1、 毕业论文开题报告 环境科学 温度对荧光假单胞菌生物特性的影响 1 课题研究意义及国内外研究现状 荧光假单胞菌在 分类学上属 -变形菌纲、假单胞菌目、假单胞菌科的假单胞菌属。细胞为直的杆菌，大小为 0.7-0.8 2.3-2.8 m，不产芽孢，革兰氏染色阴性。有数根极生鞭毛，运动。需氧 ， 进行严格的呼吸型代谢 ， 以氧为最终电子受体。能以硝酸盐为替代的电子受体进行厌氧呼吸。 荧光假单胞菌 化能营养异养 型细菌 ，不需要有机生长因子。氧化酶 和 接触酶均属于阳性 。能利用葡萄糖和果糖，有些菌株 还 能从蔗糖合成果聚糖，明胶液化。 它的 生长温度 范围 是 4-37 ，最适生长温度是 25-30
2、，其 DNA含有 60-61%的 G+C。 此菌 广泛分布于自然界，如土壤、水、植物及动物活动环境中。 且 该菌生化能力活跃，可降解许多人工合成化合物，常被用于环境保护。 但同时， 荧光假单胞菌 也 是一种环境污染菌 ， 对于人类是一种罕见的机会致病菌。 曾经出现过一件比较关注的荧光假单胞菌污染事例，市场上出现了“发光猪肉”。从临床意义上讲，荧光假单胞菌 可从伤口、痰、胸水、尿和血液中分离出来，也可从血库存在中分离出。可在冰箱储存的血液及血液制品中繁殖，而且自溶后释放内毒素 ，其内毒素的磷脂部分 ，可导致输血后不可逆的休克。 可污染食品和环境，并对人类、鱼类致病。不同来源的菌株其对温度的适应性
3、存在差异，如临床分离的荧光假单胞菌菌株适应于37生长，鱼类病原株一般最适生长温度在 20-28，部分低温菌株在 4生长，可能污染牛奶等冷藏食品。关于生长温度对荧光假单胞菌的生物学特性的影响，国外研究者如 Gill等（ 1975）报道了生长温度对荧光假单胞菌脂类的影响，指出，在 10以上，脂肪酸的组成随着生长条件的改变而变化，但是在较低的温度下，严格控制了脂肪酸的饱和度，并没有受到增长率或者培养基质的影响； Danielh Hug 等（ 1974）报道了温度对嗜冷假单胞菌组氨酸氨酶的影响，指出，组氨酸氨酶活性在 20-35之间最大，低于 20，酶活性随着温度的降低而降低。 荧光假单胞菌可以产生蛋
4、白酶、酯酶、和磷脂酶等胞外酶，其产酶特性及其细胞结构成分如外膜蛋白种类和脂多糖结构等均受生长温度的影响；该菌对宿主细胞的粘附性、细胞毒性作用也受到培养温度的影响。本研究开展培养温度对荧光假单胞菌生物学特性的影响研究，包括不同培养温度下产酶特性、外膜蛋白和脂多糖的种类和产量等，旨在为控制该菌的污染或感染提供部分基础。 2课题研究的 主要内容、预期目标和研究方案 （ 1）研究内容 1，胞内产物的酶活性分析：提取 4、 15、 20、 25、 30培养的荧光假单胞菌的胞内产物，用杯碟法测定不同培养温度下细菌的产酶特性； 2，菌株的胞外酶活性分析：用特定培养基的方法对 5 个不同培养温度下的菌株进行胞
5、外酶活性分析； 3，不同温度下外膜蛋白 OMP和脂多糖 LPS的含量比较：先对 30、 22、 15培养的 1.1823提取 OMP 和 LPS。再用 Bradford 法比较各个温度下 OMP 和 LPS 的含量； 4， SDS-PAGE凝胶电泳检测不同培养温度的 OMP 及 LPS：提取的不同温度下粗 OMP 和粗LPS 采用解离非连续缓冲系统垂直板电泳（ SDS-PAGE）和银染法进行分析。 （ 2）预期目标 1，同种菌体在同种培养基下的产酶特性在不同培养温度下存在差异性。 2，外膜蛋白和脂多糖的种类和含量在不同培养温度下存在差异性。 3 课题进度计划 1， 2011 年 9 月 10
6、月，研究并观察出不同温度下胞内产物的酶活特性； 2， 2011 年 10 月 11 月，研究并观察出不同温度下胞外产物的酶活特性； 3， 2011 年 11 月 12 月，提取出外膜蛋白，研究其在不同培养温度下的不同； 4， 2011 年 12 月 1 月， 提取出脂多糖，研究其在不同温度下的不同； 5， 2012 年 1 月 4 月， 结果整理和论文准备 。 4 参考文献 1 景慎英 ,孙道学 . 从变质生猪肉中检出荧光假单胞菌 J. 中国食品卫生杂志 , 1997(3): 28-29. 2 宋旭霞 ,韩秀霞 . 从胆汁培养中获得一株荧光假单胞菌的鉴定分析 J.青岛大学医学院学报 , 200
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