1、毕业论文 文客久久 本科 毕业论文 (设计 ) 题 目： 阿司匹林壳聚糖缓释微球的制备 学 院： 学生姓名： 专 业： 药学 班 级： 指导教师： 起 止 日期： 毕业论文 1 目录 目 录 . 1 前言 . 7 1 材料和仪器 . 7 1.1 主要药品与试剂 . 7 1.2 主要仪器 . 8 3 结果与讨论 . 11 3.1 阿司匹林的标准曲线及回归方程 . 11 3.2 阿司匹林的精密度的测定 . 11 3.3 阿司匹林的稳定性实验 . 12 3.4 阿司匹林壳聚糖微球处方和制备工艺的研究 . 12 参考文献 . 16 毕业论文 2 阿司匹林壳聚糖缓释微球的制备 摘要 目的：研究利用壳聚糖
2、制备 阿司匹林 微球 的制备工艺， 来 降低不良反应。方法：以释放度 为优化指标，通过 预试验与 正交试验对阿司匹林 壳聚糖缓释微球 进行处方优化，并根据药典规定 来 测定其体外释放度。结果：制备阿司匹林 壳聚糖缓释微球的 最佳处方 是 ：壳聚糖浓度 为 2.0 %， 搅拌速度为 500r/min， 壳聚糖与阿司匹林质量比为 2.0 %， 交联时间为 1.5h。在此条件下制备的 缓释微球 ，其体外释放度基本符合药典规定。结论： 用 壳聚糖制备的阿司匹林 微球 具有 缓释性能 ，其体外 释放度基本 符合药典相关规定。 关键词 壳聚糖；阿司匹林；缓释微球；体外释放度 毕业论文 3 The prep
3、aration of aspirin sustained release chitosan microspheres Abstract Objective Study on the preparation technology of aspirin susteined -release chitosan microspheres to reduce its untoward effect. Methods ： Designing pre-test and orthogonal test by using the release rate as indexes to optimize presc
4、ription of aspirin sustained release chitosan microcapsules and measure the in vitro release drug according to the pharmacopoeia. Results ： According to the orthogonal test, the optimal prescription to prepare aspirin sustained release chitosan microcapsules is as follows: the concentration of chito
5、san is 2.0% , stirring speed is hight speed , chitosan and aspirin quality is 2： 1 ,crosslinking time is 1.5h . Sustained release microsphers prepared under this condition, in vitro release degrees is basically in line with pharmacopoeia requirements. Conclusion ： Aspirin susteined-release microsphe
6、res prepared with chitosan, possesses sunsteined-release function and in vitro release degrees is basically in line with related provisions of pharmacopoeia. Key words Chitosan;Aspirin; Suntained-release; In vitro release degrees 毕业论文 4 前言 阿司匹林 , 又称乙酰水杨酸 ( acetylsalicylic acid)，系统命名为 2-乙酰氧基苯甲酸（ 2- a
