1、缺血性心脏病(心绞痛、心肌梗死 )药一、实验设计的医学基础根据缺血性心脏病 (心绞痛、急性心肌梗死 )的主要症状发现，中医将其归属于 “厥心痛 ”、 “真心痛 ”、 “胸痹 ”范畴。病位以心肾为主。基本病机为本虚标实。本虚以脏气亏虚为主可兼阴虚；标实以血瘀痰阻多见，可兼气滞、寒凝。基本治法为宣痹通阳，活血化瘀，芳香温通及扶正固本。缺血性心脏病可由不同病因引起，最常见的原因是冠状动脉粥样硬化、冠状动脉血栓及冠状动脉痉挛。其共同特点是由于心肌供血不足所致氧的供需矛盾而发生的一系列病理生理改变及证候。改善心脏血管功能，增加心肌的供血供氧，降低氧的消耗，改善心肌代谢，缓解心绞痛，减小心肌梗死面积是药物
2、治疗的主要目的。二、药效学研究的实验设计缺血性心脏病需要进行的药效学实验较多， 般应以整体动物实验为基础，根据药物特点及实验要求适当选用器官、组织、细胞及分子水平的实验，多层次实验相结合，有利于重复验证和说明作用原理。但由于缺血性心肌发病机制复杂，防治的途径，方法及药物类型亦较复杂。应明确研究的思路，作用的途径，选择适宜的主要药效学实验方法及必要的观测指标，进行止确的分析判断，以求得科学的结论。(一 )对心肌缺血心肌梗死的防治作用试验1常用动物模型(1)冠状动脉阻断或缩窄形成心肌缺血和心肌梗死模型：通过阻断或缩窄冠状动脉方法，如结扎、电刺激、气囊法，血管内异物法及注入凝血酶或ADP法等。(2)
3、药物诱发心肌缺血模型：通过药物诱发冠脉痉挛法，如垂体后叶素、麦角新碱，以及通过增加心肌耗氧法，如异丙肾亡腺素等。(3)离体实验心肌缺血模型：结扎离体心脏冠状动脉法、离体心脏低氧或无氧灌流法。(4)体外培养心肌细胞缺血样损伤模型：控制心肌细胞的供氧和培养基中的含糖量，形成 “缺血样损伤 ”模型。(5)心肌缺血冉灌注损伤模型：整体动物心脏缺血再灌注损伤离体心脏和心肌细胞缺氧缺糖再灌注损伤等模型。以上心肌缺血模型第一项可用于急性和慢性心肌缺血实验，可观察药物的药理作用、起效及作用时间等。其余均为急性心肌缺血模型，可作药物作用机制分析研究。2观察指标(1)直接测定心肌梗死范围： 大体标本活体染色法，以
4、定量组织学 (NBI染色或 TIC染色或双重染色 )观察心肌梗死面积的改变。 病理切片显微镜检查，镜下观测心肌病变程度和范围。 病理切片荧光照相法，利用四环素能与心肌坏死细胞中的钙整合的特性，在切片上进行荧光照相，以测定梗死面积。 电子显微镜观察细胞膜、线粒体、内质网、细胞核及染色质等心肌细胞超微结构的改变。(2)间接测定心肌梗死范围： 心外膜电图标测法，阻断或缩窄冠状动脉形成心肌缺血及心肌梗死，以多点心外膜电图标测心肌缺血的程度和范围的变化。 酶学指标观测，测定血中磷酸肌酸激酶 (CPK)、 乳酸脱氢酶(LDH)等与心肌损伤相关的酶类变化，动态观察心肌损伤情况，定量分析心肌损伤程度。 核示踪
5、法，将肘心肌坏死有亲和力的物质进行核索标记来观察梗死情况，常用的有锝 四环素和锝 焦磷酸亚锡。(3)缺血区测定指标： 染料及荧光素法，通过从冠脉注入染料或荧光素，然后进行肌切片观察心脏血流灌注情况，从而计算无染料 (或荧光 )的面积 (即缺血面积 )，如合并应用 NBT 做活体双重染色法可计算梗死面积与缺血面积的比值。 核示踪法，利用放射核铊依靠钠泵进行转运而不能进入缺血或坏死细胞的特点，通过闪烁照相来观察心肌缺血部位及范围。 放射自显影法观察缺血区。 心表面荧光法，用表面荧光照相来分析缺血 K情况。 冠脉血流量、冠脉返流量及返流压的测定。 心肌区域血流量的测定。(4)其他可供分析的指标：心肌
