狂犬病病例个案调查表.doc

1、附表 1 狂犬病病例个案调查表县（市）名称： 国标码： 病例编号：1、一般情况1.1 姓名： 1.2 性别：1 男 2 女 1.3 年龄： 岁 1.4 职业：1 农民 2 工人 3 学生 4 散童 5 其它 1.5 详细住址： 省（自治区、直辖市） 市（地区） 县（区）乡（镇、街道） 村（居委会） 组（门牌号）2、暴露（被伤）及伤口处理情况2.1 暴露（被伤）日期： 年 月 日 时2.2 暴露详细地址： 省（自治区、直辖市） 市（地区） 县（区）乡（镇、街道） 村（居委会） 组（门牌号）2.3 暴露方式: 1 咬伤 2 抓伤 3 其它 2.4 暴露程度：1 度 2 度 3 度2.5 暴露部位（

2、可多选）：1 头面 2 颈部 3 躯干 4 手臂 5 手部 6 下肢膝以上 7 下肢膝以下 2.6 伤口处理：1 未处理（转至 3） 2 自行处理 3 医疗机构处理2.6.1 处理时间： 年 月 日 时2.6.2 处理单位：1 村卫生室 2 乡镇卫生院 3 县级及以上医疗机构 4 其他 2.6.3 处理方式（可多选）：1 挤压出血 2 冲洗 3 消毒 4 伤口缝合 5 其他 3、预防注射3.1 暴露免疫史：1 有（免疫时间 年 月 日， 免疫针次 针） ，2 无3.2 暴露后抗血清注射：1 有，2 无（转至 3.3）3.2.1 种类：1 免疫球蛋白 2 抗血清3.2.2 注射时间： 年 月 日

3、3.2.3 注射剂量： 3.2.4 有无过敏：1 有（过敏表现： ） 2 无3.3暴露后人用狂犬病疫苗注射：1 有，2 无（转至 4）3.3.1 注射单位：1 村卫生室 2 乡镇卫生院 3 县级及以上医疗机构 4 其他 3.3.2 种类：1 Vero 2 地鼠肾3.3.3 首针时间： 年 月 日 时，首针剂量：1 剂 2 剂3.3.4 免疫程序：1 0-3-7-14-28 2 其他 3.3.5 疫苗注射 针次，如未全程，原因： 3.3.6 是否加强注射：1 是（加强针次： 针） ， 2 否3.3.7 疫苗生产单位： ，批号： ，失效期： 年 月 日4、临床资料4.1 发病时间： 年 月 日 4

4、.2 死亡时间： 年 月 日4.3 诊断单位：1 村卫生室 2 乡镇卫生院 3 县级及以上医疗机构 4 其他 4.4 发病临床症状（可多选）：1 烦躁 2 恐水 3 怕风 4 畏光 5 抽搐 6精神失常5、实验室检测5.1 采样时间： 年 月 日 5.2 标本种类：1 唾液 2 脑脊液 3 尿液 4 鼻咽洗液 5.3 检测项目：1 病原检测 2 核酸检测 5.4 检测结果：1 阳性 2 阴性6、伤人动物情况6.1 动物种类：1 狗 2 猫 3 其它 6.2 伤人动物来源：1 自家养 2 邻居养 3 流浪动物 4 野生动物 5 其它 6.3 若为家养动物，是否接种兽用狂犬病疫苗：1 是（接种日期

5、： 年 月 日） ，2 否6.4 动物伤人原因：1 主动袭击 2 自卫伤人 3 嘻逗 4 其他 6.5.是否同时咬伤多人：1 是，2 否6.6 伤人后：1 如常（转至 7） 2 打死 3 失踪 4 病死 5 宰杀 6 其他 6.6.1 死亡时间： 年 月 日6.6.2 动物死后处理方式：1 焚烧 2 深埋 3 出售 4 丢弃 5 屠宰剥皮 6 烹食 7 其它 7、如为一犬伤多人7.1 共伤 人 7.2 本例为第 例次 7.3 共死亡_人被调查人与患者关系： 调查人签名： 调查人单位： 调查日期： 年 月 日填表说明1 在所选项目前的“”中，划“”作为选择答案，若无特殊说明，所有选项均为单选。凡

6、有“ ”的选项，须填写相应内容；2 病例编号填写规定：年号（两位数） 、流水号（后边三位）3 “2.4 暴露程度”参照 WHO 建议分类标准分为以下三类：度：被犬舔过无开放性伤口的健康皮肤和粘膜；度：裸露的皮肤或粘膜被轻轻咬过，表面划伤，但没有破口；度：任何部位的皮肤或粘膜，一处或多处被咬破或抓穿。附表 2 狂犬病人标本送检登记表编号 患者姓名 性别 年龄 职 业 住 址 临床诊断 发病日期 采样日期 标本种类 检验项目 备注送检单位：_ 采样人：_送检人： _ 送检日期：_年_月_日附表 3 狂犬病病原学检测结果登记表检测项目 标本类型 采集日期 采集 人 检测方法 检测结果 检测日期 检测

