1、关于梅毒的一些研究现状,一 梅毒及梅毒螺旋体的概述二 梅毒螺旋体检测技术三 梅毒细胞免疫研究进展,一 1 梅毒的流行病史,梅毒(syphilis)是苍白螺旋体（Treponema pallidum,Tp）所引起的一种慢性传染病。 主要通过性接触和血液传播，可侵犯全身各器官，并产生多种多样的症状和体征。,梅毒属于性传播疾病（STD），目前认为,梅毒的危害性在STD中仅次于艾滋病，有关研究表明，患者感染梅毒的同时增加了对HIV病毒的易感性。在青霉素有效地应用于临床之前，梅毒曾是引起人类致畸致残的重要疾病之一。据世界卫生组织估计，全世界每年新发成人梅毒约为1200万例，主要在发展中国家,梅毒在全球已
2、有五百多年的流行历史。1493年哥伦布第一次探险时将梅毒带到欧洲大陆。梅毒于16世纪初传入我国，是建国初期最主要的性传播疾病，经艰苦的综合防治，1964年基本消灭了梅毒。自20世纪80年代梅毒在我国再度流行以来，其发病率以惊人的速度增长。据2005年9月12日发布的重点疫情报告，梅毒位于甲、乙类传染病报告发病数的前五位,2 梅毒的生物学特征,梅毒的病原体为苍白密螺旋体(Treponema pallidum，Tp)苍白亚种，又称梅毒螺旋体。梅毒螺旋体的形态呈柔软纤细的螺旋状，体长620pm，宽010.25pm，螺旋有8一20个，运动特征为弯曲移动、绕轴转动和前后伸缩运动。,梅毒螺旋体属于厌氧菌，
3、在体外不易生存，煮沸、干燥、常用的消毒剂均可致其死亡，但对潮湿、寒冷的环境具有较强耐受力,电镜下梅毒螺旋体的最外层为外膜，外膜内是胞浆膜，两者之间是鞭毛,3 梅毒的临床表现,根据传染途径分为胎传梅毒(先天性)与后天梅毒(获得性) 。先天性梅毒(又称胎传梅毒)是梅毒螺旋体通过胎盘传染胎儿，早期可致胎儿流产、早产晚期感染的成活胎儿可能患先天梅毒.获得性梅毒主要经性接触传播，接吻、手术、哺乳、输血、接触污染物也可被传染。,一、早期梅毒：病期2年以内： 1、一期梅毒：即硬下疳，在未经治疗的情况下，硬下疳多数在36周左右自行消退。2、二期梅毒：未得到治疗的患者，一般于感染后6周至6个月可发生二期梅毒。二
4、期梅毒表现为全身性皮疹。其特点是客观所见明显，可有低烧、 头痛、咽痛、关节钝痛等类似感冒症状。此时传染性很强，亦可自然好转为潜伏梅毒。,3、早期潜伏梅毒：凡有梅毒感染史且病期2年以内，无临床症状或者症状已经消失，物理检查缺乏梅毒的表现，脑脊液检查阴性，而仅有梅毒血清反应阳性者。 二、晚期梅毒（三期）：病期2年以上晚期则几乎可侵犯全身所有的组织和器官，导致眼、耳、神经、心脏和骨等多系统的病理改变并出现不可逆性的损害，其中尤以中枢神经系统以及心脏的损害为多见,二 梅毒螺旋体的检测,病原体的检测暗视野显微镜检 一期梅毒苍白螺旋体多在硬下疳的硬结、溃疡的分泌物和渗出液中存在，肿大的淋巴结穿刺也可检出。
5、 二期梅毒苍白螺旋体可在全身血液和组织中检出，但以皮肤检出率最高。2 直接荧光抗体法检测梅毒螺旋体 通过异硫氰酸荧光素( FITC) 标记的抗TP 抗体来鉴定TP。这种抗体不能区分病原性TP 和其它致病螺旋体。灵敏性稍高于暗视野检查。,3 聚合酶链式反应( PCR)最先进的检验技术之一，直接检测TP的DNA物质，敏感特异。但在普通实验室操作中容易造成PCR污染，且仅用于检测病原，故并不能取代梅毒血清学检测方法。报道指出其未显示敏感性等方面优势 检测的样本范围也很广全面PCR 明显优于血清PCR,梅毒血清学检测。梅毒感染人体后，会产生两类抗体。是抗梅毒螺旋体抗体，又称特异性抗体；是能与广泛分布于
