1、 - 45 - 1 标本采集与要求 1.1 收集尿液的容器 收集尿液标本的容器多种多样，留取标本最基本的要求是使用清洁、干燥、方便的容器。无论采用何种容器，都必须满足下列要求： a) 送检尿标本容器上应用标签，并注明病人的姓名、科别、床号、收集标本的时间及检测项目。 b) 容器只限一次性使用、清洁，不含有干扰实验的物质。 c) 所用容器至少可容纳 50ml 尿液，开口应大于 4cm，底部要宽，以防止尿液溅出。 d) 容器应方便运输，便于保存。 e) 对于儿科患者，特别是新生儿，可使用小型、特殊的容器。 1.2 收集尿液标本的方法 自然排尿法 适用于尿常规检查、细 菌检查和细胞学检查。采尿时，注
2、意防止尿道口分泌物的污染，特别是女病人易受阴道分泌物污染。临床最常用的方法是采用中段尿法，即尿流开始部分弃之，收集中段尿于尿杯中。细菌检查，必须用无菌盐水彻底清洗外生殖器，然后收集中段尿于无菌容器中。 1.3 尿液标本的种类 1.3.1 首次晨尿标本 收集早晨起床后的第一次尿液标本，此尿液最适合于尿液常规检查和 hCG 定性定量试验，特别是细菌及亚硝酸盐、尿蛋白和细胞、管型等有形成份的显微镜检查。 1.3.2 随机尿标本 随机留取任何一个时间的尿液标本，不受条件的限制。此类标本容易获得，是尿常规等检查最常用的方法 ，但受饮水、饮食和收集时间等多种因素影响，病理成份容易漏诊。仅适用于门诊、急诊病
3、人的过筛检验。 1.3.3 空腹尿标本 即进餐前的尿液标本。此标本对于糖尿病患者尿糖测定更为敏感。 1.3.4 餐后尿标本 即通常在餐后两小时收集的尿液。其对于病理性蛋白尿、糖尿检查更为敏感。午餐后尿，对尿胆原检查特别有益。 1.3.5 3 小时尿标本 即收集上午 3 小时的尿液标本。具体的做法是：嘱病人于留尿前一天多进高蛋白质食物，少饮水，使得尿液浓缩呈偏酸性，不含晶形或非晶形盐类。留尿日早晨 8 点排空膀胱的尿液，然后卧床 3 小时，至 11 点收集所有尿液标 本。此标本适用于病人每小时或每分钟细胞排泄率。 1.3.6 12 小时尿标本 即患者正常进食，晚上 8 点排空膀胱的尿液，于容器中
4、加入约 10ml 甲醛作为防腐剂，再收集- 46 - 以后 12 小时内所有尿液标本。曾常用于细胞、管型等有形成份的计数，如尿 Addis 计数等，因患者标本采集繁琐和有形成份长时间保存困难，现已少用，建议使用 3 小时尿标本。 1.3.7 24 小时尿标本 病人于早晨 8 点排空膀胱的尿液，再收集以后 24 小时内所有尿液标本。此标本用于体内代谢产物的定量检测，如尿蛋白、微量白蛋白排泄率、糖、肌酐定量检查。 1.4 尿液标本的保存 尿液化学物质和有形成份 不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如胆红质、尿胆原被氧化；抗坏血酸消失。细菌生长导致尿液成份的改变：尿素经细菌酵解生成氨，尿 pH
5、升高，使尿液有形成份破坏；葡萄糖被细菌降解，使病理性尿糖消失。因此应提倡常规检查在排尿后尽快送检，最好不超过 2 小时，如不能及时送检或分析，必须采取保存措施，常用方法有两种： 1.4.1 冷藏法 冷藏可抑制微生物生长，维持尿液 pH 恒定，使尿中有形成份的形态基本不变。但 4条件下，冷藏不得超过 8 小时，有时冷藏时无定形磷酸盐和尿酸盐可被析出形成沉淀影响尿沉渣检查，故检验前应恢复至室温。 1.4.2 化学防 腐法 常用的化学防腐剂有：甲苯：于尿液表面加甲苯数滴，使成一薄层，可防止细菌污染，通常用于尿酮体等成份保存；甲醛：每 100ml 尿液加 40%甲醛 0.5ml，可抑制细菌生长并固定尿