7、cetoxybenzoic acid）。分子式： C9H8O4,相对分子质量： 180.16，熔点： 135 136 ，密度： 1.40g/cm3。 阿司匹林属于非甾体类抗炎药，具有较好的解热、镇痛、抗炎、抗风湿、抗血小板聚集等作用，可用于治疗痛风流行性出血热、弥漫性血管内凝血、溶血性尿毒综合征、糖尿 病及糖尿病性周围神经病变、先兆流产、类脂质渐进性坏死、代谢性肥胖、巴特综合征、腹泻、春季结膜炎、胆道蛔虫病、急性肺炎、足癣、血小板减少性紫斑、镰状细胞性贫血、不孕症等。也可以用于防治老年性糖尿病性白内障、风湿病的鉴别诊断、口腔的局部止痛 , 预防妊娠高血压和先兆子 痫 等。 微球系指药物与高分子
8、材料制成的球形或类球形 骨架 实体，药物溶解或分散于实体中，通常微球的粒径范围为 1 250 m 1。药物制成微球的主要目的是缓释长效和靶向作用。 壳聚糖（聚 -2-氨基 -2-脱氧 -D- -1， 4 葡萄糖）是甲壳素经过脱乙 酰基后得到的一种天然的可降解碱性氨基多糖， 具有 易化学修饰性、生物相容性和可再生性无毒等优越的功能性质和独特分子结构 2-3。制备微球的载体多数是生物降解材料，壳聚糖是一种极有发展潜力的新型药物制剂辅料，在酸性介质中膨胀形成胶体黏稠物质而阻滞药物扩散及溶出，其被 广泛应用于制备缓释片、缓释微球、缓释微囊等 4-5。 将壳聚糖与另外一种成膜材料作为辅料复合包裹阿司匹林
9、成微球也是研究热点之一。壳聚糖 -阿拉伯胶、壳聚糖 -海藻酸钠等都证明壳聚糖可作为囊材包覆阿司匹林，壳聚糖 -聚丙烯酸共聚物包覆的阿司匹林，包封率甚至 达到 94%6。 口服药物缓释以及控释药物制剂是国内外医药产品发展的重要方向。缓释制剂系指口服药物在规定的溶剂中按要求缓慢地非恒速释放，且每日用药次数与相应的普通制剂比至少减少一次或用药的间隔时间有所延长的制剂。控释制剂系指口服药物在规定的溶剂中按要求缓慢地恒速或接近恒速释放，且每日用药次数与相应的普通制剂比至少减少一次或用药的间隔时间有所延长的制剂。阿司匹林制成缓释微球后 ,药物缓慢释出，在很大程度上可缓解其对胃肠道黏膜的刺激。可以延长药物作
10、用时间、减少用药的次数、血药浓度保持平衡、降低毒副作用，减小不良 反应 7-9。阿司匹林的半衰期只有 15 min，缓释制剂可以延长半衰期，方便患者长期服药，减少用药总剂量。 本实验用单因素试验和正交试验初步确定了阿司匹林微球的最佳制备工艺，并且通过正交实验测得了制备阿司匹林微球的最佳处方。 1 材料和仪器 1.1 主要药品与试剂 试剂 （规格） 厂家 甲醛溶液（分析纯 AR） 衢州巨化 试剂有限公司 阿司匹林（分析纯 AR） 宁波 化学试剂有限公司 阿司匹林标准品 D86199， Augsburg Germany 毕业论文 5 壳聚糖（化学纯 CP） 国药集团化学试剂有限公司 冰乙酸（分析纯
11、 AR） 国药集团化学试剂有限公司 液体石蜡（化学纯 CP） 国药集团化学试剂有限公司 无水乙醇（分析纯 AR） 国药集团化学试剂有限公司 石油醚（分析纯 AR） 国药集团化学试剂有限公司 磷酸盐缓冲液 PH6.8 爱建德固赛（上海）引发剂有限公司 1.2 主 要仪器 仪器名称 型号 厂家 光学显微镜 CX31 型 日本奥林帕斯公司 显微摄像 pro-microscan5898 美国 离心机 800B 型 上海安亭科学仪器厂 电子天平 FA(N)/JA(N)型 上海民侨精密科学仪器有限公司 片剂四用测定仪 78X-2B 型 上海黄海药检仪器有限公司 恒温磁力搅拌器 85-2 型 常州国华电器有
