梅毒实验室诊断刘利洪.ppt

1、梅毒实验室诊断,德阳市人民医院检验科 刘利洪,性病：是指通过性接触而发生传播的一组传染病。20世纪70年代以前经典性病（venereal diseases,VD） 包括：梅毒、淋病、软下疳等1975年，WHO性传播疾病（sexually transmitted diseases,STD）20世纪90年代以后性传播感染（sexually transmitted infections,STI），包括：艾滋病、梅毒、淋病、CA、GH等。,历史的回顾,性病是一个历史悠久的疾病，多数认为梅毒是1505年由印度传入我国广东岭南。梅毒是一个曾经广泛流行的性病，解放初期，估计的性病（主要是梅毒）患者约为100

2、0万。1954年之后，全国逐渐形成了一个“四级”皮肤性病防治体系。1964年，实现了全国梅毒基本消灭的目标。,性病死灰复燃,上世纪70年代末，改革开放后，性观念的改变性产业的出现性生活方式的变化高危人群规模在不断的增加，如：暗娼、男男性接触者、流动人口等。性病在我国死灰复燃，再度流行。,现况,严重的公共卫生问题和社会问题；临床认知水平不够，实验室诊断水平参差不齐；实验室检测各流程存在不规范现象；新的实验室诊断技术不断出现而又缺乏了解；部分（如私人诊所）医疗工作存在过度诊疗或诊疗不规范，延误患者的最佳诊疗时机；无症状感染者成为维系性病流行的重要的传染源。,如何就目前高发的性病，尤其是对梅毒进行有

3、效监测和控制？如何对高危人群及潜在易感人群进行筛查，主动发现无症状的性病感染者？如何确定感染的病原体种类？需要完善的实验室检测工作，包括检测能力建设和质量控制,性病防治工作的重点 两个系统 疫情监测系统 实验室检测系统-实验室检测能力和质量控制 一个服务 规范化医疗服务,梅毒的定义,梅毒是由密螺旋体之一的梅毒螺旋体引起的一种慢性全身感染性疾病。是传统的性传播疾病之一。,常用梅毒实验室检测方法,病原学检测血清学检测,病原学检查的原理,螺旋体进入人体后，在皮下黏膜增殖并沿淋巴管至附近的淋巴结经过24周的潜伏在感染部位形成硬下疳。数天至1周后淋巴结肿大。再以后经血液传播至全身，或孕妇的羊水中都有大量

4、螺旋体的存在。因此，在梅毒病人的硬下疳、扁平湿疣等皮损以及梅毒病人肿大的淋巴结，梅毒孕妇的羊水，都可以采集标本来做此检查,梅毒病原学检查的应用范围及标本采集,适用范围 病人出现的硬下疳、扁平湿疣、肿大的腹股沟淋巴结穿刺液、羊水穿刺液等。标本采集：略,梅毒病原学检查的方法,1、暗视野显微镜检查法2、镀银染色检测法3、刚果红负染色法,暗视野检查法,仪器器材1、暗视野显微镜2、无菌纱布3、不锈钢刮刀4、灭菌棉拭子5、灭菌生理盐水6、载玻片、盖玻片,暗视野检查法,标本收集1、皮肤黏膜组织液2、淋巴液3、羊水,暗视野检查法,检测流程1、制片2、暗视野显微镜的使用及观察,暗视野检查法,结果判读 发现有纤细

5、、白色、有折光的螺旋状微生物，具有旋转、蛇行及伸缩等特征性的运动方式，可判断为梅毒螺旋体报告 暗视野显微镜下发现有上述特征的螺旋体报告“发现苍白螺旋体”,暗视野检查法,临床意义1、检测阳性，在临床上可确证梅毒；2、如未能发现梅毒螺旋体，不能排除诊断；3、无论暗视野显微镜检查的结果如何，都应进一步进行血清学检测。,镀银染色检查,检测原理 梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，可以从普通高倍显微镜下观察到梅毒螺旋体。,镀银染色检查,仪器器材1、普通显微镜2、加拿大树胶3、罗吉固定液4、鞣酸媒染剂5、Fontana银溶液6、无水乙醇7、无菌纱布等取材用品,镀银染色检查,操作流程1、涂片干燥：自

