1、福州市饮食行业从业人员肠道大肠埃希菌耐药及产 ESBL 状况【摘要】 目的 分析福州市饮食行业从业人员肠道大肠埃希菌耐药性及其产超广谱 -内酰胺酶(ESBL)的状况。 方法 2006 年 3 月-2006 年 6月,从福州市疾病控制中心和晋安区疾病控制中心收集 716 株肠道大肠埃希菌作为实验菌株,琼脂稀释法检测细菌对 14 种抗菌药物的敏感性,微量肉汤稀释法检测产 ESBL 状况。 结果 药敏试验显示,716 株试验菌株对14 种抗菌药物耐药率最高的是青霉素,达 65.78%(417/716);耐药率较低的是三代头孢和三代喹诺酮类药物,均20%。39%试验菌株对 3 种或 3种以上抗菌药物同
2、时耐药(多重耐药)。产 ESBL 菌检出率为 2.51%(18/716)。除庆大霉素外,产 ESBL 的大肠埃希菌对其他 13 种抗菌药物的耐药率均高于非产酶菌(P0.05),且皆为多重耐药。大肠埃希菌产 ESBL 与对庆大霉素、卡那霉素及萘啶酸耐药相关系数分别为:2=74.59,r=0.31；2=22.56,r=0.17；2=238.39,r=0.50。 结论 饮食行业从业人员肠道大肠埃希菌对 14 种抗菌药物耐药率在 3.63%65.78%,产 ESBL 大肠埃希菌的检出率为 2.51%,为防止耐药株的播散,应加强监测大肠埃希菌的耐药谱。 【关键词】 埃希菌属类; 大肠杆菌; 药物耐受性;
3、 膳食服务; 微生物敏感性试验; 福建ABSTRACT: Objective To investigate antibiotic resistance and ESBL producing strains of Escherichia coli isolated from intestinal bacteria of food and drink practitioner. Methods The 716 strains Escherichia coliwas collected from OX of Fuzhou city and Jinan districtfrom March to Ju
4、ne in 2006. The resistance of 14 kinds of antibiotics was determined by agar medium and the detection of ESBLwas performed by broth medium. Results Among these 14 antibiotics, the highest level of antibiotic resistance was penicillin which reach to 65.78%(417/716) while the resistance to cephalospor
5、ins and fluoroquinolones were all lower than 20%. 39% of tested strains were resist to three or more antibiotics(multi-drug resistance). The prevalent rate of ESBL producing strains was 2.51%(18/716). ESBL-producing strains were performanced as multi-drug resistance and the resistance level to the o
6、ther 13 antibiotics(with the exception of gentamicin)were significantly higher than no-ESBL producing strains(P0.05). Conclusion The drug-resistance rate of Escherichia coli isolated from intestinal bacteria of food and drink practitioner was between 3.63% and 65.78%. The prevalent rate of ESBL prod
7、ucing strains was 2.51%.KEY WORDS: Escherichia coli; drug tolerance; dietary services; microbial sensilivity tests; Fujian肠道正常菌群的耐药水平被认为可以衡量抗生素选择压力及致病菌耐药水平1,大肠埃希菌的耐药状况是衡量肠道菌群耐药水平的良好指标2 。研究证明,大肠埃希菌可将所携带的耐药基因传递给致病性大肠埃希菌,以及沙门菌、志贺菌或耶尔森菌等不同菌属3,是耐药基因的重要来源和储存库4 。因此,检测肠道大肠埃希菌的耐药性及其产ESBL 的状况,对于研究细菌耐药基因传播、指导临
