1、实验十一APTT、PT、FDP、D-二聚体测定,APTT,Ca2+脑磷脂,鞣花酸,Ca2+脑磷脂,部分凝血活酶,PT,组织因子,Ca2+ 磷脂,凝血酶,TT,二、材料 1、半自动血凝仪、水浴箱、塑料试管、 秒表 2、 APTT: 4%鞣花酸-脑磷脂悬液 0.025mol/L氯化钙溶液 PT :0.025mol/L氯化钙凝血活酶溶液 3、正常对照血浆、受检血浆,三、操作 (一)APTT手工法(平皿法) 血浆0.05mlAPTT试剂0.05ml +CaCl20.05ml (混匀计时) 结果观察:混匀后,不断挑动液体,发现细丝,停止计时 参考值 2545s,37温浴,APTT,延长,缩短,因子VII
2、I、IX、XI活性减低,高凝状态,临床意义,肝素抗凝监测,(二)PT(半自动血凝仪法) 血浆0.05ml PT试剂0.1ml (37) 参考值 1014s,37预温,3min,PT,延长,缩短,因子II、V、VII、X、Fg活性减低,高凝状态,临床意义,口服双香豆素类抗凝药物监测,五、注意事项 1、标本的采集和处理,标本放置不应超过2h 2、收到后注意观察标本,分离血浆注意离心 速度和时间 3、操作要准确 4、使用试剂前应仔细阅读说明书,37试剂位,室温试剂孔,37加样器孔,37带搅拌试剂孔,室温加样器孔,联动加样枪,D-二聚体检测,一、原理(胶乳凝集法) 被检测血浆中加入标记D二聚体单抗的胶
3、乳颗粒悬液,如果血浆中D二聚体含量大于0.5mg/L,与胶乳颗粒上的抗体结合,胶乳颗粒则发生凝集。二、材料绿色胶乳、样本稀释液、阴阳性对照、反应板、待测血浆,病例:男性患者,26岁,因拔牙后出血不易止血七天 入院,患者于一周前在口腔医院行拔牙手术,术后出血较多,棉球压迫止血,稍有减轻,但创口一直渗血, PLT,BT,PT,APTT等检查均正常.患者平时无龈出血,鼻 出血,喀血,便血,血尿等,儿童时期曾有一次拔牙后不易止血和右踝关节扭伤后出现血肿病历,曾被怀疑为“轻型血友病”.因而被限制剧烈运动,避免外伤,手术.患者父亲曾有拔牙后十天多才止血。其体格检查正常,实验室其他检查如因子活性等正常,其中
4、FDP 6.4g/L(3.0g/L0.82g/L),D-二聚体阴性。,(一) APTT:手工法(平皿法) 血浆0.05mlAPTT试剂0.05ml +CaCl20.05ml (混匀计时) 结果观察:混匀后,不断挑动液体,发现细丝, 停止计时(二) PT:半自动血凝仪法 血浆0.05ml PT试剂0.1ml (37),37水浴,5min,37温浴,37水浴,3min,四、注意事项1.标本室温稳定4h,-20 可长期保存,37 快速复融。2、加样量要精确,标本与胶乳等量。3、胶乳试剂应放在4 保存,勿冰冻,临用前恢复室温。4、混匀胶乳试剂时,应旋转轻轻混匀,切勿剧烈振荡。5、若标本已出现凝块,不能用于测定,否则出现假阳性反应。,三、操作1、将试剂从4 冰箱取出后恢复室温。2、混匀胶乳,精确吸取20L标本于反应板上3、精确吸取20L胶乳于反应板混匀,然后轻轻转动玻片,30秒至3分钟内观察结果有明显凝集者为阳性(同时做阴阳性对照)。,五、临床意义1、深静脉血栓形成、心肌梗死、DIC等,其含量增高。2、鉴别原发性纤溶症和继发性纤溶症。 FDP检测方法同D二聚体检测临床意义:升高:主要见于原发性纤溶亢进、高凝状态(手术后并发症、深静脉血栓、DIC等),