6、然干燥，不可用火固定；2、固定：2-3分钟3、洗涤：无水乙醇4、媒染：微加热、30秒5、银染：水洗、微加热、30秒6、镜检：水洗待干、封片镜检,镀银染色检查,结果判读 在显微镜下观察到染成棕褐色的螺旋体状生物，可判断为梅毒螺旋体。报告 见到染成棕褐色梅毒螺旋体报告阳性结果，否则报告阴性结果。,刚果红负染色法,原理： 刚果红是一种酸碱指示剂在涂有标本的玻片上刚果红将玻片染色，而螺旋体、细菌、细胞、真菌等生物体形成占位而不着色。再用盐酸蒸气将刚果红的红色熏成蓝色方便观察。,刚果红负染色法,器材及试剂：1、普通显微镜2、1%的刚果红水溶液、3、浓盐酸。,刚果红负染色法,结果判读： 在蓝黑色背景中发现

7、白色纤细的螺旋状微生物螺距数量为平均614个，可判断为“苍白螺旋体”报告 发现上述特征螺旋体结构微生物，可报告“发现苍白螺旋体”,梅毒血清学检测分类（1）非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）（2）梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）,非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理,梅毒螺旋体一旦感染人体，在3-4周产生抗类脂质抗原的IgM和IgG的混合抗体（也叫反应素）。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转阴。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理,反应素与心磷脂形成抗原抗体反应，卵磷脂可加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。心磷脂、卵磷脂及胆固醇

8、都是醇溶性脂类、遇水形成胶体溶液，胆固醇遇水形成结晶。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图,非梅毒螺旋体抗原血清学试验方法,包括：（1）快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST)（3）性病研究实验室试验（VDRL）所用抗原基本成分是：心磷脂、卵磷脂和胆固醇,VDRL试验抗原组成及特点抗原组成：0.03%心磷脂、0.21%卵磷脂、0.90%胆固醇抗原需新鲜配制，不能保存待检血清需灭活需要在显微镜下观察结果目前主要用于脑脊液检查，特异性较高是诊断神经梅毒的重要依据，但检测阴性不能排除神经梅毒,VDRL试验仪器材料1、水平旋转仪、显微镜2、试剂盒：VDRL抗原原

9、液、VDRL缓冲液、抗原滴管及针头、带直径为14mm漆圈的玻璃反应板、VDRL试验结果判读用参照涂片3、30ml平底玻璃小瓶、生理盐水,VDRL试验标本采集1、血清：新鲜血清或冻存血清；2、脑脊液：采用腰穿术获得 一般来说，送检VDRL试验的脑脊液应采集两份，一份作脑脊液常规（白细胞10*106/L、蛋白含量500mg/L）测定，检测结果与另一份用作VDRL试验的脑脊液样本同时送实验室。,VDRL试验操作步骤1、VDRL抗原配制；2、VDRL玻片定性试验（1）灭活：血清标本56灭活30分钟；（2）吸样：吸取0.05ml血清放入反应板圈中，并涂布于整个圈内；（3）加抗原：用标准针头加入1滴抗原；

10、（4）反应：置水平旋转仪上旋转4min，1805次/min，立即置低倍显微镜下观察。,VDRL试验操作步骤3、VDRL定量试验（1）加稀释液：在圈内加入0.05ml生理盐水；（2）样本稀释：吸取0.05ml样本与第一个圈内生理盐水混合，混匀后，吸取0.05ml加至第二个圈，做系列稀释，并将稀释样本涂布于整个圈内（3）同定性试验的（3）、（4）。,VDRL试验结果判读凝集反应强度分级：3+4+：镜下见中等大小或大的絮状物，液体清亮；2+ ：絮状物较小，液体较清亮；1+ ：絮状物较小，均匀分布，液体浑浊； ：抗原复合物颗粒稍粗； ：抗原颗粒均匀、细小。定性试验：镜下可见1+4+的絮状凝集物为阳性，

