1、1测定大豆蛋白粗蛋白含量的不确定度评定摘要：粗蛋白是大豆分离蛋白出厂检验项目，根据凯氏定氮法测定大豆分离蛋白中粗蛋白含量，依据 JJF1059.1-2012测量不确定度评定与分析计算在测定过程中的随机效应和系统效应导致的不确定度，最终评定结果的不确定度。 关键词：粗蛋白 不确定度 1 概述 设备：Kjeltec2000 全自动凯式定氮仪 CP225D 型电子天平。 环境条件：温度 21 湿度 55%RH。 被测对象：大豆蛋白。 测定项目：粗蛋白含量。 方法简述：根据 GB5009.5-2010 测定蛋白质含量的规定，将称好的试样放入消化管内并加入硫酸一同消化，使蛋白质分解，再用凯式定氮仪进行蒸
2、馏，记录仪器上显示的数据即为粗蛋白含量。 2 建立数学模型 X=C（V1-V0）0.0146.25100/m 式中：X为粗蛋白含量% C为盐酸标准溶液的浓度 mol/l V1为试样消耗盐酸溶液的体积 ml V0为空白消耗盐酸溶液的体积 ml 20.014为与 1.0ml 盐酸标准溶液相当于氮的质量 g 6.25为蛋白质系数 m为样品质量 g 3 不确定度来源分析 蛋白质含量重复性测量引起的标准不确定度，用相对不确定度 Ur1表示； 实验环境温度引起的相对不确定度 Ur2； 电子天平（十万分之一）仪器型号 CP225D 引起的相对不确定度Ur3； 全自动凯式定氮仪引起的相对不确定度 Ur4； 空
3、白试验消耗盐酸溶液引起的相对不确定度 Ur5； 盐酸标准溶液浓度引起的相对不确定度 Ur6。 4 不确定度分量的计算 4.1 Ur1 的计算 为获得重复性的不确定度，取测试样品进行独立重复测试 6 次，测量结果见表 1 表 1 重复性测量的不确定度测量结果 S=3.87710-4 Ur1=3.87710-4/85.5501%=4.53210-4 4.2 Ur2 的计算 检测蛋白含量时实验室环境温度为 21 度，由此，相对不确定度为： 3ur2=2.110-41/=1.21210-4 4.3 Ur3 的计算 电子天平，e=0.0001g，按矩形分布则由天平引起的不确定度为： 0.0001/=5.
4、77410-5 其相对不确定度 Ur3=5.77410-5/0.1484=3.96210-4 4.4 Ur4 的计算 全自动定氮仪说明书中给出的回收率为 99.5%-100.5%，即测定过程中由仪器误差所导致的相对不确定度 Ur4=0.5%/=2.886810-3 4.5 Ur5 的计算 在实验滴定过程，是由全自动凯氏定氮仪来完成测定的，空白所引起的不确定度 Ur5=0.5%/=2.886810-3 4.6 Ur6 的计算 4.6.1 标定过程及测定方法等引起的不确定度 uAr（x） 依据 GB/T601-2002化学试剂标准滴定溶液的制备的测定方法，标定标准盐酸溶液的浓度，标定结果见表 2。
5、 表 2 盐酸标准滴定溶液浓度的标定结果 注：空白消耗盐酸的体积为 0.1ml。 相对不确定度 uAr（x）=uA（x）/0.1003 =5.66946710-6/0.1003 =5.65310-5 44.6.2 基准无水碳酸钠的纯度 基准试剂无水碳酸钠的纯度为 1.00000.0005，视为矩形分布， up=0.0005/=2.886810-4 upr=up/p=2.886810-4 4.6.3 天平称量所引入的相对标准不确定度 umr 同上述 ur2 的计算方法，即： 0.0001/=5.77410-5 其相对不确定度 ur3=5.77410-5/0.19506=3.03010-4 4.6
6、.4 标定体积的相对不确定度 uvr 环境温度：实验环境近似 20，标准溶液的温度补正值非常小，对实验结果的影响可忽略不计。 滴定管的校准：滴定时使用 50 毫升酸式滴定管，按照检定规程，其最大允许误差为0.05 毫升，相对允许误差为0.1%，按矩形分布，则滴定体积时相对标准不确定度 u（50）=0.1%/=5.77410-4。 滴定终点的判断：终点时误差0.05 毫升，两点分布，现由终点分布判断引入的标准不确定度 uz=0.05 毫升，本实验中的相对标准不确定度 uzr=0.05/35.95=1.39110-3 则：uvr=1.50610-3 其它常数，基准无水碳酸钠摩尔质量引起的标准不确定
7、度很小，可以忽略不计。 因此，由盐酸标准溶液浓度引起的相对不确定度 5ur6=1.56410-3 5 合成不确定度为 ur=4.414810-3 样品测得蛋白质含量为 85.5501%则 uc（X）= 85.5501%0.0044148=0.3777% 6 扩展不确定度分析 当满足 95%置信概率时，近似取包含因子 K=2，则： Uc（N）=2uc（N）=0.755% 7 最后结果表示 用凯氏定氮法测定蛋白质（以 N 计） ，测定结果为： 85.6%0.8%，k=2。 参考文献： 1方彦.近红外光谱法非破坏性测定玉米子粒粗淀粉含量的研究J.作物杂志，2011（02）. 2魏益民.联帮德国谷物 面粉 面包 标准分析法（第六版） 十、粗蛋白含量的测定J.麦类作物学报，1990（01）. 3程彦伟，李培睿，李宗义，李学梅.饲料粗蛋白含量分析方法比较J.饲料工业，2001（11）.