6、中有形成份，适用于尿液有型成份的检查，但不能适用于具有还原性醛基的化学成份 (如糖、 17-羟皮质类因醇 )检查；盐酸：每 1000ml 尿标本中加入浓盐酸 1ml 即可，使尿液维持在 pH2，此标本主要可用于 17-羟皮质类因醇、 17-酮类固醇、儿茶酚胺、丙酮定量等。 1.5 尿液标本收集的注意事 a) 临床医护人员和实验室工作人员应指导病人正确留取尿标本的 方法。 b) 应根据不同实验要求，留取不同种类的尿液标本、不同的取样方式和尿量。尿常规、尿生化、hCG 定性试验、尿液细胞计数、尿含铁血黄素标本，一般留取约 20ml。 c) 注意防腐剂使用的种类、使用的方式，并嘱咐病人注意防腐剂对自
7、已的伤害。 1.6 对不合格尿液标本收集的处理 对标识不明、标本量不合适、防腐剂和容器使用不当等不合格的标本，按程序文件标本采集与管理的控制程序处理。 2 试剂 2.1 干化学试纸 试剂组成：测试条、定标条、质控液 生 产厂 家 ：广州市花都高尔宝生物技术有限公司 经销商： 广州市花都高尔宝生物技术有 限公司 试剂保存： 质控液 保存，其余室温保存。 - 47 - 3 尿液干化学检测原理 3.1 pH 值 检测原理：利用 pH 值复合指示剂，如溴麝香草酚蓝及甲基红， pH 值指示范围 4.88.5。 干扰因素：本试验一般认为无干扰，但如操作时试条上留有较多尿液，可因尿蛋白试垫上的酸性缓冲液漏出
8、，污染 pH 值试垫，使试验结果偏酸。细菌繁殖尿样可影响 pH 值。 3.2 尿比密 (SG) 检测原理：试剂带模块中含有多聚电介质（甲乙烯酸酰马来酐）、酸碱指示剂（溴麝香草酚蓝）及缓冲物。采用酸碱指示剂法，利用经过处理的多聚电解质的 Pka 的变化与尿液离子浓度相关 的原理。试剂条中的多聚电解质含有随尿标本中离子浓度而解离的酸性基团，离子浓度越多，酸性基团解离越多，使模块中的 pH 改变，这种改变可由模块中的酸碱指示剂的颜色的变化显示出来，进而换算成尿液的比密值。 干扰因素：不同的干扰因素会对比密的测定结果产生影响：尿液中非离子化合物增多（如葡萄糖）时，可使悬浮法和折射仪法测得的结果偏高，但
9、试带法只与离子浓度有关，不受影响；尿液中蛋白增多时，悬浮法、折射仪法和试带法都有不同程度的增高，以试带法又最为明显；试带法易受 pH 的影响，当尿液 pH7 时应在测定结果的基础上增加 0.005 作为由于尿液 pH 损失的补偿。 3.3 白细胞 检测原理：中性粒细胞胞质内含有特异性酯酶，作用于模块中的吲哚酚酯，并与重氮盐反应形成紫色缩合物，其颜色深浅与中性粒细胞的含量呈正比。 干扰因素：尿液标本必须新鲜，留尿后应及时测定，以免白细胞破坏，导致干化学法与镜检法人为的试验误差。此法只能测中性粒细胞，不能与单核细胞、淋巴细胞反应，在肾脏移植病人发生排异反应时，尿中以淋巴细胞为主或其它病因引起的单核
10、细胞尿时，会产生阴性结果；尿液中污染甲醛或含有高浓度淡红素或使用某些药物时，可产生阴性结果；尿蛋白 5g/L 或尿液中含有大剂量先锋霉素或庆大霉素等药物时，可使结果偏低或出现假阴性结果。 3.4 红细胞 检测原理：模块中有过氧化氢茴香素或过氧化氢烯钴和色原两种物质。尿液中红细胞内的血红蛋白或其破坏释放出的血红蛋白均有过氧化氢酶样活性，可使过氧化氢茴香素或过氧化氢烯钴分解出原子氧，后者能氧化有关色原，使之呈色。 干扰因素：干化学法既可与完整的红细胞反应，又能测定尿中的游离血红蛋白，造成仪器法与目测法有差异；尿中含有的易热酶、肌红蛋白或菌尿可引起假阳性发应；大量维生素 C 可干扰试验，是结果呈现假