11、不产生凝集为阴性；定量试验：镜下可见絮状凝集物的样本最高稀释倍数为其滴度。,VDRL试验临床意义 脑脊液VDRL试验是神经梅毒的标准试验，阳性结果可诊断为神经梅毒，但阴性结果不能排除诊断，存在假阴性。,RPR试验在VDRL试剂成分的基础上，加入黑色活性碳颗粒，作为凝集的指示物；与待检血清（浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的黑色絮状物。用白色硬纸片代替玻片；血清不需要灭活；不需要显微镜观察结果可作定性和定量试验,TRUST试验原理和成分以及操作与RPR试验相同用红色的甲苯胺红替代了活性碳颗粒，在与待检血清（血浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的红色絮状物,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),样本

12、类型：血清、血浆、脑脊液样本保存：短期（1周）内进行检测的可存放于2-8；保存一周以上的应置于-20 以下冰箱保存；长期保存应置于-70 以下冰箱中保存。,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),样本运送： 应按照生物安全要求进行包装和运送。（1）第一层容器（如试管） （2）第二层容器 （3）第三层容器,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),样本接收：（1）检查标本管有无破损和溢漏；（2）核对标本与送检单；（3）检查标本的状况;（4）如标本不能接收，怎么处理？（5）样本交接应在接收单上双方签字确认,注意：应把每一份样本当作强阳性样本来处置和对待！,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),仪器：水平

13、旋转仪（要求？）试剂盒：（1）含有活性碳的抗原悬液；（2）一个标定的9号针头（0.9mm）；（3）压印有18mm直径圆圈的封塑环状卡片；（4）内部对照； 为了保证试验结果的可靠性，以及每批试剂间的可比性，应制备外部对照血清（5）50ul量程移液器和吸头（6）0.9%无菌生理盐水,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),定性试验（1）试剂准备：复室温30分钟（2）加标本：样本量50ul；（3）加抗原：抗原量（601滴/ml，约17ul/滴）（4）反应：反应时间8min（5）读取结果,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),定量试验抗原1滴 抗原1滴 抗原1滴 抗原1滴 抗原1滴,50ul标本1:1（

14、全血）,50ul标本50ulN.S1:2,50ulN.S1:4,50ulN.S1:8,50ulN.S1:16,吸取50ul,吸取50ul,吸取50ul,弃掉50ul,标本稀释顺序,涂布顺序,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),结果判读判读凝集反应强度分级：3+ - 4+：圆圈内出现中到大的黑色絮状物，液体清亮；2+ ：圆圈内出现小到中的黑色絮状物，液体较清亮；1+ ：圆圈内出现小的黑色絮状物，液体浑浊；- ：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散。,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),结果报告（1）定性试验： 出现1+-4+强度的凝集反应报告阳性（+） 不产生凝集反应报告阴性（-）（2）定

15、量试验： 出现凝集反应的血清最高稀释倍数为抗体滴度，结果报告滴度为1：X。 也可将每个稀释度的反应强度依次报告，如1:1（全血）（4+）、1:2（3+）、1:4（2+）、1:8（1+）、1:16（-）。有利于疗效观察,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),质量控制（1）内部对照： 试剂盒含有的阳性质控血清，用于检查该盒试剂的有效性。 新开试剂，以及每天工作开始前或每批试验开始前，应常规进行内部对照质控。（2）外部对照： 可采取自留阳性标本用作外部对照。 新开试剂或更换试剂批次，应同时进行外部对照试验，用于检查每批试验结果的重复性和可比性。,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),质量控制（3）移

16、液器质量控制：强检和定期校准；（4）旋转仪质量控制：检查转速；（5）人员的质量控制：有经验人员的指导下开展工作、双人核对结果；（6）操作的质量控制：反复操作、正确操作。,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),临床意义（1）产生的抗类脂质抗体，未经治疗可长期存在；（2）经适当治疗后，抗体可以逐渐减少至转为阴性；（3）定性试验结果可用于现症梅毒诊断；（4）定量试验结果可用于疗效观察及判愈。,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),梅毒血清反应假阳性 即非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性的现象。（1）技术性假阳性反应 由于标本保存不当（如细菌污染或溶血）、试剂质量差或过期、或试验操作错误等所造成。（2）生