7、 人 备注核酸检测抗原测定填表人： 填表日期： _年_月_日附表 4 狂犬病暴露人群门诊登记表1 县(市、区、旗) 乡（镇） 填表日期： 年 月 日 填表人签字： 页：接种日期 伤人动物编号姓名性别年龄(岁)被伤地点被伤日期暴露部位及分级伤口自行处理门诊伤口处理抗血清疫苗种类、批号、厂家 D0 D3 D7 D14 D28 加强 名称 类别免疫史 转归备注填表说明: 1 暴露分级分为三类： 度：被犬舔过无开放性伤口的健康皮肤和粘膜；度：裸露的皮肤或粘膜被轻轻咬过，表面划伤，但没有破口；度：任何部位的皮肤或粘膜，一处或多处被咬破或抓穿。2伤人动物种类:可分为疯动物、可疑疯动物、正常动物（家养、无主

8、动物、野生动物） 、不知道等附表 5 狂犬病宿主动物基本情况调查表省（自治区、直辖市） 市（地区） 县（区） 年动物数量（只） 兽用疫苗数（份）乡镇（办事处） 人口数狗 猫 其它 狗 猫 其它合计填表人： 填表日期： 年 月 日附件 1 狂犬病标本采集技术指南1、采集标本者个人安全防护（1）从事标本采集和运送的工作人员均要经过专门培训方可进行此项工作。（2）从事标本采集和运送的工作人员均要进行暴露前免疫。（3）采集标本前要穿戴好防护服装、眼镜、手套，作好技术上的准备。2、采集标本的包装：要求使用符合生物安全标准的包装盒盛放标本。3、采集标本的时间、类型和存放（1）在狂犬病病人入院后，尽可能早期

9、采集标本。（2）用于病原学检测的标本：病人唾液、脑脊液、尿液、鼻咽洗液、咬伤处皮肤组织或病人死后的眼角膜、脑组织等均可用于病毒的检测和分离。以脑组织阳性率最高。（3）用于抗体检测的标本：无菌采集病例或免疫后血液 23 ml，分离血清后用于狂犬病特异性抗体的检测。（4）标本的存放a) 用于病毒检测和分离的标本在20或20 以下低温（ 70） 、液氮、或放在含 50甘油的 PBS 中以保持标本的感染性，应将标本盛于无菌容器内，放在密封的盒内并注明其危险性以防病毒的扩散。b) 标本要求无菌采集，20保存待检。4、采集标本的运送用于病毒检测和分离的标本，应带冰、干冰或液氮条件下尽快运送至实验室。5、采

10、集标本的保存负责标本接收和检测的实验室，接到标本以后若暂时不检测，应立即冷冻保存。用于病毒检测和分离的标本可以在70长期保存，没有条件的也可以在20 条件下短期保存。6、标本的检测和结果反馈程序病例调查及标本 县 CDC 实验室：标本处理，病例调查 省级 CDC 实验室：检测 国家 CDC：疑难病例、分离毒株。附件 2 狂犬病实验室检测技术指南1、实验室条件及生物安全操作要求（1） 从事狂犬病临床和实验室的工作人员需要暴露前免疫，所有意外暴露于狂犬病毒时必需立即报告本部门负责人。（2） 操作所有潜在狂犬病感染的材料均应在 P2 或 P3（实验室固定毒在 P2，病人或动物分离的街毒在 P3）生物

11、安全实验室内进行。（3） 当实验室对接收到的动物标本进行操作时，必须在 P3 以上条件的专业实验室中进行。没有安全实验室（P3 级）的单位，严禁从事病毒分离工作。（4） 实验前要穿戴好防护服装、眼镜、手套，作好技术上的准备。（5） 由于空气传播狂犬病毒已经得到证实，因此高速混悬或离心操作应在密闭状态下进行。（6） 实验后要作好善后消毒处理,狂犬病毒对脂溶剂（肥皂水、醚、氯仿、丙酮） ，4570%乙醇，碘制剂和四铵化合物敏感，操作完毕对操作台、实验材料等要用相应的消毒剂或高压蒸汽进行消毒处理。2、实验室检测网络组成及职责（1） 中国疾病预防控制中心牵头，全国各省级疾病预防控制中心及所辖区域内的各

12、级疾病预防控制中心组成实验室检测网络。（2） 中国疾病预防控制中心职责A. 诊断试剂的研制、标准化，并推荐质量稳定可靠的诊断试剂； B. 负责毒株的鉴定和病毒变异性调查；C. 对各级实验室检测人员进行技术培训。D. 协助省级疾病预防控制中心完成标本的实验室检测。（3） 省级疾病预防控制中心职责A. 收集、保存辖区内各监测点的各种待检测标本。B. 辖区内各种标本的实验室检测。C. 对本省监测点标本采集和运送给与技术指导和协助。（4） 县级监测点疾病预防控制中心职责采集病例标本，运送病例标本至省级疾病预防控制中心。3、实验室检测方法（1）病原检测： A. 免疫荧光法检测抗原：病人的脑脊髓液或唾液直