11、阴性；强氧化剂（ 次氯酸钠等）可致使假阳性。 3.5 蛋白质 检测原理：利用指示剂蛋白误差原理。模块中含有酸碱指示剂溴麝香草酚蓝、枸橼酸缓冲液系统和表面活性剂。在 pH3.2 时，溴麝香草酚蓝产生阴离子，与带阳离子的蛋白质结合后发生颜色变化。 干扰因素：试带法测定尿蛋白的影响因素有：服用奎宁和磺胺嘧啶等药物使尿液呈碱性时（ pH9.0）时，会使干化学法出现假阳性结果而磺基水杨酸法出现假阴性结果；大剂量使用青霉- 48 - 素、有机碘造影剂时，会使试带法测定尿蛋白产生假阴性结果而磺基水杨酸法出现假阳性性结果；干化学法对球蛋白的的敏感性仅是白蛋白 的 1/100 1/50。因此，对于肾病患者，若需
12、要对尿蛋白进行定量测定，应使用磺基水杨酸法定性和双缩脲法定量；尿液中含有其他分泌物（如生殖系统分泌物）或含有较多细胞成分时，可引起假阳性；白蛋白有相应的反应，检出白蛋白 150300mg/L( )， 300mg/L(+)， 1000mg/L(+)， 3000mg/L(+)；对于球蛋白、本周蛋白及其他尿蛋白不发生或仅轻度反应，故反应阴性并非一定不含蛋白。而对于阳性病例或与临床诊断不符合使应用磺基水杨酸法作确证试验。 3.6 亚硝酸盐 检测原理：尿液中的亚硝酸盐将模块 中的对氨基苯砷酸重氮化而成重氮盐，后者与 1， 2， 3， 4 四羟基对苯喹啉 3 酚偶联使模块产生红色。 干扰因素：尿液中亚硝酸
13、盐的检出率受三个因素影响：尿路感染的细菌是否含有硝酸盐还原酶，食物中是否含有硝酸盐，尿液标本是否在膀胱停留 4 小时以上。符合三个条件，此试验的检出率为80，反之可能呈阴性结果。因此本实验阴性并不能排除菌尿的可能，同样亚硝酸盐试验阳性也不能完全肯定泌尿系统感染，标本放置过久或污染细菌可呈假阳性。 3.7 尿糖 检测原理：采用葡萄糖氧化物酶及过氧化物酶偶联原理，对葡萄糖有特异性。模块中含有葡萄糖氧化酶 、过氧化物酶和色原。葡萄糖氧化酶把葡萄糖氧化成葡萄糖醛酸和过氧化氢，后者再由过氧化物酶催化释放出原子氧，而使色原呈现颜色。 干扰因素：检测灵敏度高，葡萄糖含量为 1.67 2.78mmol/L 时
14、，即可出现弱阳性。本实验可因尿中含大量维生素而出现假阴性；高比重碱性尿，亦可使糖检出偏低，使低糖浓度尿呈阴性。 3.8 尿酮体 检测原理：模块中含有亚硝基铁氰化钠，可与尿液中的乙酰乙酸、丙酮产生紫色反应，而不对羟丁酸起反应。 干扰因素：由于尿酮体和乙酰乙酸都具有挥发性，乙酰乙酸更易受热分解成丙酮；尿液被细菌污染后，酮体消 失，因此，尿液必须新鲜，及时送检，以免因酮体的挥发或分解出现假阴性结果 和结果偏低；不同病引起的酮症，酮体的成分不同，即使同一病人不同病程也可有差异，分析结果时应特别注意。 3.9 胆红素 检测原理：结合胆红素在强碱性介质中，与 2， 4 二氯苯胺重氮盐起偶联反应而呈紫红色。
15、 干扰因素：标本必须新鲜，以免胆红素在阳光照射下成为胆绿素；尿液中含高浓度维生素C 时和亚硝酸盐时，抑制偶氮反应使胆红素测定呈假阴性。患者接受大剂量氯丙嗪治疗或尿中含有盐酸苯偶氮吡啶的代谢产物时，可呈假阳性。 3.10 尿胆原 检测原理： 尿胆原与模块中含有的对 二甲氨基苯甲醛反应后呈鲜红色。 干扰因素：尿液中一些内源性物质如胆色素原、吲哚、胆红素等可使尿胆原检查结果出现假阳- 49 - 性，一些药物（如吩噻嗪）也可色干扰试验。 4 分析检测前的准备 每天早上上班时，在进行质控物和病人标本分析检测前，进行仪器状态和试剂检查，并将仪器流水号改为“ 001”，确保准备完好后才能进行分析。并将检查结