12、限公司 紫外可见分光光度计 752N 型 上海精密科学仪器有限公司 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9023A 型 上海一恒科学仪器有限公司 超声波清洗器 SK5200H 上海科导超声仪器有限公司 2 实验方法 2.1 阿司匹林标准曲线的绘制 10 用电子天平精密称取 50.00mg 阿司匹林 标准品 溶于 pH6.8 磷酸盐缓冲液中，并且定容至 25mL，得到溶液 (1)。分别取 0.5、 1.0、 1.5、 2.0、 2.5、 3.0、 3.5 的溶液 (1) 以 pH6.8磷酸盐缓冲液定容至 25mL， 摇匀后静置 5min， 以 pH6.8 磷酸盐缓冲液为空白液，在 265nm波长处测定各
13、浓度阿司匹林溶液的吸光度 A。 2.2 阿司匹林原料药精密度的测定 精 密称取阿司匹林 50.00mg，用少量无水乙醇溶解后，加入 pH6.8 磷酸盐缓冲液定容至100mL 容量瓶中，摇匀得到 0.5mg/mL 阿司匹林标准液。用移液管精密移取此液 3mL 至 25mL容量瓶中，再次加入 pH6.8 磷酸盐缓冲液定容至刻度，取适量样液，以 pH6.8 磷酸盐缓冲液为空白对照，重复 9 次，在 265nm 波长处测定其吸光度 A。然后计算阿司匹林的百分含量，再计算各组数据的相对标准偏差，来评价此含量测定方法的精密度。 2.3 阿司匹林原料药的稳定性实验 用电子天平称取阿司匹林 25.00mg，用
14、少量无水乙醇溶解后，加入 pH6.8 磷酸盐缓冲液定容于 50mL容量瓶中，摇匀后用移液管精密移取此液 5mL至 25mL容量瓶中，再次加入 pH6.8的磷酸盐缓冲液定容至刻度，分别在 5min、 15min、 25min、 35min、 45 min、 55min 测定吸毕业论文 6 光度 A。然后计算阿司匹林的百分含量，再计算各组数据的相对标准偏差，来评价此含量测定方法的稳定性。 2.4 阿司匹林壳聚糖微球的制备 11-14 用电子天平精密称取壳聚糖溶于 2%乙酸溶液中等到溶液 A。再 取一定量的阿司匹林，置于研钵中研磨，直至在显微镜下观察无大的晶体。然后将其加入到 A 中的得到溶液 B。
15、将30ml 液体石蜡和 0.6g Span80 混合均匀后得到油状液体 C。将溶液 B 通过医用注射器控制按照油：水为 2： 1 缓慢滴入搅拌的混合液体 C 中，至显微镜观察已凝聚成球为度。乳化后通过医用注射器控制滴入交联剂甲醛 1.8ml 进行交联反应， 2000rpm 离心沉淀，弃上清液，沉淀后用石油醚洗 3 次，无水乙醇脱水，抽滤，在电热恒温鼓风干燥箱中干燥，即得阿司匹林壳聚糖微球。 2.5 阿司匹林壳聚糖微球的处方和制备工艺的探索 20 用单因素法分别分析 壳聚糖浓度、搅拌速度、壳聚糖与阿司匹林质量比和交联时间 对阿司 匹林壳聚糖微球的外形、粒径和粘连程度的影响，并初步确定阿司匹林壳聚
16、糖微球的制备工艺条件。再测定不同浓度下各组微球的载药量和释放度，最终确定乳化交联法制备阿司匹林壳聚糖微球的处方和最佳制备工艺条件。 2.5.1 壳聚糖浓度 对微球的影响 实验条件为：壳聚糖浓度为 2.0%， 2.5%和 3.0%，醋酸 2.0%，壳聚糖与阿司匹林质量比为 4： 1，油相 30mL 液体石蜡和 0.6g Span80，油相：水相为 2： 1，搅拌速度为 300 r/min，交联剂甲醛为 1.8mL，乳化后 50交联时间为 1h， 2000rpm 离心沉淀，弃上清液 ，沉淀后用石油醚洗 3 次，无水乙醇脱水，抽滤，在电热恒温鼓风干燥箱中干燥，即得阿司匹林壳聚糖微球。 2.5.2 搅
17、拌速度 对微球的影响 实验条件为： 搅拌速度分别为 100 r/min、 300 r/min、 500 r/min， 壳聚糖浓度为 2.0%，醋酸 2.0%，壳聚糖与阿司匹林质量比为 4： 1，油相 30mL 液体石蜡和 0.6g Span80，油相：水相为 2： 1，交联剂甲醛为 1.8mL，乳化后 50交联时间为 1h， 2000rpm 离心沉淀，弃上清液，沉淀后用石油醚洗 3 次，无水乙醇脱水，抽滤，在电热恒温鼓风干燥箱中干燥，即得阿 司匹林壳聚糖微球。 2.5.3 壳聚糖与阿司匹林质量比 对微球的影响 实验条件为：壳聚糖与阿司匹林质量比 分别为 6： 1， 4： 1，和 2： 1。 壳