13、接涂片、病人的角膜印片或咬伤部位皮肤组织或脑组织印片或冷冻切片，丙酮固定，抗狂犬病毒特异性荧光抗体染色检测狂犬病毒抗原。B. 快速狂犬病酶联免疫吸附法检测抗原：用 pH 9.6 的碳酸盐缓冲液稀释的抗狂犬病毒核衣壳 IgG 包被 96 孔酶标板，4过夜；用含 0.3牛血清白蛋白和 5% 蔗糖的 pH9.6 碳酸盐缓冲液封闭 30 分钟；将采集到的标本研磨，用 pH 7.4 PBS 制成 30的悬液，离心取上清加入酶标板孔内，同时设阴性、阳性对照，200 l/孔，37孵育 1 小时；洗板四次后加入纯化的酶标记抗狂犬病毒抗体200l/孔，37 l 小时后洗板，加入酶反应底物，室温作用 30 分钟，

14、2M H2SO4 终止反应，肉眼观察或酶标仪测定结果。（2）核酸检测：RT-PCR 方法：以特异性扩增核蛋白（N）基因最保守区域为目的基因，设计一对引物：N1（）：5- 587TTT GAG ACT GCT CCT TTT G605-3; N2（-）：5- 1092CC CAT ATA GCA TCC TAC605-3。唾液、脑脊液、皮肤或脑组织标本以及感染病毒后的细胞培养物或鼠脑均可用于病毒核酸的检测。基本步骤为：待检标本用细胞总 RNA 分离试剂提取病毒 RNA，再通过逆转录反应合成与目的基因 RNA 序列互补的cDNA， PCR 循环特异性扩增目的基因 cDNA，电泳检测 PCR 扩增产

15、物，判断检测结果。（3）病毒分离：抗原或核酸检测阳性标本可以进行病毒分离以便进行更深入的研究。A. 细胞培养法分离病毒：将唾液、脑脊液、皮肤或脑组织标本研磨后，用 PBS或 MEM 制成 30悬液4 2000r/min 离心 20 分钟取上清接种在 96 孔或24 孔培养板内已形成单层的敏感细胞（鼠神经传代细胞、Vero 细胞或 BHK21 细胞）上,吸附 2 小时后补加含 2%血清的维持液，37 5C02 孵育约 45 天，丙酮固定感染后的细胞，用抗狂犬病毒单克隆抗体观察特异性荧光包涵体判断结果。阳性时吸取上清至一无菌容器内-70保存备用或继续传代。病毒通过细胞的多次传代可以适应细胞培养并得

16、到扩增。B. 乳小白鼠接种法分离病毒：30的病人或动物脑组织悬液，离心取上清，接种12 日龄乳鼠脑内，每个样品注射一窝乳鼠；注射后的乳鼠应在具有高效滤过装置的负压饲养柜内饲养。症状不典型时可于接种第一代后取脑继续传代，连续传代后潜伏期逐渐规律，一般为 5 天左右。发病乳鼠若确定为狂犬病毒感染，无菌取脑，-70或用含 50甘油的 PBS -20保存，也可研磨后加灭菌脱脂牛奶制成 20悬液，真空冷冻干燥，长期保存。未发病存活的鼠保留至 21 天后杀死作免疫荧光检测(4)抗体检测A. 特异性抗体检测：在自然感染情况下，狂犬病毒通常由被疯动物咬伤时通过其带有病毒的唾液进入机体伤口内，在入侵部位狂犬病毒

17、基本上不增殖，一般也不侵入血流，故不能形成病毒血症。因此，在感染后的一段时间内狂犬病毒或其抗原不能与机体免疫系统广泛接触，不能有效刺激机体产生抗狂犬病毒感染的免疫应答反应。狂犬病的晚期因血脑屏障作用被破坏，脑内大量病毒抗原得以进入血流，可以刺激机体的免疫系统产生大量特异性抗体。因此，许多狂犬病人在发病早期血清中查不到抗体或抗体滴度很低，狂犬病特异性抗体只在临床疾病的晚期出现。 B. 中和抗体检测：狂犬病疫苗免疫后血清中和抗体水平是测定疫苗免疫力程度的评判指标，WHO 狂犬病专家委员会认为中和抗体水平等于或高于 0.5IU/ml 血清，表示能得到有效的保护。狂犬病毒中和抗体的检测可以用传统的小鼠

18、中和试验或 WHO 推荐的快速荧光灶抑制试验（ RFFIT） 。RFFIT 试验时倍比稀释已经灭活的血清样品，同时设阴、阳性血清对照。病毒用标准固定毒 CVS 株，细胞用 BHK21 细胞系。首先将稀释的被检及对照血清 0.1ml 加入 96 孔细胞培养板中，再在各血清孔中加入 0.1 m1 标准病毒稀释液（100TCID50） ，37中和 1.5 小时；然后每孔加入细胞，37、5% C02 培养过夜后弃掉培养液，PBS洗一次，丙酮固定。干燥后，加荧光素标记的抗狂犬病毒抗体，37 30 分钟，PBS 洗 3 次，荧光显微镜观察结果：比较实验组和阴性血清组的荧光灶，实验组中能使荧光灶抑制50的血清最高稀释倍数，即为被检血清的中和抗体滴度。