1、1附件 1 霍乱暴发疫情调查处理规程一、疫情发现和报告各级疾病预防控制中心应密切注意本辖区的腹泻疫情动态，在霍乱高发季节，尤其对具有霍乱类似症状并且短时间（五天）内在同一地区出现多个症状相似的病例报告，需要通过病例及其报告的分析，考虑和避免霍乱的漏诊或误诊。各级疾病预防控制中心接到霍乱暴发或疑似暴发疫情后，需详细记录报告者和报告单位的联系方式、疫情发生地点和时间以及病例数等概况、病例特征、临床和实验室诊断、询问对可能污染源的调查情况，并告知报告单位保留可疑食品、水及病人吐泻物以便进一步检查。立即向上级报告，迅速建立工作队伍。可实施网络直报的专业卫生机构的报告者对确证病例需立即进行网络直报。二、
2、现场调查霍乱暴发现场的处理要本着“时间早、范围小、措施严、落到实处” 的原 则，调查 与处理同步进行。现场调查工作主要包括：（二）核 实 诊 断 。到 达 现 场 后 首 先 通 过 访 视 病 人 、医 生 和 能 提供 病 人 患 病 信 息 的 人 ，检 查 实 验 室 检 测 结 果 ，对 临 床 标 本 或 获 得的 分 离 菌 株 应 送 同 级 或 上 一 级 疾 病 预 防 控 制 中 心 检 验 实 验 室 进 行复 核 检 测 ，以 进 行 诊 断 的 核 实 。（二）散发或暴发流行的基本概况描述。统计病例在时间、地点和人群中的分布，划定疫点、疫区，分析二、三代病例，从流行
3、病学上分析传播链。（三）个案调查。立即开展个案调查，按照“附表 2 霍乱个案2调查表”进 行调查。个案 调查应及时汇总分析。（四）散发、暴发流行因素的流行病学调查和分析。应通过个案调查信息和病例的三间（时间、地点、人群）描述，推断首发病例、传播链，提出感染来源的假设，设计病例对照研究等方法进行发生因素的分析，以追溯感染来源，调查受累人群。应对病人的行为因素、自然环境因素等广泛收集资料，收集疫点（疫区）的基本资料，包括气象、地理、水系、人口状况、生活习惯、环境与饮食卫生、医疗服务设施和能力等，在个案调查表中应尽可能详细调查感染者发病前五天内的饮食行为。（五）调查和确定密切接触者。目的是发现新病例
4、、疑似病例以及带菌者，是主动检测和监测，防止误诊和漏诊，从流行病学上确定可能的播散范围并按霍乱防治手册（第六版）中的有关规定采取控制措施。对带菌者的个案调查可使用附表 2 填写相关项目。（六）样品采集、实验室检测与实验室监测。实验室检测应与流行病学调查密切结合，从最早怀疑或诊断霍乱病例开始即需要收集病人临床标本，包括粪便和呕吐物。在工作能力可达到的范围内，要对每个病例收集标本分离霍乱弧菌。对病人接触的可疑食品及可疑水体，广泛和规范地采集标本进行病原分离。因聚餐引起的暴发，除采集可疑食品标本外，对食品清洗水的来源也需采集标本做病原分离。获得的病原体按本方案中的相关规定作病原特征检测，汇总报告。外
5、环境和食品中分离的病原，提供给相关实验室作进一步分析，确定是否相似，以从病原学上获得感染来源证据。在流行病学调查的始终、安排相应的标本采集和检测，进行实验室监测，与流行病学监测相结合分析感染来源和暴发流行的扩散。3（七）疫点（疫区）处理。按照霍乱防治手册（第六版）以及其他有关霍乱防治文件的规定进行疫情控制。（八）补充调查。随调查的深入、假设的提出和验证的需求、以及控制和预防工作的展开，根据需要及时开展补充调查，包括流行病学调查和实验室检测。（九）总结。对散发、暴发流行的处理，在控制工作完成后进行系统全面的工作总结，并将总结报告逐级报上一级疾病控制中心，直至国家疾病控制中心。总结报告中需包括依据
6、具体数据（如采取控制措施前后的二代发病率、标本的病原分离率等，见霍乱防治手册第六版中第二章第二节“ 三、防治措施的效果评价” ）对 控制工作的 评 价和下一步工作建 议。4附件 2标本采集及检测要求一、病人标本的采集及检测（一）标本的采集：标本以病人粪便为主。粪便标本的采集应争取在发病早期，服用抗菌药物之前并尽快送到检验室。采便方法可用棉拭采取自然排出的新鲜大便，亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内 35cm 处采取。采标本要求：水样便采取13ml ，成形便采取指甲大小的 粪量，棉拭子从肛门取出后明显粘上粪便才算取样成功。病人的呕吐物、沾染粪便或呕吐物的衣服和尸体的肠内容亦作为检材。（二）标