17、物学假阳性反应 非梅毒螺旋体抗原血清学试验采用的抗原为脂类混合物，所检测的抗心磷脂抗体亦可见于其他多种疾病，如自身免疫性疾病、怀孕的妇女，麻风病人。,王千秋教授等检测了10546份血清样本，RPR假阳性率为0.21%（15/7002）。假阳性中： 10例为有高危性行为的常规检查者 2例孕妇 皮肌炎、尖锐湿疣、龟头破溃各1例,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),梅毒血清反应假阳性的处理（1）技术性假阳性反应：实验前检查试剂的有效性、重复操作排除人为操作错误等；（2）生物学假阳性反应：应做TPPA(TPHA)等试验进行排除,单一RPR（非特异性抗体血清试验）结果阳性，不能作为梅毒的确定性诊断试验

18、结果，需用梅毒螺旋体抗原血清试验进行确证。,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清学试验中，有时血清中存在高浓度的反应素导致抗原抗体浓度不匹配，出现弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又像早期梅毒（一期和二期），此时将血清稀释后再进行试验，可出现阳性结果的现象。,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),血清固定 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。 早期的血清固定常与治疗不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。 病期不明的潜伏梅毒患者血清固定发生率显著增高，应加强对潜伏梅毒的筛查和及时治疗。,快速血浆反应素环状卡片试

19、验（RPR),RPR用于脑脊液的检测，近年来也有不少研究。 有作者在对154例各期梅毒患者及90例非梅毒神经系统疾病患者的脑脊液进行试验并作统计分析： RPR 脑脊液敏感性为99.1%、特异性为77.8% VDRL 脑脊液敏感性为98.6%、特异性为70.4 结论：RPR可以代替VDRL用于神经梅毒的诊断。 但是？,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR),注意事项1、使用无菌生理盐水；标本无严重脂血、溶血和细菌污染2、正确操作，移液器吸头保证在血清/血浆液面以下但不能接触反应纸板；防止产生气泡；3、每批次标本数量不宜过多，防止干燥或血清水分挥发，4、实验前应检查水平旋转仪转速，常规进行质量控制；

20、5、稀释后摊开液面是顺序应从低浓度向高浓度进行；6、反应完毕应及时观察结果。,梅毒螺旋体抗原血清学试验,试验原理： 以梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。 感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者几乎终生阳性。,梅毒螺旋体抗原血清学试验,试验方法：（1）梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）（2）梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）（3）梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）（4）梅毒免疫层析法梅毒快速检测（RT）（5）荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）（6）化学发光免疫分析法（CLIA）（7）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）,TPPA/TPHA 感

21、染梅毒螺旋体后2-4周内，机体会产生特异的梅毒螺旋体抗体。TPPA具有较高的敏感性和特异性。 是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的金标准。,TPPA试验原理图,TPPA试验仪器耗材（1）试剂盒 “A”溶解液：用于溶解致敏颗粒“C”和非致敏颗粒“D” “B”血清稀释液：用于血清标本的稀释 “C”冻干的致敏颗粒 “D”冻干的非致敏颗粒 “E”阳性质控血清：为含梅毒抗体的兔血清制品，最终滴度1:320，（2）微量振荡器（3）移液器及吸头（4）保湿盒,TPPA试验检验流程（1）试剂准备：试验前复温30分钟（2）加稀释液（B液）（3）标本稀释（4）加致敏、未致敏颗粒（5）混合：微量振荡器震荡30秒（6