16、果记录在相应的仪器设备使用记录上。 5 质控检测 5.1 质控物准备 将质控物从冰箱取出，室温放置 10 分钟恢复室温后，轻轻颠倒混匀。 5.2 上机检测 将质控液滴入试纸条的测试垫上，用试纸 条侧面靠近吸水纸去除多余的液体，然后上机测试。具体操作见相应仪器作业指导书。测试后的结果须记录在登记本上，然后录入实验室信息系统。 5.3 质控规则 靶值 1+。 失控的处理见程序文件检测结果质量保证的管理程序。 5.4 质控检测完毕后，及时将质控物放回冰箱原位。 6 标本干化学检测 6.1 对于有条码的标本，先在标本接收站过单，打印空白单；对于无条码的标本，须检测人员自行打印条码。 6.2 每日的标本
17、从“ 001”开始编号，与仪器的流水号对应。在编号过程中，检查标本是否合格。 6.3 用于检测专用离心试管的编号同标本的编号，同时排于试管架上。 6.4 混 匀尿杯中的尿液，倒入专用离心试管 10ml。 6.5 将试纸条的测试带完全浸入试管内的尿液中， 1 秒取出。取出后，将试纸条的侧边沿管壁刮去多余的尿液。 6.6 放置于仪器检测区上，仪器检测到有试纸条后，推进器自动将试纸条推进至测试区，开始测试； 6.7 测试完毕后，仪器自动将试纸条推出测试区至废物槽中，检测结果和流水号传入实验室信息系统， 6.8 同时仪器内置打印机打印测试结果。将该打印的结果贴于申请单或空白单上。 7 尿沉渣检查 7.
18、1 目的 利用显微镜，对离心后尿沉渣中的细胞、管型、结晶及偶可发现的寄生虫进行分析和计数，以对干化学的检 测结果进行确认和鉴别。 7.2 镜检器材 显微镜、离心机、专用离心试管、载玻片、盖玻片、吸管等。 7.3 镜检的条件 对满足下列条件之一者，必须进行镜检： a) 泌尿科尿标本； b) 医生要求镜检的标本； c) 干化学检查尿白细胞阳性； - 50 - d) 干化学检查尿红细胞阳性； e) 干化学检查尿蛋白阳性； f) 干化学检查尿亚硝酸盐阳性。 7.4 操作程序 7.4.1 根据镜检的条件，选择干化学检测后的标本， 1500 2000 转 /分钟离心 5 分钟； 7.4.2 取出试管，将上
19、层清晰尿液倒入另一支干净试管，并将上清液试管放回离心前的试管架原位，离心过的试管留下沉淀物 0.2 毫升； 7.4.3 混匀管底沉淀物，滴一滴 于干净玻片上，置显微镜下观察； 7.4.4 先用低倍镜观察 10 15 个视野，以 /LP 报告所见管型等； 7.4.5 再用高倍镜连续观察 10 个视野，红、白细胞、上皮细胞等。 7.5 尿沉渣的报告方式 类 型 阴性 偶 见 + + + + 红细胞（ HP） 0 0-3 4-10 11-30 30 50(满视野，成堆 ) 白细胞（ HP） 0 0-5 6-10 11-30 30 50(满视野，成堆 ) 上皮细胞（ HP） 0 0-4 5-10 11-30 30 50(满视野，成堆 ) 结晶 (占视野范围 ) 0-1/4 1/4 2/4 3/4 4/4 管型（ LP） 0 以 /LP 报告 注：红、白细胞、上皮细胞的偶见以 /HP 报告。 急诊标本和门诊标本 1 小时，其余标本 4 小时。 8 标本保存 检测前的标本室温保存 3 小时，检测后的标本不保存。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 年 月 日
