1、儿童急性淋巴细胞白血病血清 VEGF 和 IGF-1 的表达及其临床意义【摘要】 目的 探讨 VEGF 和 IGF-1 在儿童急性淋巴细胞白血病发生、发展中的作用,以及两者之间的相互关系。方法 分别采用双抗体夹心ELISA 法和放射免疫分析( RIA) 技术检测 16 例正常儿童和 20 例急性淋巴细胞白血病患儿血浆 VEGF、IGF-1 含量。结果 患儿血浆 VEGF 含量与对照组相比明显升高（t=2.81，P 0.01）; 初诊时血清 IGF-1 水平显著低于对照组 (t = 14.84，P0.01)，完全缓解 6 个月后 IGF-1 水平明显高于治疗前(t =13.77，P0.01)。血
2、浆 VEGF 和 IGF-1 含量呈明显负相关。结论 血清 VEGF 和 IGF-1 水平可作为儿童 ALL 诊断的一个临床指标。【关键词】 儿童白血病 血管内皮细胞生长因子 胰岛素样生长因子-1 Abstract objective: to study the effect of the VEGF and IGF-1 in children with leukemia and the relationship between them.Methods:To test the purity of plasma VEGF and IGF-1 with double antibody sandwi
3、ch respectively ELISA and radiation immune analysis (RIA) technology In 16 cases of normal children and 20 cases of acute lymphocytic leukemia cell children.Results: plasma VEGF children increased significantly compared with the control content (t=2.81,P 0.01); Most serum IGF-1 level significantly l
4、ower than in control group (t = 14.84，P 0.01), the IGF-1 level of children with leukemia completely response after six months was obviously higher than before treatment (t =13.77,P 0.01). Plasma VEGF and IGF-1 content was significantly negative correlation. Conclusion: serum VEGF and IGF-1 level cou
5、ld be used as a clinical diagnosis index of ALL children .Key words children with leukemia VEGF IGF-1白血病是儿童最常见的肿瘤性疾病，其中急性淋巴细胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia，ALL）占儿童白血病的 75以上，严重威胁着儿童的健康。血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)通过促进血管内皮细胞有丝分裂，从而促进血管新生，在肿瘤细胞的增殖、浸润和转移中起重要作用1。胰岛素样生长因子-1( insul
6、in-like growth factor-1，IGF-1)可调控细胞增殖与凋亡2 ，同时对造血干细胞的增殖、分化、成熟以及功能的激活也具有调控作用3 ，对肿瘤细胞同样有相同的作用。本研究分别采用双抗体夹心 ELISA法和放射免疫分析(RIA) 技术检测 16 例正常儿童和 20 例急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)患儿血浆 VEGF、IGF-1 含量,旨在探讨二者在急性淋巴细胞白血病发生、发展中的作用,以及两者之间的相互关系，从而为进一步诊治本病寻求新的方法和思路。1 资料和方法1.1 研究对象 20 例 ALL 患儿均为本院 20062010
7、 年住院的初治患者,男 12 例，女 8 例，年龄 17 个月14 岁，中位年龄 8 岁。所有患者均经临床及骨髓细胞形态学、细胞化学染色确诊, 均为初次确诊且未进行任何治疗，无严重营养不良或内分泌疾病，在规范化疗 1 个疗程后达到完全缓解者。诊断及化疗均依据 1999 年小儿急性淋巴细胞白血病诊疗建议( 第二次修订草案) 4 。正常对照组：健康体检儿童 16 例，男 10 例，女 6 例，年龄 613岁，中位年龄 10 岁，排除血液病、肿瘤、结缔组织病、感染性疾病等。1.2 标本采集 所有病例均晚餐后禁食，第 2 天清晨抽取空腹静脉血约 3 mL，4、2 000 r/min 离心 10 min
8、 收集血清，置70冰箱保存，观察组标本采自治疗前和完全缓解后 6 个月。1.3 测定方法严格按说明书由专人盲法双复管一次性测定，VEGF 检测采用双抗体夹心ELISA 法,试剂盒购自深圳晶美公司。血清 IGF-1 采用平衡饱和竞争放射免疫分析( RIA) 技术，试剂盒为天津九鼎医学生物工程有限公司生产。1.4 统计学分析采用 SPSS 13.0 软件统计分析，计量资料采用均数标准差( xs) 表示，组间比较采用 t 检验，P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 ALL 患儿各组血浆 VEGF 水平与正常对照组相比,ALL 初治患儿治疗前血浆 VEGF 含量明显增高,两组差异有显著性意义
