病奈瑟菌在血琼脂平板上的菌落特征,淋病柰瑟菌在血琼脂平板上，菌落较小、光滑凸起，无色透明或呈灰白色,淋病奈瑟菌在巧克力琼脂平板上的菌落特征,淋病奈瑟菌在巧克力琼脂平板上，菌落较小，凸起，光滑，圆形，无色或灰白色,与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能在巧克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小S型呈
10、滴露样菌落,2.1 生物学性状主要菌体表面抗原构造,菌毛与粘附有关，免疫原性不强脂多糖抗原经常变异，相应抗体不能防止再感染外膜蛋白PI：主要外膜蛋白，将淋病奈瑟菌分为18个血清型PII：吸附易感细菌的蛋白,2.1 生物学性状致病物质及所致疾病,致病物质菌毛脂多糖（内毒素）淋病人类是淋球菌唯一的天然宿主。成人淋病绝大多数通过性接触感染，是重要的性传播疾病（sexually transmitted disease，STD），目前我国流行的发病率最高的性传播疾病。新生儿淋球菌性眼结膜炎“脓漏眼”,2.2 细菌学检查,标本采集与注意事项 男性 急性尿道炎患者尿道脓性分泌物；慢性尿道炎患者要求在尿道口内
11、3-4cm处采样；前列腺炎患者采前列腺液。女性 尿道炎患者采尿道分泌物；宫颈炎患者在宫颈口内1-1.5cm处取样。取时用特制棉签旋转数周，并停留数秒种后取出。最好床旁接种，或立即置运送培养基中，尽快送至实验室接种培养。保暖（运送时35C保温）、保湿、立即送检,检验方法,直接涂片镜检 对男性尿道炎患者镜下见大量白细胞，其内有革兰阴性双球菌可判为阳性。分离培养与鉴定 巧克力色培养基快速诊断法 ：观察典型菌落。ELISA法、核酸杂交、PCR技术生化反应免疫学实验药敏实验,淋病奈瑟菌鉴定依据：,1. 涂片染色为革兰阴性双球菌； 2. 巧克力平板上为半透明、灰白色、凸起滴露状菌落；3. 氧化酶及触酶均阳
12、性； 4. 只分解葡萄糖，产酸不产气；5. 血清学试验阳性。,2.3 细菌鉴别,1.与脑膜炎奈瑟菌鉴别 脑膜炎球菌可发酵葡萄糖，麦芽糖产酸，淋球菌只分解葡萄糖产酸，还可用血清学试验加以鉴别。2.与其他奈瑟菌鉴别 一般没有必要鉴别。 利用细菌形态、色素、糖发酵试验。,2.4 防治原则,预防淋病应防止不正当的两性关系。新生儿1%硝酸银滴眼，或红霉素、四环素眼药膏。药物首选青霉素，但多有耐药性，应用新型青霉素族抗生素。,脑膜炎奈瑟菌与淋病奈瑟菌比较,脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌,相似点：生物学性状差异：荚膜：有荚膜（脑），分离初期有荚膜（淋）；质粒：很少有质粒（脑），有质粒（淋）；所致疾病：引起脑膜炎（脑），引起泌尿生殖系统疾病（淋）;感染部位不同，标本取材部位不同。,两者关系,Thanks!,
