1、上海市兽药饲料检测所2011-06-16,饲料中可乐定和赛庚啶的测定,主要内容,可乐定简介赛庚啶简介饲料中可乐定和赛庚啶检测方法2010年预警预测工作,肾上腺素能受体学说最早由Ahlquist于1948年提出，将位于交感神经节后纤维所支配的效应器细胞膜上能与肾上腺素和去甲肾上腺素结合的受体，称为肾上腺素能受体。,可乐定简介,肾上腺素能药物肾上腺素能激动剂 肾上腺素能拮抗剂 (化学结构均为胺类,也 称拟交感胺,儿茶酚胺)使肾上腺素能受体兴奋 拮抗激动剂的作用,根据生理效应的不同，肾上腺素能受体可分为：,受体,受体,1,2,血管平滑肌收缩心脏正性变力，心肌收缩胃肠道平滑肌松弛,激动剂（拟似）,升压
2、抗休克,反馈调节去甲肾上腺素释放血管平滑肌收缩血小板聚集,短暂升高血压，持久降血压,1,心脏、肾脏、脑干,强心和抗休克,2,气管平滑肌血管平滑肌,平喘和改善微循环,3,脂肪组织,激动时分解脂肪，增加氧耗，减肥和糖尿病,盐酸替扎尼定,溴莫尼定,甲基多巴,盐酸右美托咪定,2受体激动剂,胍法辛,胍那苄,中文名称：盐酸可乐定英文名称：Clonidine hydrochloride化学名称： 2-(2,6-二氯苯基) 亚氨基 咪唑烷盐酸盐分子式：C9H9Cl2N3.HCl分子量：266.56CAS ：4205-91-8溶解性：在水或乙醇中溶解，在氯仿中极微溶解，在乙醚中几乎不溶。,可乐定简介,可乐定简介
3、,一种中枢神经系统肾上腺素能2受体激动剂，对2受体具有特异亲和性，属于咪唑啉衍生物； 功效 中枢性降压药； 麻醉和镇静； 促生长作用；副作用：低血压、心动过缓、镇静、嗜睡。,1975年，LaL等首次报道了可乐定对人具有显著促进血浆生长激素水平升高的作用；用于治疗身材矮小症促生长机理：通过促使生长激素释放激素(GHRA)分泌 使生长激素分泌增加,促进患者生长；,可乐定简介,可乐定的促生长作用：,可乐定简介,可乐定对动物促生长机理： 可乐定很可能是通过促进下丘脑GHRH神经元合成和释放GHRH，进而调节腺垂体细胞内cAMP水平，从而调控GH分泌； 在猪饲粮中添加0.5mg/kg可乐定，能显著提高猪
4、的瘦肉率和眼肌面积， 降低脂肪比率和背膘厚，表明可乐定能改善猪的胴体组成。,2000年9月饲料研究“可乐定(Clonidine)对动物生长激素分泌的影响”2005年31（5）浙江大学学报（农业与生命科学版）“可乐定对生长猪酮体组成的影响及其作用机理探讨”,事件链接,2009年10月 北京顺义11名工人吃面条，可乐定中毒；2010年4月 北京怀柔可乐定中毒事件；,英文名称：Cyproheptadine hydrochloride中文名称：盐酸赛庚啶化学名称：1-甲基-4-（5H-二苯并a,d 环庚三烯-5-亚基）哌啶盐酸盐分子式： C21H21N.HCl分子量：323.5CAS ：41354-2
5、9-4溶解性：甲醇中易溶，氯仿中溶解、在乙醇中略溶，在水中微溶，在乙醚中几乎不溶。,盐酸赛庚啶,主要功效：抗过敏药，对抗体内组胺对血管、支气管平滑肌的作用，从而消除过敏症状。可用于荨麻疹、湿疹、过敏性和接触性皮炎、皮肤瘙痒等过敏反应。一种哌啶抗组胺剂，与其他抗组胺药不同的是这种药物还拮抗5-羟色胺受体，使得赛庚啶可用于治疗血管性头痛和食欲不振。副作用：主要有嗜睡、头昏、乏力、口干等。,盐酸赛庚啶,盐酸赛庚啶,食欲受中枢神经系统5-HT的抑制性调节。赛庚啶阻断下丘脑5-HT 活性, 兴奋摄食中枢, 引起饥饿感，减少糖的消耗利用, 使食量和体重增加； 赛庚啶增进食欲可能不依赖去甲肾上腺素能神经元的
6、兴奋，赛庚啶对抗5-HT抑制摄食的作用而增加食欲, 更多地是通过降低饱腹感。,赛庚啶促生长机理：,2002年2月9日农业部第176号公告 禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录2002年4月9日农业部第193号公告 食品动物禁用的兽药及其它化合物清单。2010年12月27日农业部1519号公告 禁止在饲料和动物饮水中使用的物质列入盐酸可乐定和盐酸赛庚啶。,农业部公告,饲料中可乐定和赛庚啶的测定,2010年11月16日农业部1486号公告-2-2010饲料中可乐定和赛庚啶的测定 液相色谱-串联质谱法,方法发布,液相色谱参数,色谱柱选择：SB C18 100 mm3.0 mm，粒径1.8m 流