8、床用药和丰富我国细菌耐药性监测网数据都有重要意义。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试验菌株 2006 年 3 月2006 年 6 月福州市疾病控制中心和晋安区疾病控制中心对福州市饮食行业从业人员健康体检,分离此人群非重复肠道大肠埃希菌 716 株。1.1.2 标准菌株 大肠埃希菌国际标准株 ATCC25922 作为药敏试验及 ESBL 初筛、确证试验的阴性对照,肺炎克雷伯菌国际标准株ATCC700603 作为 ESBL 初筛、确证试验的阳性对照。以上两株细菌均由本实验中心保存。1.1.3 仪器 生化培养箱(SPX-250B-Z 型,上海博迅实业有限公司医疗设备厂);摇床(KS-260B,
9、德国 Zka-Werke 公司);数显鼓风干燥箱(GZX-907MBE,上海博迅实业有限公司医疗设备厂)；高压锅(SA-300VF,德国 Sturdy Industrial 公司);电子天平(AB204-E,瑞士 Mettler Toledo公司);电热恒温培养箱(DNP-9082,上海精宏试验设备有限公司);pH 计(PB-20,德国 SartorinsAG 公司)；-20 冰箱(MDF-U333,日本 Sanyo Electric Biomedical 公司)。1.1.4 含抗菌药物培养基 以基础固体培养基为基础,加入一定量的抗菌药物(北京中国药品生物制品检定所)后,以每块平板 20 mL
10、 制备平板,各药物工作浓度如美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)规定(表 1)。1.1.5 ESBL 初筛液体培养基 以 LB 液体培养基为基础,加入适量头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、头孢曲松(CRO)、氨曲南(ATM)贮存液,使其达到 NCCLS 规定的工作浓度 1 g/mL。1.1.6 ESBL 确证液体培养基 参照文献5 。1.2 方法1.2.1 样本采集及菌株鉴定 716 株试验菌株来源于福州市多家餐馆饮食从业人员,将所采集每个粪便培养接种于中国蓝培养基,挑取蓝色单菌落,生化试验:双糖(+)、尿素酶()、IMViC( -)者鉴定为大肠埃希菌。1.2.2 抗菌药物敏感试验
11、应用琼脂稀释法对上述 716 株大肠埃希菌进行 14 种抗菌药物的药敏试验,并以 ATCC25922 作为药敏试验的阴性对照,未加药物的基础固体培养基作为细菌生长良好的对照。1.2.3 产 ESBL 菌初筛试验 初筛试验采用液体法进行,所用药物为 CAZ、CTX、CRO、ATM,工作浓度均为 1 g/mL,判定标准依据 2006 年版 NCCLS 规表 1 14 种抗菌药物名称及工作浓度定,初筛试验阳性者,继续用确证试验证实。1.2.4 产 ESBL 菌确证试验 依据文献5微量肉汤稀释法,对初筛试验阳性的大肠埃希菌进行产 ESBL 菌确证试验。大肠埃希菌ATCC25922 和肺炎克雷伯菌 AT
12、CC700603 分别作为确证试验的阴性和阳性对照。1.2.5 统计学处理 药敏结果采用 SPSS 13.0 统计软件进行分析。2 结 果2.1 对 14 种抗菌药物药敏试验 716 株大肠埃希菌对 14 种抗菌药物的耐药情况见表 2,图 1。2.2 对 14 种抗菌药物的多重耐药情况 716 株大肠埃希菌中仅有20.11%(144/716)对 14 种抗菌药物敏感,余者表现为不同程度的耐药,其中同时耐 3 种或 3 种以上的菌株(多重耐药株)占 33.79%(242/716),多重耐药多集中在耐 3 种、4 种、5 种抗菌药物(表 3,图 2)。2.3 产 ESBL 状况 716 株大肠埃希
13、菌 ESBL 初筛阳性者 79 株,对此 79 株进行确证试验,确证阳性者表 2 716 株大肠埃希菌对 14 种抗菌药物的耐药率 CFZ:头孢唑啉; FUR:头孢呋辛; CRO:头孢曲松钠; CFP:头孢哌酮; CAZ:头孢他啶; CTX:头孢噻肟; P:青霉素; AP:氨苄青霉素; GM:庆大霉素; KM:卡那霉素; NAL:萘啶酸; NOR:诺氟沙星; OFX:氧氟沙星; CIP:环丙沙星.CFZ:头孢唑啉; FUR:头孢呋辛; CRO:头孢曲松钠; CFP:头孢哌酮; CAZ:头孢他啶; CTX:头孢噻肟; P:青霉素; AP:氨苄青霉素; GM:庆大霉素; KM:卡那霉素; NAL:
14、萘啶酸; NOR:诺氟沙星 ; OFX:氧氟沙星; CIP:环丙沙星.图 1 对 14 种抗菌药物耐药百分率Fig 1 The resistant ration comparison of 716 Escherichia coli to 14 kinds of antibiotics18 株,本研究肠道大肠埃希菌产 ESBL 菌株检出率为 2.51%(18/716,表4)。2.4 产 ESBL 与非产 ESBL 菌株对 14 种抗菌药物耐药情况比较 检出的 18 株产 ESBL 大肠埃希菌皆为多重耐药菌,其对 14 种抗菌药物耐药情况如下:对青霉素的耐药率已达 100%(18/18),对一、二
