1、毕业论文开题报告海洋生物资源与环境三疣梭子蟹养殖塘弧菌群落结构研究一、选题的背景与意义三疣梭子蟹（PORTUNUSTRITUBERCULATUS）是我国海产经济蟹类，其肉质鲜美、营养丰富、经济价值高，在国内外享有盛名。近年来，由于养殖规模的不断扩大、养殖密度不断提高、养殖环境的污染等损害了三疣梭子蟹免疫防御系统，导致自身的抗病力下降，对病害的易感性增加，疾病频繁发生，例如近几年由弧菌引起的“乳化病”给三疣梭子蟹养殖业带来了重大经济损失（陈萍等，2009）。目前，有关“乳化病”的病原鉴定、病理和组织生理变化的研究国内已有不少报道刘淇等2007；王国良等2006，施慧等2005；许文军等2003，
2、但目前对于疾病爆发与水体环境微生物群落的关系研究较少，倪纯治等（1995）有研究过弧菌数量与虾病的关系。弧菌与疾病爆发的关系一般认为是由于水体中某特定种类的弧菌大量繁殖而引发疾病，水产品的弧菌检测也多是针对某特定弧菌而建立的，因而，养殖水体的弧菌数量常常被看做疾病爆发的重要征兆之一，但是，弧菌种类繁多，致病性菌株只占一小部分，大部分是非致病菌，因此，相较于弧菌数量，弧菌群落的结构组成可能与疾病爆发更为相关。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题我们拟选取两个代表性的三疣梭子蟹养殖塘，其中一个塘中梭子蟹发生类似“牛奶病”的疾病，其典型症状为三疣梭子蟹沿岸爬上，活动力差呼吸困难、行动迟缓，打开蟹盖，
3、盖内可见大量乳白色液体，发病蟹死亡率为100，造成梭子蟹连续不断死亡，称为病害塘，另一个塘，没有明显的梭子蟹死亡迹象，称为健康塘。然后基于细菌计数、菌落特征和16SRDNA基因序列比对对这两个三疣梭子蟹养殖塘的养殖水体中的弧菌群落组成进行比较研究，以期揭示养殖塘弧菌群落结构变化与三疣梭子蟹疾病发生的关系。三、研究的方法与技术路线研究方法先进行一些简单的预实验，了解基本情况，然后设计好实验方案。之后采集样品，涂布计数，分离纯化保种，菌落观察，然后提DNA，做DGGE，挑选出条带不同的菌株，做PCR，测序，鉴定弧菌的分类地位，最后分析数据，撰写论文。技术路线四、研究的总体安排与进度总体安排1201
4、0年6月及之前，进行预实验，熟悉各项实验操作方法，设计实验方案22010年79月，完成实验过程，得到实验数据，做好总结32010年12月，开题报告42011年24月，分析数据，撰写论文52011年5月，论文答辩进度因为要考研，所以毕业论文的实验完成得较早，在2009年暑期就已经完成实验，得到了数据，且做好了总结。明年开学后就开始分析数据，撰写论文。采样稀释涂布菌落计数分离纯化菌落观察涂布时平板可适度干燥些，可以放置一天后使用可事先把要挑取的单菌落标记好保种扩繁提DNA20UL体系PCRDGGE50UL体系PCR测序数据对比，弧菌鉴定分析数据，撰写论文涂布在培养基上的弧菌不易存活，因此实验做好在
5、短期内完成将菌液在摇床上培养过夜，提二天上午提DNA，菌液培养时间不宜过久五、主要参考文献1闫茂仓,陈少波,单乐州,等海水养殖动物致病弧菌的研究进展水产科学,2009,2884754812王国良，金珊，陈寅儿等三疣梭子蟹肌肉乳化病的病原及其致病性研究海洋研究进展,2006,2445265313倪纯治,林燕顺,叶德赞,等海水养虾池的几种致病弧菌生态台湾海峡,1995,14173794国家海洋局海洋调查规范M北京海洋出版社,19755金珊,王国良,薛良义等海水网箱养殖水域异养细菌和弧菌的数量动态J海洋渔业,1999,2141541566张德民,黄志勇等紫色非硫细菌RHODOCISTA属一新分离株的鉴定及其系统学研究微生物学报,2000,4114207温丹,张德民,初航网箱养殖海区底泥产芽孢细菌多样性J海洋与湖沼,2009,4056156218钱丽君，张德民，徐小红等应用DGGE分析三疣梭子蟹养殖塘底泥细菌的多样性水产学报，2007，31（2）2042109王保坤,余俊红,李筠,等花鲈弧菌病病原菌哈维氏弧菌的分离与鉴定中国水产科学,2002,91525510张晓君，房海，等致病性哈氏弧菌生物学及分子特征中国兽医学报2009，29（9）11201124