9、(t 为 2.81，P 0.01)。缓解组与对照组相比差异无显著性。见表 1。2.2 血清 IGF-1 水平观察组患儿初诊时血清 IGF-1 水平显著低于对照组，差异有统计学意义( t = 14.84，P0.01) 。完全缓解 6 个月后 IGF-1 水平明显高于治疗前( t =13.77，P0.01)，与对照组比较差异无统计学意义( t =1.64，P 0.05) 。见表 1。表 1 各组血清 IGF-1 和 IGFBP-3 表达变化 (xs)组别例数VEGF(ng/L)IGF-1（ng/mL）对照组1677. 2132.09314观察组治疗前2096.1828.96 a183 a缓解后20
10、79.0235.18 a，b29 3 a，ba: 与对照组相比，P 0.01; b: 与观察组治疗前相比，P 0.012.3 ALL 患儿血浆 VEGF 与 IGF-1 水平的关系 采用直线相关分析,结果显示 ALL 初治患儿治疗前血浆 VEGF 和 IGF-1 含量增高具有一定的相关性(r=-0.48,P0. 01)。3 讨论急性淋巴细胞白血病是儿童最常见的白血病，其发病与多种因素有关，但其生物学本质依然是通过新生血管的形成，引发肿瘤细胞的生长和数目的增多，从而完成肿瘤细胞的增殖和分化。这同实体瘤中的研究结果是一致的 1,5。目前的研究证实，在众多参与肿瘤血管形成的细胞因子中，VEGF 在肿
11、瘤的血管形成中起着重要的作用，是主要的促进血管生成因子。VEGF 是一种多功能糖蛋白，具有促进血管通透性增加、血管内皮细胞分裂、增殖及诱导血管生成等作用。VEGF 是血管形成和血管通透性调控因子，它在血管形成过程中的重要作用已得到共认。虽然正常或者恶性造血祖细胞均能分泌 VEGF，但在正常造血干/祖细胞中 VEGF 不表达或表达极低。国外的研究认为血管新生与儿童 AL 的预后有着密切的关系。它主要通过与血管内皮细胞上高亲和力的受体相结合而发挥作用。当 VEGF 与受体结合后,激活的受体诱导酪氨酸激酶激活,导致内皮细胞增殖和细胞迁移。本研究显示，20 例 ALL 患儿血浆 VEGF 含量,与对照
12、组相比明显升高,这与近年5的报道一致，提示血管新生参与了 ALL 的发生，同时可间接反映患者骨髓中血管新生的程度, 说明在 ALL 的发病中起着重要的作用。其可能的机制为 VEGF 在急性白血病中高表达，与骨髓微血管密度(MVD)密切相关,白血病细胞表达、释放 VEGF ,VEGF 通过与 VEGF受体结合促进血管内皮细胞增殖和新生血管形成,为白血病细胞的生长提供必要条件。也有学者认为，ALL 骨髓细胞的异常增生,刺激产生缺氧诱导因子(HIF)，促进其分泌、合成，进一步上调 VEGF 的表达,诱导血管新生,癌基因与抑癌基因异常活化，导致该病的发生。有相关研究已证实，对于白血病，VEGF 不但促
13、进白血病细胞增殖、浸润作用，而且可延缓树突状细胞的成熟,抵抗放、化疗所致的白血病细胞的凋亡5-6。 1957 年 Salmon 和 Daughaday 首次发现 IGF，目前对于它的认识，已发展为一个广泛的由 IGFs、胰岛素样生长因子受体( insulin-like growth factor receptor，IGFR) 、IGFBPs 组成的多肽家族。它是一个对于人体正常生理功能起重要作用的系统，IGF-1 是其中的一种，对其认识研究发现 IGF 作为一种多功能细胞生长调控因子,不仅与正常细胞的增殖、分化、凋亡密切相关,且促进肿瘤细胞的分化、生长。 2，7 。它的结构与胰岛素原相似，在肿
14、瘤细胞中，能通过肿瘤细胞自分泌及旁分泌产生,作为很强的丝裂原,促进肿瘤细胞分化、生长。它广泛存在与人体各个组织器官中，包括造血细胞中合成、分泌，但对于血液中的 IGF-1，主要是由肝脏来合成分泌的。它的促肿瘤活性主要是通过与特异性的靶细胞表面的受体 IGF-1R 结合而起作用8 。ALL 近年来发病呈上升趋势。目前国内外研究均表明，多数肿瘤包括白血病具有产生 IGF-1 的能力，在恶性肿瘤患者的血液中存在着高水平的 IGF-1，体内外实验均证实有效降低 IGF-1 水平后，肿瘤细胞的凋亡明显增加，肿瘤的生长受到明显有效的抑制9,10 。本研究结果显示 ALL 患儿血清 IGF-1 水平在治疗前
15、较对照组明显降低，与之前预测的结果不一致。这让我们想到了患儿的营养状况。在白血病患儿中，大多均存在着严重营养不良，热卡、蛋白摄入不足和机体内蛋白质消耗量增加，已存在肝脏浸润、肝功能损伤，影响蛋白质合成，这也是造成 ALL 患儿血清 IGF-1 下降的原因之一。本研究还表明, ALL 初治患儿治疗前血浆VEGF 和 IGF-1 含量的增高和 IGF-1 含量的降低具有相关性,两者呈明显负相关。但二者之间的相互作用机制仍需进一步研究。综上所述，测定血清 VEGF、IGF-1 水平对进一步了解 ALL 的发生、病情变化有一定的意义，今后可能成为儿童 ALL 诊断的临床指标。靶向抑制VEGF 的表达可
16、能成为治疗 ALL 的一条新途径。此外，二者在血清中的含量可能还受到患儿营养状况、饮食等多方面饮食的影响，以判断能否作为判断 ALL 发生、发展过程的观察指标，均有待我们更深入的研究，我们目前的实验数据仅仅为今后继续深入研究提供了重要的线索。参考文献1 Aguayo A, Kantarjian HM, Estey EH, Giles FJ, Verstovsek S,ManshouriT, et a.l Plasma vascular endothelial growth factor levels have prognostic significance in patientswith ac
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