6、代谢指标，如心肌氧代谢，其他物质及能量代谢，如 FFA、 ATP、 PGI2、 TXA2、 cAMP/cGMP， SOD、 MDA、 乳酸、钾、钙、镁离子、血凝状态及血液流变性等。3方法学评价以上各项试验方法中，以阻断动物的冠状动脉所致之局限性心肌缺血是目前国内外应用最广泛的方法，通过狭窄或完全闭塞冠状动脉，使其供应区的血流减少或缺无，造成心肌缺血，心肌因缺血、缺氧而发生代谢紊乱，以致发生凝固性坏死，其发病过程和机制与临床相似，与中医理论 “瘀血证 ”有一定联系，较为合理、实用。可根据所试药物功能、主治和作用特点选用上述形态、电生理、生化、放免、核示踪、荧光等观测指标与方法，可以定位、定性、定
7、量的观测缺血心肌的动态变化及药物影响，较为准确的评价药效。应作为新药主要药效学的首选试验。(二 )对心脏血流动力学及心肌耗氧量影响试验1实验动物与观测指标(1)犬心功能及血流动力学实验：观察指标应包括心电图、心率。动脉血压、冠脉流量，冠脉阻力、心输出量、心肌收缩力、左室做功、左室内压、左室内压最大上升速率、心搏出量、心脏指数、心搏指数、总外周阻力等，并可同时测定心肌耗氧量、氧利用率、耗氧指数等。(2)猫、鼠等其他动物心功能及血流动力学试验：观察指标应包括心电图、心率，动脉血压、心输出量、左室内压、左室内压最大上升速率、中心静脉压、左室别血的张力指数、左室作功指数、心脏指数、左室舒张未期压等。(
8、3)无创性心功能检查：如超声心动图、阻抗图、 Y 照相等。2方法学评价心脏血流动力学、心肌耗氧量等应作为评阶药物作用及作用机制的重要指标，对于了解药物对心肌功能、血管顺应性、心肌供血及心肌氧代谢的影响，结合对心肌缺血、心肌梗死等指标的影响，作综合性评价有重要意义。(三 )其他试验1血小板聚集性试验 血小板聚集性增强是造成血液循环障碍导致心肌缺血发生的重要原因之一。药物对动物血小板聚集性的影响可作为药效学研究的辅助指标。实验动物用兔或大鼠。以三磷酸腺秆、花生四烯酸 (AA)、 胶原、凝血酶等作为绣导剂，应用比浊法或其他方法测定。2血栓形成及溶栓试验 冠状动脉血栓形成是直接导致心肌缺血因素之一。对
9、血栓形成的影响和溶栓作用应为评价治疗心肌缺血药物药效的辅助指标。常用免或大鼠以 Chmldlcr血栓形成法，测定心栓的重量及长度；应用大鼠以动 静脉旁路法测定血栓湿重；电刺激人鼠颈总动脉形成动脉血栓，用以观察药物对体内血栓形成时间的影响 ;电刺激犬或猪的冠状动脉形成冠状动脉血栓，以心肌缺血程度范围、心肌梗死、心肌酶及冠脉血栓占管腔的百分比等多项指标综合观察药物对心肌缺血的防治作用和溶栓作用。3血液流变学试验 心肌缺血发生前后，常伴有血液流变学改变。因此，测定血液黏度、血浆纤维蛋白原含量、血细胞比容、红细胞沉降、血小板黏附和聚集等血液流变学指标，对评价药物的作用有重要意义。4氧代谢试验 增加心肌的供氧和提高心肌的耐缺氧能力，改善心肌能量代谢是药物治疗缺血心脏病的重要作用。方法除前面介绍的心肌耗氧量测定外，可同时选用小鼠常压、低压耐缺氧等实验和指标。(四 )阳性对照药阳性对照药既可选择西药，也可选中药。西药作用明确，疗效肯定，尤其是一些经典药品，可检验实验方法可靠性。西药剂量与中药量相差较大，作用特点亦不大相同，不做药效强度比较。采用中药阳性药时，一股应选疗效肯定的功能主治相似的中成药对照，对照药应是药典记载或经卫生部批准生产的；对照药剂应与受试药等效或相当，以便进行比较，同一受试药的不同药效学实验选用不同的阳性对照药。