18、聚糖浓度为 2.0%，醋酸 2.0%，搅拌速度为 300 r/min，油相 30mL 液体石蜡和 0.6g Span80，油相：水相为 2：1，交联剂甲醛为 1.8mL，乳化后 50交联时间为 1h， 2000rpm 离心沉淀，弃上清液，沉淀后用石油醚洗 3 次，无水乙醇脱水，抽滤，在电热恒温鼓风干燥箱中干燥，即得阿司匹林壳聚糖微球。 2.5.4 交联时间 对微球的影响 毕业论文 7 实验条件为： 乳化后 50交联时间为 1.0,h， 1.5h 和 2.0h。 壳聚糖与阿司匹林质量比分别为 4： 1。 壳聚糖浓度为 2.0%，醋酸 2.0%，搅拌速度为 300r/min，油相 30mL 液体石
19、蜡和 0.6g Span80，油相：水相为 2： 1，交联剂甲醛为 1.8mL， 2000rpm 离心沉淀，弃上清液，沉淀后用石油醚洗 3 次，无水乙醇脱水，抽滤，在电热恒温鼓风干燥箱中干燥，即得阿司匹林壳聚糖微球。 2.5.5 阿司匹林壳聚糖微球的外形考察 成球反应开始 20min 后，吸取少量的混悬液，均匀地涂抹于载玻片上，并用光学显微镜观察，了解成球反应时的成球情况。 当固 化反应结束后，吸取少量阿司匹林壳聚糖微球混悬液，均匀地涂抹于载玻片上，在光学显微镜下观察放大了 100 倍数的微球外形。 2.5.6 正交试验 根据前期的探索性实验，确定 壳聚糖浓度、搅拌速度、壳聚糖与阿司匹林质量比
20、、交联时间为影响因素，每个因素选取 3 个水平，以微球的药物释放度为优化指标，用正交表L9(34)安排实验 15-16，见表 1。 表 1 正交设计的因素水平表 水平 A B C D 壳聚糖浓度 搅拌速度 壳聚糖与阿司匹林质量比 交联时间（ h） 1 2.0% 100r/min 6： 1 1.0 2 2.5% 300 r/min 4： 1 1.5 3 3.0% 500 r/min 2： 1 2.0 2.5.7 阿司匹林壳聚糖微球的释放度测定 2.5.7.1 阿司匹林含量的测定及载药量的计算 用电子天平分别精密称取 各条件下制得的阿司匹林壳聚糖微球细 粉 50mg， 分别 放入50mL 的锥形瓶
21、 中， 然后 加 入 无水乙醇 5mL，接着 超声提取 30min， 将所得混悬液抽滤， 而后加入适量 pH6.8 磷酸盐缓冲液滤洗三次， 再 抽干，将滤液转移 到 50mL 容量瓶 中 ， 再 用 PH6.8磷酸盐缓冲液定容， 摇均，得阿司匹林母液， 备用。 用移液管分别精密移取 2.5mL 上 述样品液 到 50mL 的 容量瓶中，定容 ，摇匀。 以 pH6.8磷酸盐缓冲液为空白液，用紫外分光光度法 ，在 265nm 处测定稀释样品液的吸光度， 然后 根据标准曲线 来 计算 各个 稀释样品液的 阿司匹林 浓度， 最后 计算出 阿司匹林 样品液 中阿司匹林的 含量及 其载药量 。 载药量按下
22、式计算 。 载药量（ %） =（微球中含药量 /微球的总重量） 100% =样品中阿司匹林浓度（ mg/ml） 1000ml /原始药量（ mg） 100% 2.5.7.2 阿司匹林释放度的测量 用电子天平精密称取 50.00mg 阿司匹林壳聚糖微球置于转篮中，以 pH6.8 磷酸盐缓冲液 500ml 为溶质，水温为 37 5，转速为 100r/min。每隔 2h 吸取 10mL 溶出 液，立即用毕业论文 8 过滤纸过滤，取滤液进行含量测定，并及时补充等量的溶质，在 265nm 处测定紫外吸光度。根据阿司匹林标准曲线，计算样品的浓度，再计算依照下列公式计算累计释放量： 累计释放量（ %） =（
23、某时刻阿司匹林累计释放量 /（载药量总投量） 100% =（释放各时刻溶液中阿司匹林浓度溶出介质体积） /（载药量载药干球重量） 17 3 结果与讨论 3.1 阿司匹林的标准曲线及回归方程 按照 2.1 所述的方法测得各浓度阿司匹林标准液的吸光度（ A）值，并绘制阿司匹林的标准曲线。阿司匹林标准液吸光度的测量结果见表 2，阿 司匹林的标准曲线见图 1。 得到阿司匹林标准溶液浓度 C(mg/mL)与吸光度 A的回归方程为 : A = 3.1554C + 0.0033(R=0.9998,)。 表 2 阿司匹林标准溶液的配制及吸光度的测定 组号 1 2 3 4 5 6 7 阿司匹林标准溶液 (mL)