15、代头孢耐药率70%,三代头孢中除头孢他啶耐药 27.78%(5/18)相对较低外,其他耐药皆60%,且以头孢噻肟最高达 83.33%(15/18),对氨基糖苷和喹诺酮类除萘啶酸外,其他耐药在 28%左右。而 698 株非产 ESBL 菌表 3 716 株大肠埃希菌对 14 种抗菌药物多重耐药构成比表 4 716 株肠道大肠埃希菌产 ESBL 菌株检出率 ESBL:超广谱 -内酰胺酶.株除对青霉素(64.90%)、氨苄青霉素(30.23%)及萘啶酸(36.25%)耐药相对较高外,对其他抗菌药物的耐药率均较低。除庆大霉素外,产 ESBL 菌株对其他 13 种抗菌药物耐药率皆高于非产 ESBL 菌株
16、,差别有显著意义(P0.05,表 5)。 表 5 产ESBL 与非产 ESBL 大肠埃希菌耐药情况比较ESBL:超广谱 -内酰胺酶. CFZ:头孢唑啉; FUR:头孢呋辛; CRO:头孢曲松钠; CFP:头孢哌酮; CAZ:头孢他啶; CTX:头孢噻肟; P:青霉素; AP:氨苄青霉素; GM:庆大霉素 ; KM:卡那霉素 ; NAL:萘啶酸; NOR:诺氟沙星; OFX:氧氟沙星; CIP:环丙沙星. R：耐药菌,S：敏感菌. 除 GM外,其他均有统计学意义.2.5 大肠埃希菌产 ESBL 与耐药的相关性分析 运用配对资料的卡方检验,得出大肠埃希菌产 ESBL 与氨基糖苷类抗菌药物中的庆大霉
17、素耐药(2=74.59,r=0.31)和卡那霉素耐药有一定的相关性(2=22.56,r=0.17),与喹诺酮类药物中的萘啶酸亦有一定的相关性(2=238.39,r=0.50),而与环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星耐药差异无统计学意义(P0.05,表 6)。 表 6 产 ESBL 与氨基糖苷及喹诺酮耐药相关情况 ESBL:超广谱 -内酰胺酶. NAL:萘啶酸; OFX:氧氟沙星; NOR:诺氟沙星; CIP:环丙沙星 ; GM:庆大霉素; KM:卡那霉素. R：耐药菌,S：敏感菌. 列联系数:rESBL,GM =0.31 rESBL,KM=0.17 rESBL,NAL=0.50.3 讨 论3.1 7
18、16 株肠道大肠埃希菌药敏 对于头孢类抗生素的总体耐药情况,一代头孢耐药率最高（17.88%，128/716),三代头孢耐药率最低（6.98%，50/716),提示头孢类药物治疗临床大肠埃希菌感染效果尚可,但也应在药敏指导下慎重选择。对青霉素药物的耐药已达 60%以上,这与青霉素药物本身的杀菌机制特点及长期应用此药物而导致的菌体青霉素结合蛋白的变异有关,临床大肠埃希菌感染时已较少应用此类药物。氨基糖苷类抗菌药物中,庆大霉素和卡那霉素同为氨基糖苷类的代表药物,但前者的耐药率是后者耐药率近 2 倍,因卡那霉素对细菌产生的钝化酶较稳定,大多数对庆大霉素耐药的菌株对此药物仍敏感。对于一代喹诺酮萘啶酸耐
19、药率较高（37.15%，266/716),而对于三代喹诺酮敏感性较好,但有研究指出,细菌耐萘啶酸却对环丙沙星等氟喹诺酮类敏感时,有可能用氟喹诺酮类药物治疗失败或疗效减慢,所以肠道细菌感染时要加测萘啶酸的敏感性。3.2 产 ESBL 菌检出及其耐药 ESBL 是赋予细菌水解青霉素,第一、第二、第三代头孢菌素及氨曲南,但是对碳青霉烯类和头霉烯类药物敏感,且水解活性可被 -内酰胺酶抑制剂(如克拉维酸)抑制的一类 -内酰胺酶6 。本研究中产 ESBL 大肠埃希菌的检出率为 2.51%(18/716),而国外报道的检出率因地方差异在 1%10%不等7,国内尚未见此相关数据,但这些都远远低于国内报道的临床
20、感染病人中此产酶菌的检出率(30%左右)9,10 。除庆大霉素外,产 ESBL 大肠埃希菌与非产 ESBL 大肠埃希菌耐药差异有统计学意义(P0.05),ESBL 阳性菌在第三代头孢类抗生素中对头孢噻肟耐药率高达 83.33%,头孢哌酮耐药率 72.22%,这可能与本地区大量使用头孢噻肟、头孢哌酮而较少使用头孢他啶有关。CTX-M 型酶主要对头孢噻肟有高水解活性,我国有较高的检出率8,9,但此 18 株细菌基因型别,尚需要进一步研究。3.3 细菌产 ESBL 与其耐药相关性 现在临床分离的大肠埃希菌可产生多种 ESBL,或同时产生非 ESBL 的 A 类酶和头孢菌素酶,造成细菌对多种抗生素多重
21、耐药。此文检出的产 ESBL 大肠埃希菌皆为多重耐药菌,大肠埃希菌产 ESBL 与对抗菌药物耐药的相关性分析表明,产 ESBL 大肠埃希菌与对氨基糖苷类药物及一代喹诺酮有一定的耐药相关性,但与三代喹诺酮类药物耐药相关性未在本次结果中显现出来。可能是临床感染病人与本研究分离产 ESBL 大肠埃希菌不同的耐药特点,也可能是本研究样本量较少而其相关性未显现出来,原因有待进一步探讨。【参考文献】1 Van A E,Stobberingh E E. Epidemiology of resistance to antibiotics. Links between animals and humanJ .
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