7、本的送检：采得的标本应立即接种于培养基。剧烈腹泻病人的水样便含有大量病菌（106109/ml），在接种碱胨水增菌管的同时，应直接接种庆大平板分离培养。不能立即送到实验室检查的，要接种于保存培养基内，尽快送往实验室。送检标本可放入碱胨水、文一腊二氏保存液或插入 C-B 半固体保存培养基中。标本与保存液的比例要适当，810ml 保存液可加入13ml 液体便或指甲大小的成形便， 过 多的大便量可降低保存液的 PH 值 。装标本的试管或小瓶应洁净不残留有抗菌素，不能用装过抗菌素的小瓶装标本。送检标本时应填写“标本送检单” ，写明姓名、地址、 发病时间、采集时间、临床诊断等。标本管或小瓶贴上送检号和姓名
8、标签。病人标本含有大量的病菌，标本装入试管或小瓶时，注意勿污染容器口外壁，必须妥善包装，放在坚固的送检箱内由专人（2人）专车送往实验室，运送过程中注意安全。送检箱每次用后须经消毒处理。5（三）检验程序和诊断报告：按霍乱防治手册进行。1.分离培养基有庆大琼脂平板（强选择性）及碱性琼脂平板（弱选择性）两种培养基，平板应新鲜配制，接种前培养基表面适当烘干。划线培养应掌握能分离出尽量多的单个菌落。每个标本每次接种一个庆大琼脂平板。2.直接分离培养：急性期病人水样大便标本在增菌培养的同时，取其粘液絮片或用棉拭标本直接作分离培养。这不仅能缩短检出时间，还可避免标本中其它杂菌特别是非 O1 群霍乱经增菌后大
9、量繁殖而影响 O1 群霍乱弧菌的分离。3.增菌后分离培养：所有粪便标本都应经过增菌，尤其是恢复期病人，带菌者或用过抗菌药物的病人标本含菌量少，单靠直接分离不易检出，需经增菌培养再作分离。碱胨水标本管放 37增菌 68 小时后分离，夏天可将运送时间计算在内。标本如为保存液或半固体保存培养基，则取 1.0ml 或将棉拭转种至810ml 碱胨水中， 37培养 68 小时 后，平稳地从温箱中取出试管架，从霍乱弧菌生长最茂盛的菌膜下表层，取一接种环，划线接种于庆大琼脂平板。标本含菌量少时，为提高检出率，实行 2 次增菌，取第一次碱胨水增菌 68 小时的培养物的表层液 0.10.2ml，接种于810ml
10、的碱胨水中， 37培养 68 小 时再做分离。4.疑似菌落鉴定基本要求：分别从每个庆大琼脂平板上挑取5 个以上的（少于 5 个的全部挑取）疑似菌落接种于营养琼脂斜面或营养琼脂平板，置 37 1824 小时纯培养，取斜面纯培养物进行氧化酶试验，氧化酶试验阳性的分别与 O1 群及 O139 群霍乱诊断血清玻片凝集试验，血清凝集阳性的菌株继续按霍乱防治手册进行相关的系统鉴定并报告结果。必须注意同一标本中6O1 群及 O139 群霍乱弧菌可能同时存在，对所有选出的氧化酶试验阳性菌株都必须用 O1 群及 O139 群诊断血清进行凝集试验，以免遗漏。从病人标本中检出的 O1 群及 O139 群霍乱弧菌，要
11、求立即上送自治区疾病预防控制中心进一步鉴定。二、水体及水产品标本的采集及检测（一）采样1.水体：水体的采样一般要求用灭菌的 500ml 水样瓶采集相对静止的表层水（30cm 以内）500ml ，加盖密封后在室温（20-25）下送实验室检测。取水点的选择应结合流行病学调查等资料确定，同时，采样时应选择在水流平稳或静止处吸取。非疫情状态下的监测采样时间一般在清晨时，此时水体未受人群活动等因素影响。每个采样点中采样位置应相距数米、采集不少于 2 瓶作为平行检测。采样时立即测定采集样品的温度、pH 值，并记录当天的最高温度和最低温度，数据始终随每份样品的检测报告逐级上报。2.水产品：水生动物的采样通常
12、选取活的或新鲜的水生动物为采集对象，有时也应考虑冰冻的水生动物，以无菌操作采集合适的部位，如鳃部和/ 或肠内容物等，置采样瓶（管）或食品采样袋密封，在常温下送检。有条件的采样点可将水生动物整体采回实验室再进行相关处置。同时，要求以无菌棉签涂抹五只（条）以上的某类水生动物体表、鳃及/或肛门，置碱性蛋白胨水送检，每管碱性蛋白胨水作一份样品看待。3.样品的送检：统一要求在样品采集后，按生物安全规范，在室温条件下 3 小时内送抵实验室开展霍乱弧菌的分离培养。（二）分离培养1.培养基要求：以碱性蛋白胨水（pH 8.6）作为增菌液；强选择7性分离培养基使用庆大霉素培养基或 TCBS 培养基；弱选择性培养基