24、 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 磷酸盐缓冲液 (mL) 24.5 24.0 23.5 23.0 22.5 22.0 21.5 阿司匹林标准液浓度 C 0.04 0.08 0.12 0.16 0.20 0.24 0.28 (mg/mL) 吸光度值（ A） 0.131 0.255 0.379 0.514 0.631 0.756 0.891 阿司匹林标准曲线y = 3.1554x + 0.0033R2= 0.99980.0000.2000.4000.6000.8001.0000.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30浓度（m g / m l ）吸光
25、度（A）吸光度（A ）线性 ( 吸光度（A ）)图 1 阿司匹林标准曲线 3.2 阿司匹林的精密度的测定 按照 2.2 所述方法测得 各浓度阿司匹林标准液的吸光度（ A）值，代入阿司匹林标准曲线回归方程，得浓度 C，求得平均百分含量为 99.02%， RSD 值为 0.35%。结果见表 3。 表 3 阿司匹林 精密度实验 组号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 毕业论文 9 吸光度值 A 0.190 0.190 0.190 0.191 0.191 0.191 0.191 0.191 0.192 浓度 C(g/mL) 98.61 98.61 98.61 99.14 99.14 99.14 99
26、.14 99.14 99.67 阿司匹林含量 (%) 59.17 59.17 59.17 59.17 59.49 59.49 59.49 59.49 59.80 3.3 阿司匹林的稳定性实验 按照 2.3 所述方法测得 各浓度阿司匹林标准液的吸光度（ A）值，代入阿司匹林标准曲线，代入回归方程得浓度 C，求得平均含量为 99.21%， RSD 值为 0.17%，说明 IDM 原料药具良好稳定性。见表 4。 表 4 阿司匹 林原料药稳定性实验 时间 5min 15min 25min 35min 45min 55min 吸光度值 A 0.316 0.316 0.316 0.317 0.316 0.
27、317 浓度 C( g/mL) 99.10 99.10 99.10 99.42 99.10 99.42 吲哚美辛含量 (%) 99.10 99.10 99.10 99.42 99.10 99.42 3.4 阿司匹林壳聚糖微球处方和制备工艺的研究 乳化交联法 18-19是将药物溶解或分散于壳聚糖醋酸溶液中 ， 加入含表面活性剂 (如司盘类 ) 的油相中 ,搅拌或超声处理 ,形成 (W/ O型 ) 乳剂 ,用戊二醛、甲醛 等化学交联 , 形成的微球经过滤 ,并用适当的溶剂洗涤 ， 干燥 ,离心、纯化即得。 乳化交联法制备微球受到很多因素的影响 ， 比 如 壳聚糖浓度、搅拌速度、壳聚糖与阿司匹林质量
28、比和交联时间 等 ， 本实验分别研究了这些因素对微球形成的影响。 3.4.1 壳聚糖浓度对微球外形 的影响 按照 2.4 方法制备阿司匹林壳聚糖微球，根据 2.5.5 方法观察微球外形。 结果如图 2，图 3，图 4。 图 2 2.0%壳聚糖（ 100） 图 3 2.5%壳聚糖（ 100） 图 4 3.0%壳聚糖（ 100） 由图可知壳聚糖浓度是决定微球形态的重要因素之一。随着壳聚糖浓度的增加，体系粘度增加，壳聚糖基质可有效阻止微球在制备过程中药物分子从未固化的微滴扩散进入连续相，从而使微球粒径增加，分散性降低。但浓度增加也会使微球在分散相中的流动速度下降，导致球体的粒度分布不均匀。而浓度过高，粘度太大，工艺操作困难。 3.4.2 搅拌速度 对微球的影响