6、生物组织中的类脂抗原发生非特异性反应的抗体，主要是由螺旋体破坏的组织细胞所释放的类脂样物质以及螺旋体自身的类脂和脂蛋白刺激机体产生的IgM、IgG类抗体，称为反应素。因此，血清学抗体的检测有特异性和非特异性两类。,（1）非梅毒螺旋体血清试验 非密螺旋体抗原试验因其抗原成分并非只存在于梅毒患者体内，故其特异性较差，易出现假阳性。 但其灵敏度较高，操作简单，价格低廉，易于临床大规模开展，故常应用于梅毒的筛查试验，尤其是RPR试验和TRUST试验。,性病研究实验室玻片试验（VDRL）（常用）；从牛心肌中提取的心磷脂, 适量加入胆固醇及卵磷脂以提高敏感性, 通常称这种抗原为心肌脂抗原。VDRL 试验属
7、于微量玻片絮状沉淀法。定量及定性试验, 操作简单, 试剂及对照血清已标准化, 费用低。缺点是对一期梅毒敏感性不高,血清不加热的反应素玻片试验（USR） 改良的VDRL,即将VDRL抗原用稀释液稀释后离心沉淀，于沉淀中加入EDTA（使抗原在半年内不变性）,氯化胆碱（灭火补体）和防腐剂，敏感性及特异性与VDRL相似。,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）（常用）VDRL 试验的改良, 灵敏度较VDRL 高, 特别是在早期梅毒。（黑色凝集颗粒）甲苯胺红不加热血清反应素试验( TRUST)可用作临床筛选，并可作定量，用于疗效观察。,（2）梅毒螺旋体血清试验用活的或死的TP 或其成分来作抗原测定抗螺旋体
8、抗体。这种试验敏感性和特异性均高, 一般用作确认试验由于检测的是抗TP- IgG 抗体, 所以即使患者经足够的治疗, 血清反应仍持续存在阳性（血清固定）, 因此, 不能用于观察疗效。近年发展的检测抗TP- IgM 抗体, 却能早期诊断及判断疗效。,荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）； 是以密螺旋体无毒株(Reiter 株) 抗原吸收待检血清,排除了同属抗原的交叉结合, 保证了试验结果的特异性;以整条TP 检测血清中抗体, 确保各种抗原分子的完整存在, 提高了试验的敏感性梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）； 以细胞作载体，吸附从兔睾丸中提取的粗制梅毒螺旋体粉碎物为抗原，检测血清中特异抗体。将阳
9、性标本与致敏红细胞混合，经过抗原抗体结合，引起致敏红细胞凝集，形成凝集块。,梅毒螺旋体明胶颗粒凝集实验（TPPA）将特异性Tp抗原包被在明胶颗粒上梅毒螺旋体酶连免疫吸附实验（TP-ELISA） 将重组表达的梅毒膜特异性抗原包被在微孔膜板上，用双抗原夹心法测定梅毒特异性抗体 梅毒螺旋体免疫印迹实验,19S- IgM 荧光螺旋体抗体吸收试验是近年来才有的新的诊断梅毒的方法。特异性IgM抗体的产生是感染梅毒和其他细菌或病毒后机体首先出现的体液免疫应答，一般在感染的早期呈阳性，随着疾病发展增加，IgG抗体随后才慢慢上升。,IgM的检测对诊断新生儿的先天梅毒意义很大，因为抗体分子较大，其母体IgM抗体不
10、能通过胎盘，如果TP一IgM阳性则表示婴儿已被感染,1 梅毒的窗口期,梅毒从感染到体内能够检测到RPR或者是TPPA抗体,这是需要一定时间的,这个时间就是窗口期.检测抗体的窗口期一般认为是2到6周,2 梅毒的血清固定(sero-resistant）,梅毒患者经正规驱梅治疗后，临床症状消失，早期梅毒(感染后2年以内)，按规定时间(6个月)随访如血清仍不转阴，晚期梅毒(感染后2年以上)，按规定时间(12个月)随访如血清仍不转阴者称为血清固定其中一期梅毒血清固定发生率为3.8%，二期梅毒为17.5%，潜伏梅毒为40.5%。给以患者带来很多困扰。,可能原因早期治疗不规范梅毒的病期，类型不同（早治疗）合