13、统一使用碱性琼脂。每批培养基在使用前必须进行质量检测，无条件开展质量检测的监测点应由省疾病预防控制中心协助解决。2.水体样本的增菌：增菌培养方法规定采用以下两种之一。（1）十倍浓缩碱胨水增菌培养法：详见霍乱防治手册（第六版）第 75 页。（2）水产品样本增菌：使用无菌棉签涂抹的样品，直接接种到碱性蛋白胨水作为增菌液处理。整体或局部采回的样品，在实验室应先在无菌操作的条件下，将其解剖，取鳃部和肠内容物剪碎后，置 100ml 三角瓶内，加入 5-10 倍体积的碱性蛋白胨水增菌；但小贝壳类动物，则用锤子将外壳击碎，整体放入三角瓶中增菌；甲壳类动物除含肉质部分外，其余部分（包括鳃、肠、足、表层外壳等）
14、整体放入三角瓶进行增菌处理。（3）环境样品的霍乱弧菌分离培养程序：样品在 37经 8-12h增菌后，每份样品分别接种一个 9cm 直径的庆大霉素琼进行划线分离培养，同时，以无菌吸管吸取 0.2-0.5ml 增菌液接种到新的碱性蛋白胨水中，进行二次增菌培养后，再如上述步骤进行划线分离培养。特别强调所有环境样品的增菌分离培养步骤必须包括上述二次增菌和平板分离。（4）疑似菌落鉴定基本要求：从庆大霉素琼脂平板上挑取 5个以上的（少于 5 个的全部挑取）疑似菌落接种于营养琼脂斜面置 3718-24h 纯培养，取斜面纯培养物进行氧化酶试验，氧化酶试验阳性的分别与 O1 群及 O139 群霍乱 诊断做血清玻
15、片凝集试验，血清凝集阳性的菌株继续按霍乱防治手册（第五版）进行相关的系统鉴定并报告结果。必须注意同一样品中 O1、O139 群霍8乱弧菌可能同时存在，对所有选出的氧化酶试验阳性的菌株进行 O1、O139 群血清凝集试验，以免遗漏。从环境中检出的 O1或 O139 群霍乱弧菌，要求立即上送自治区疾病预防控制中心进行噬菌体-生物分型。 对 O1 群及 O139 群诊断血清凝集试验阴性的菌株，不需要送自治区疾病预防控制中心。三、公厕、苍蝇等外环境和食品标本参照霍乱防治手册（第六版）进行。9附件 3 年霍乱个案调查表地区国标编码 病例编码-1一般情况1.1 姓名 ，若为 14 岁以下儿童，家长姓名 1
16、.2 性别 男 女 1.3 年龄 （岁、月） 1.4 职业 幼托儿童 散居儿童 学生 教师 保育员 餐饮食品人员 公共场所服务员 商务人员 医务人员 工人 民工 农民 牧民 渔（船）民（15）海员及长途驾驶员（16）公务人员及职员 离退人员 （18）家务及待业 （19）不详（20）其他 1.5 文化程度 学龄前儿童 文盲 小学 初中 高中 大学及以上 不详1.6 现住址 户口地 1.7 工作（学习）单位 1.8 联系人 联系电话（办） （宅） （手机） 2发病情况21 发病日期（yy/mm/dd） 22 发病地点（yy/mm/dd） 23 首诊时间（yy/mm/dd） 24 首诊单位 25 诊
17、断医院 26 报告时间（yy/mm/dd） 27 是否住院 （1）是（2）否 271 住院时间（yy/mm/dd） 272 出院时间（yy/mm/dd） 3临床表现3.1.腹泻（1）有（2）无 3.2 腹泻持续 天 3.3 每天最多泻 次 3.4 腹泻方式（1）喷射状（2）里急后重（3）通畅（4）失禁（5）绞痛 3.5 粪便性状（1）稀便（2）水样（3）米泔样（4）洗肉水样（5）大块粘膜 3.6 粪便量（1）多（2）少 103.7 呕吐（1）有（2）无 3.8 呕吐持续 天 3.9 每天最多吐 次 3.10 呕吐物性状（1）食物（2）水样（3）米泔样（4）血水样 3.11 呕吐量（1）多（2）
18、少 3.12 其他（1）发热（2）腹痛 3.13 失水情况（1）重度（2）中度（3）轻度 3.14 临床类型（1）重（2）中（3）轻 4 诊断依据4.1 可疑流行病学史（1）有（2）无 4.2 临床表现典型（1）有（2）无 4.3 霍乱弧菌检验阳性（1）有（2）无 4.4 病原分型：（1）小川型（2）稻叶型（3）彦岛型（4）O139 群（5）未分型 4.5 噬菌体-生物型 5 诊断结论（1）霍乱临床确诊病人（2）实验室诊断病例（3）带菌者 6 疫点情况6.1 病人发病前的活动场所 6.2 活动时间（yy/mm/dd） 6.3 病人发病后的活动场所 6.4 活动时间（yy/mm/dd） 6.5 病人吐泻地点