22、）反应：置湿盒，15-30至少2小时（7）观察凝集反应强度,TPPA试验检验流程,稀释液100ul标本25ul1:5,稀释液25ul1:10,稀释液25ul1:20,稀释液25ul1:40,吸取25ul,吸取25ul,吸取25ul,弃掉25ul,未致敏粒子,致敏粒子,TPPA试验结果判读 首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第3孔） 如出现凝集，则为无效试验。 如无凝集，则根据致敏粒子反应孔标本与致敏粒子是否产生1+-4+凝集反应，判断结果。,TPPA凝集反应分级4+：粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠；3+：粒子光滑覆盖大部分孔底；2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环；1+：粒子光

23、滑聚集覆盖孔子，周围有一明显细胞环；：粒子沉集孔底，中央形成一小点；：粒子紧密沉积孔底中央。,TPPA结果报告 未致敏粒子反应孔不出现凝集，致敏粒子反应孔出现凝集反应报告阳性（+）； 未致敏粒子与致敏粒子反应孔均未出现凝集反应报告阴性（-）,TPPA重吸收试验 如标本与非致敏和致敏颗粒均产生凝集者，标本需作重吸收试验：（1）加0.95ml非致敏颗粒溶液于小试管内；（2）加入0.05ml血清充分混匀，置室温吸收30分钟以上；（3）2000r/min离心5分钟，吸取上清液0.05ml加入第3孔；（4）第4孔加血清稀释液25ul；（5）孔3吸取25ul至孔4，混匀后弃去25ul；（6）分别加致敏与未

24、致敏颗粒（试验方法同上）,TPPA临床意义1、特异性高（98%），阳性可确证为现症或既往感染。2、终生阳性，不能作为疗效观察的指标。3、不能区分现症或既往感染。,梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA） 是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和酶标记的单克隆羊抗人免疫球蛋白抗体或酶标记的梅毒螺旋体基因重组抗原，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶标仪判定阳性反应。 可用于大样本的血清检测。,TP-ELISA（双抗原夹心酶联免疫吸附试验） 试验原理：是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上待检血清或血浆和酶标记的梅毒螺旋体基因重组抗原，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶

25、标仪判定阳性反应。,TP-ELISA（双抗原夹心酶联免疫吸附试验） 检测流程：与其他ELISA检测方法相同，按试剂盒说明书进行对照的设置及检测。 结果判读及报告： 1、根据阳性、阴性对照的OD值是否在规定的数值范围内以判断试验的有效性，并根据阳性、阴性OD值设定阈值（cut-off); 2、标本OD值大于或等于cut-off值报告阳性，否则报告阴性。,TP-ELISA（双抗原夹心酶联免疫吸附试验） 临床意义： 1、同TPPA，可用于非梅毒螺旋体血清试验阳性标本的确证试验； 2、可用于大样本筛查检测，但阳性标本需进一步进行非梅毒螺旋体血清试验复检，确证是否为梅毒现症感染者； 3、如对结果存在疑问

26、，可用TPPA或其他方法进行重复检测。,关于TP重组抗原,目前已重组的TP抗原20多种，包括：TP15KD、4D、TP24、G17等。G17的反应性比较高，目前的检测试剂盒趋向于将2种或2种以上重组抗原联合使用，综合其特性，从而获得更高的特异性和敏感性。,梅毒螺旋体抗体快速免疫层析检测法（TP-RT） 检测原理： 以硝酸纤维素膜为载体，将重组的梅毒螺旋体抗原固定在膜上，待检标本与标记的梅毒螺旋体特异性抗原结合并沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位形成重组抗原-特异性抗体-标记的特异性抗原复合物，显示出有色条带，可直接判读结果。,TP-RT检测流程： 全血和血清/血浆标本检测步骤不一样，但基

27、本流程为： 1、加样 2、加缓冲液 3、反应 4、判读结果,TP-RT临床意义：1、同TPPA、ELISA。可采用全血检测，适合于单样本快速筛查；2、简单、快速，如结果存在疑问，可用TPPA或其他方法进行重复试验。,TP-RT注意事项：1、如出现无效结果，应再次仔细阅读说明书，并用新的试条重新测试，如问题仍然存在，应停止使用该批号产品；2、注意试剂盒的储存条件，以及反应的温度条件；3、按试剂盒说明书，反应时间应足够、加样量也要准确。,梅毒螺旋体抗原血清学试验,梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验（FTA-ABS） 检测原理： 以梅毒螺旋体作为抗原，与经吸收剂吸收的梅毒血清抗体反应形成抗原抗体复合物，再加