7、动相选择：乙腈：0.2%甲酸梯度洗脱 稀释溶剂的选择：0.2%甲酸：乙腈=20:80（V/V）,质谱参数,离子源： ESI+；检测方式：多反应监测MRM；电离电压：3.5KV； 源温：150；雾化温度：500； 锥孔气流速：50L/h；雾化气流速：800L/h；,全扫描质谱图,可乐定质谱图（碰撞能量为30eV),可乐定质谱图（碰撞能量为40eV),全扫描质谱图,全扫描质谱图,赛庚啶质谱图（碰撞能量为40eV),全扫描质谱图,赛庚啶质谱图（碰撞能量为30eV),前处理方法,提取溶剂：甲醇：0.1M盐酸=80:20 SPE小柱：MCX 3mL/60mg 定量方法：外标法定量,前处理步骤,若样品液中
8、含有的药物浓度超出线性范围，进样前可用一定体积的流动相稀释，使稀释后上机液中的药物浓度在线性范围内。,方法研制,赛庚啶标准曲线（浓度范围为0.550 ng/mL）,可乐定标准曲线（浓度范围为0.550 ng/mL）,线性关系,配合饲料: 在0.020.1mg/kg添加浓度的回收率为：70%100%。浓缩饲料及预混合饲料: 在0.020.1 mg/kg添加浓度的回收率为：70%110%。,回收率,表1 配合饲料中添加可乐定和赛庚啶回收率试验结果,精密度,表2 饲料添加剂中添加可乐定和赛庚啶回收率试验结果,精密度,添加回收实验,空白配合饲料样品MRM图,配合饲料添加回收率MRM图（添加浓度0.02
9、 mg/kg）,空白预混合饲料样品MRM图,预混合饲料中添加回收率MRM图（添加浓度1mg/kg）,添加回收实验,灵敏度,配合饲料： 检测限为0.01 mg/kg 定量限为0.02 mg/kg浓缩饲料及预混合饲料： 检测限为0.01 mg/kg 定量限为0.02 mg/kg,定量限和检测限,配合饲料中添加可乐定和赛庚啶MRM图（添加浓度0.01mg/kg）,定量限和检测限,预混合饲料中添加可乐定和赛庚啶MRM图（添加浓度0.1mg/kg）,定量限和检测限,浓缩饲料中添加可乐定和赛庚啶MRM图（添加浓度0.1mg/kg）,方法验证,国家饲料质量监督检验中心(北京)河南省饲料产品质量监督检验站浙江
10、省兽药监察所,方法的要点,盐酸可乐定标准品配制：先加入适当水溶解，再加入甲醇定容；取样量：2g，可适当调整；检测线性范围：根据仪器线性范围调整；可乐定和赛庚啶响应差异；可乐定定量和定性离子选择;防止污染。,标准品信息,sigma货号 纯度盐酸可乐定： C7897 99%盐酸赛庚啶： C6022 99%,其他检测方法,上海市畜牧兽医通讯2010年第6期 高效液相色谱法分析饲料中的“可乐定” 检测限0.5mg/kg，定量限1.0mg/kg中国饲料2011年第2期 高效液相色谱法分析饲料中的“赛庚啶” 检测限0.05mg/kg，定量限0.1mg/kg,2010年饲料安全预警预测监测工作,任务来源,农
11、牧办20101号文农业部办公厅关于下达2010年饲料质量安全监测计划的通知： 饲料中赛庚啶和可乐定检测作为饲料安全的预警监测工作之一，对生产和使用环节的生长育肥猪饲料进行监测。,采样工作,海南,黑龙江,吉林,辽宁,河北,山东,福建,江西,安徽,湖北,湖南,广东,广西,上海,河南,山西,内蒙古,陕西,宁夏,甘肃,青海,四川,贵州,云南,西藏,新疆,江苏,浙江,北京,台湾,计划抽检300批，实际抽检447批，完成率为149%，,采样数量及区域分布,样品类型分布,阳性样品的检出率,阳性样品在各种类型饲料中分布情况,可乐定阳性样品,赛庚啶阳性样品,可乐定阳性样品的区域分布情况,赛庚啶阳性样品的区域分布情况,方法实际应用,实际检测结果：,液相色谱-飞行时间质谱（Q-TOF）,质量范围宽分析速度快分辨率高质量准确度高灵敏度高,谢谢！,