11、并有其他疾病而致生物学假阳性复发、再感染或神经系统受累机体内的细胞免疫异常,三 梅毒细胞免疫研究进展,研究的三大方面（1）基础研究领域主要包括从分子水平寻找TP的致病抗原成分和基因（2）从细胞和分子水平探讨TP感染患者的免疫状况（3）寻找更新的特异性强和敏感性高的实验室检测方法,由于在活体外通过人工细胞来培养及繁殖TP的实验迄今一直尚未真正成功，所以对其各方面的研究均受到限制机体对TP的免疫学作用如何影响梅毒的发病至今也还没有完全阐明,梅毒免疫在发病机制中的作用,（1）在梅毒感染过程中免疫作用感染梅毒后可以激活人体内天然免疫的一种重要模式识别受体Toll样受体(Toll一likeReeepto
12、rsTLRs（2）梅毒发展中的免疫损伤， 血管炎和炎症细胞浸润（局部炎症）,梅毒中免疫细胞及其亚群的变化,体液免疫的免疫细胞 B细胞单核一巨噬细胞（明显表达CD14）T淋巴细胞NK细胞树突状细胞(DCS),Th细胞根据分泌细胞因子的不同分为Th1、Th2细胞，通常Th1和Th2型免疫应答是相互拮抗的.梅毒患者Th的变化所形成的Thl/Th2平衡失调与梅毒活动及潜伏期的变化有关,一期梅毒早期以TH1型细胞免疫为优势，随病程发展逐渐发生TH1/TH2飘移，至二期梅毒时转为TH2型为主Th1的早期活化和持续存在对病原体的清除非常重要，而Th2则能封闭和阻断细胞免疫的靶抗原，抑制特异性细胞免疫产生，从
13、而影响病原体的清除,各种细胞因子在梅毒免疫中的作用,（1）白介素一2(xnterleukin一2，IL一2)与梅毒细胞免疫是分子量约为15kDa的糖蛋白，主要由活化的Th1细胞产生，具有刺激T细胞增生、增强单核一巨噬细胞活性等作用，可抗感染、抗肿瘤等早期梅毒患者的外周单核细胞（PBMC）产生IL一2达到最大量，此后PBMC产生IL一2则明显下降,（2）白介素一4(Interleukin一4，IL一4)与梅毒细胞免疫Th2型细胞因子IL一4表达与患者血清RPR试验转阴时一间呈负相关二期梅毒患者的IL一4水平显著高于一期，IFN一Y显著低于一期,（3）白介素一6(Interleukin一6，IL一
14、6)与梅毒细胞免疫TP可诱导活化的单核一巨噬细胞产生IL一6进而刺激B细胞生长、分化和Ig分泌增加IL一2产生，协同IL一2增强CTL中穿孔素基因的表达,其它细胞因子IL-8IL-10IL-12IL-13干扰素Y(interferon一Y，IFN一种）肿瘤坏死因子a(tumourneerosisfactor，TNF一a),梅毒螺旋体抗原在梅毒免疫中的作用,(一)梅毒螺旋体抗原的概况梅毒螺旋体的全部基因组DNA序列已经被解析通过重组梅毒螺旋体DNA的克隆以及在大肠杆菌中的表达，制备出多种重组TP抗原有研究指出至少由九种梅毒螺旋体蛋白可以作为主要的免疫原性蛋白TP 15， TP 17， TP 47
15、为主要梅毒螺旋体的鉴别抗原,TPN15在TP膜蛋白中的含量相对较少，但在免疫印迹试验中与人梅毒血清间显示了超强的反应性，同时对实验梅毒兔的淋巴细胞有很强的增生反应，表明15kD蛋白不仅具有较强的体液免疫原性，而且有较强的细胞免疫原性,主要应用的实验技术,（1）Immun- soft bold技术是纯化抗原蛋白或DNA直接结合在固相载体(如硝酸纤维膜)上制备诊断条，可用于进一步的分子杂交或抗体检测（2）酶联免疫斑点检测技术当今世界上检测生物体细胞免疫水平的最佳技术之一，是一种从单细胞水平检测分泌抗体的细胞或分泌细胞因子的细胞,任重道远,对于梅毒的致病因素、病理生理 变化，特别是免疫系统在梅毒的致病与预后的具体作用上我们认识的还欠缺。 梅毒的细胞免疫研究对探讨梅毒发病机理，制备疫苗以及血清学诊断试验的优化是非常必要的。,制作人：郭晓静,谢谢观看！,