28、入荧光素（FITC）标记的抗人免疫球蛋白，形成带有荧光的抗原抗体复合物，在荧光显微镜下螺旋体显出绿色荧光。,FTA-ABS 临床意义： FTA-ABS是梅毒螺旋体抗原血清试验的“金标准”，其临床意义同TPPA试验。 脑脊液的FTA-ABS试验阴性可排除神经梅毒，但特异性不高，存在假阳性。 操作繁琐、费时，需要高质量荧光显微镜和技术熟练的操作人员，一般不作为常规临床实验室检测方法。,梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析法（CLIA) 检测原理： 利用双抗原夹心法化学发光免疫分析原理，采用多种梅毒螺旋体特异抗原包被固相发光微孔板，用辣根过氧化物酶标记相同蛋白抗原作为标记抗原，与样本中梅毒螺旋体 抗体形成

29、双抗原夹心复合物后，加入化学发光底物，测定其发光值（RLU），根据cut-off值判断结果,CLIA仪器耗材 1、化学发光免疫分析仪； 2、微孔洗板机（全自动系统无需单独配置）； 3、微量振荡器（全自动系统无需单独配置）； 4、恒温箱：37 1 （全自动系统无需单独配置）； 5、移液器、计时器； 6、新鲜制备的蒸馏水或去离子水；,CLIA 结果判读及报告 根据化学发光免疫分析仪测量的发光值（RLU）自动判读结果。 标本RLU值大于或等于cut-off值，报告阳性； 标本RLU值小于cut-off值，报告阴性。CLIA的临床意义同TPPAELISA 2008年有文献报道，以TPPA作为金标准，其

30、 敏感性：94.23% 特异性：98%,梅毒IgM抗体检测,细菌、病毒感染后的早期体液免疫应答反应，结果是IgM抗体的产生，在梅毒螺旋体的感染中也不例外。 IgM抗体出现在感染的潜伏期、早期梅毒患者及晚期病人。 IgM抗体不能通过胎盘屏障及完整无损的血脑屏障，因此：若在新生儿血中检测到TP-IgM抗体是产前感染的诊断依据；若在完整无损的血脑屏障的脑脊液中出现，则提示患有活动性神经梅毒。,梅毒IgM抗体检测,可采用抗IgM单克隆抗体的酶标法、蛋白印迹法等进行检测。 目前测定IgM抗体的方法的敏感性不高，但检查到IgM抗体则有助于以下病例的临床诊断：先天梅毒、早期一期梅毒、晚期梅毒、非梅毒螺旋体抗

31、原血清试验的抗体阳转前的早期感染病人的判愈试验以及有梅毒史或其他螺旋体感染史病人的再感染。,龚匡隆教授等就现用梅毒血清试验临床应用价值进行了评估治疗前的敏感度 RPR TPPA TP-IgMELISA一期梅毒（硬下疳） 83.3% 91.7% 91.7%二期梅毒 100% 100% 100%早期潜伏梅毒 88.9% 100% 88.9%正规治疗12月后的敏感度 RPR TP-IgMELISA一期梅毒（硬下疳） - -二期梅毒 64.5% 67.7%早期潜伏梅毒 43.7% 43.7%,先天梅毒的实验室诊断方法,依据实验指标诊断查到螺旋体；非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度持续上升；滴度高于母亲4倍（

32、高于2个稀释滴度）；检测到抗梅毒的19S-IgM特异性抗体阳性；随访18个月观察抗体的变化（主要是指特异性抗体）。,神经梅毒的实验室诊断,实验室诊断标准梅毒螺旋体血清学检测阳性；脑脊液白细胞计数或蛋白质测定结果异常；脑脊液VDRL试验阳性；脑脊液检测到IgM抗体。,检测方法评价,各种检测方法在临床应用中都存在一定的局限性。1、梅毒的临床诊断：（1）特征性皮损中检测到梅毒螺旋体；（2）血清中检测到抗体。2、梅毒的表现非常复杂，感染后可不出现皮损或皮损不明显，检测不到抗原；3、感染极早期或窗口期的存在，检测不到抗体。,检测方法评价,血清学检测是目前提供诊断依据的主要的梅毒实验室检测方法。1、但检测

33、脑脊液中的抗体时，VDRL更具有临床诊断价值。2、对病人进行治疗效果的随访观察，需根据RPR或TRUST定量试验及抗体滴度的变化进行判断。3、抗原血清试验都是检测特异性梅毒螺旋体抗体。无论采用哪一种梅毒螺旋体抗原抗体检测方法，都不能代替非梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图,治疗前,治疗后,阳性：,阴性：,一期：,二期：,早期潜伏：,晚期潜伏：,三期：,早期,晚期,梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图,治疗前,治疗后,阳性：,阴性：,一期：,二期：,早期潜伏：,晚期潜伏：,三期：,早期,晚期,梅毒血清学试验结果的临床意义汇总,应用策略,梅毒血清学检测的

34、目的：临床诊疗、血液筛查、流行病学监测、高危人群筛查和干预等。无论什么目的，都需要根据非梅毒螺旋体抗原血清试验和梅毒螺旋体抗原血清试验这两类血清学检测方法的特性进行结果判断。,应用策略,在实际应用中，可根据实际目的选择任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查；但初筛阳性结果需经另一类梅毒血清学检测方法复检确证，才能够为临床诊断或疫情报告等提供依据。应用策略有三种方法。,应用策略,采用非梅毒螺旋体抗原血清试验进行筛查,应用策略,如果梅毒螺旋体抗原血清试验，采用的是ELISA、RT等方法，在遇到RPR阳性（+）而ELISA等试验为阴性（-）时，可采用TPPA方法进行进一步验证其阴性结果。,应用策略,采用

35、梅毒螺旋体抗原血清试验进行筛查,应用策略,如果梅毒螺旋体抗原血清试验，采用的是ELISA、RT等方法，在遇到ELISA阳性（+）而RPA试验为阴性（-）时，推荐采用TPPA方法进行进一步验证其阳性结果。 （试剂比对中发现：ELISA敏感性较高、相对于TPPA方法来说，存在一定的假阳性）,应用策略,第三种方法： 将梅毒螺旋体抗原血清试验与非梅毒螺旋体抗原血清试验同时开展。 在临床上对于RPR等阳性标本，由于同时开展了TPPA等试验，有利于生物学假阳性的排除，不会造成治疗上的浪费和虚假疫情的报告； 对于TPPA等试验阳性的标本，由于同时开展了RPR等试验，有利于确证现症患者，使疫情报告更加真实，同

36、时可对疗效进行观察和随访。,应用策略,无论使用哪一种策略，出具结果报告时，均需要注明采用的具体方法。 作为临床医生，在取得检验报告时，应根据病人的具体情况，进行分析和下诊断结论。比如：1、患者虽没有明显的皮肤表现、但近期有高危性行为、在接到TPPA阳性、RPR阴性结果时该怎么解释？（既往感染已治愈？近期感染早期梅毒？）2、患者否认高危性行为，在接到TPPA阴性、RPR阳性结果时，怎么解释？（生物学假阳性、其他免疫性疾病）,梅毒血清学检测实验室质量控制,TP、NG、CT等属三类病原微生物。1、人员2、环境条件：BSL-2、环境的控制3、检测方法和试剂的选择4、设备的维护和校准5、标准操作程序和文件的管理,梅毒血清学检测方法分几类？各试验原理以及为什么梅毒实验室诊断需要依据非梅毒螺旋体抗原血清试验和梅毒螺旋体抗原血清试验这两类方法的结果？哪些方法可用于梅毒的初筛试验？,谢谢！,