1、Omega-3 多不饱和脂肪酸干预实验研究方案一、研究背景原发性高血压(essential hypertension，EH)是遗传因素和环境因索相互作用引起的一种全身代谢紊乱状态复杂，是心脑血管病的主要危险因素，严重危害着人类的健康，已成为全球重大的公共卫生问题之一。但目前原发性高血压的个性化营养治疗尚处于起步阶段，不同基因型患者对相同的营养治疗可能具有不同的应答反应，研究患者基因型对营养治疗的影响将是原发性高血压个性化营养治疗过程中的关键步骤，然而目前这一领域的研究仍相当有限 1。动物实验研究表明，长期缺乏膳食 n-3 多不饱和脂肪酸（omega-3 polyunsaturated fatt
2、y acids, PUFA）大鼠可以诱发血压显著升高 2-4，而补充长链 n-3PUFA 的幼鼠可以显著抑制超验阴离子自由基生成而提高血管内皮 eNOS 活力 5。国外通过鱼油或亚麻籽油进行临床干预研究表明膳食 n-3 对西方健康人群血压无明显影响 6, 7，但能显著降低西方老年高血压人群血压，特别是收缩压 7；荟萃分析（meta-analysis）显示每天摄入超过 3g 的 n-3 多不饱和脂肪酸能显著降低收西方原发高血压人群缩压和舒张压，但对合并高血脂或肥胖等慢性疾病的高血压人群降压效果仍有争议 8, 9。国内相关临床实验研究报道较少，有研究表明短期（140/90 mmHg ）和目前服药高
3、血压患者诊断标准：2010 中国高血压防治指南 性别：不限（男性和女性） ，年龄 1875 岁； 了解研究步骤并签署知情同意书2) 排除标准 不愿意接受知情同意书； 继发性高血压 孕妇； 伴有严重心血管疾病 (心梗、心衰、脑卒中 )、严重肾脏疾病、重症糖尿病、严重肝病和恶性肿瘤； 食用海鲜有过敏症状的患者； 其他可能影响临床研究评价的病例、或不适合临床研究的病例3) 伦理委员会和知情同意书伦理申请可经浙江大学生物系统工程与食品学院委员会报批。研究者通过口述和知情同意书向志愿者者详细说明研究方案，志愿者同意后由试验负责人和志愿者共同署名，并注明日期。2、项目实施流程图临床干预研究方案流程图3、干
4、预策略及分组 洗脱：试验开始前向 150 名志愿者提供 D 食品，持续 2 周（4 粒/天人） 。 随机分组：洗脱期结束后由专门人员将志愿者随机分为三组（利用 SAS 软件按照年龄、性别，民族和 BMI 进行区组随机分配）即：A、B 和 C 组。 干预策略:参与者于常规临床用药的基础上每天饭后口服相应胶囊，每人每天 4 粒（早和晚各 2 粒） ，持续 180 天。A 组（n = 50 人）： A 食品 (4 粒/ 人天)B 组（n = 50 人）：B 食品 (4 粒/ 人 天)C 组（n = 50 人）：C 食品 (4 粒/ 人 天)试验期间（包括洗脱期） ，所有志愿者都保持正常体力活动、临床
5、用药和饮食习惯。 盲法实施胶囊全部去掉标签，由专门非项目研究人员分类标记，分配给志愿者。4、临床资料与样本收集 临床基线资料收集试验开始前，通过CRF表收集受试者的人口学基本特征（身高，体重，腰围，臀围等） 、生活方式因素，家族史以及临床用药情况。计算体质指数(body mass index，BMI) = 体重(Kg)/身高 2(m2) 和腰臀比(waist to hip ratio，WHR) = 腰围(cm)臀围(cm) 。所有受试者在洗脱期结束后，试验第0天、90天和180天都进行血压和心率等相关指标的测定，并收集适量血液和尿液。 血样和尿样收集实验第 0 天、90 天和 180 天，分别
6、采集志愿者 10ml 空腹血液（ 4ml 促凝血和 6ml 抗凝血样本）和8ml 尿样。将血液样本分装为：2ml 血清、2ml 血浆、白细胞、红细胞以及 2ml 全血（抗凝血） ，分装方法见附录。血清和部分尿样用于临床生化检查，剩余尿样、血浆和血细胞储存在-80 0C 冰箱中待测。 血压测量与降压临床评价每一受试对象在试验第0天、90天和180天晨时、座位、右臂血压，连续三次，并取其平均值作为被测对象该次测量的血压值（包括收缩压和舒张压） 。降压疗效评价: 以该次测量的血压值恢复到正常范围内，视为该次降压有效；在每一受试对象第90天和180天血压测量后，有效次数 2视为该受试者降压有效。 临床
7、生化与相关指标检测：临床生化参数：血脂四项（甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇） 、空腹血糖、胰岛素、糖化血红蛋白、肝肾功能、尿酸、肌酐、血钠、血钾等；相关实验室指标：红细胞膜脂肪酸、炎症因子、高血压三项（血浆肾素、血管紧张素和醛固酮）和相关基因检测。5、不良反应:Omega-3多不饱和脂肪酸系膳食成分，为人体必需营养素 , 属无毒类化学物 (LD50 5000mg/kg)。正常服用条件下（ 8g/day）可能会产生口臭，胃灼热，恶心和稀便。参考文献1. Dedoussis GV, Kaliora AC, Panagiotakos DB. Genes, diet and
8、 type 2 diabetes mellitus: A review. Rev Diabet Stud. 2007;4(1):13-24.2. Begg DP, Puskas LG, Kitajka K, et al. Hypothalamic gene expression in omega-3 pufa-deficient male rats before, and following, development of hypertension. Hypertens Res. 2012;35(4):381-387.3. Armitage JA, Pearce AD, Sinclair AJ
9、, et al. Increased blood pressure later in life may be associated with perinatal n-3 fatty acid deficiency. Lipids. 2003;38(4):459-464.4. Begg DP, Sinclair AJ, Stahl LA, et al. Hypertension induced by omega-3 polyunsaturated fatty acid deficiency is alleviated by alpha-linolenic acid regardless of d
10、ietary source. Hypertens Res. 2010;33(8):808-813.5. Das UN. Long-chain polyunsaturated fatty acids interact with nitric oxide, superoxide anion, and transforming growth factor-beta to prevent human essential hypertension. Eur J Clin Nutr. 2004;58(2):195-203.6. Rasmussen BM, Vessby B, Uusitupa M, et
11、al. Effects of dietary saturated, monounsaturated, and n-3 fatty acids on blood pressure in healthy subjects. Am J Clin Nutr. 2006;83(2):221-226.7. Shah AP, Ichiuji AM, Han JK, et al. Cardiovascular and endothelial effects of fish oil supplementation in healthy volunteers. J Cardiovasc Pharmacol The
12、r. 2007;12(3):213-219.8. Geleijnse JM, Giltay EJ, Grobbee DE, et al. Blood pressure response to fish oil supplementation: Metaregression analysis of randomized trials. J Hypertens. 2002;20(8):1493-1499.9. Hartweg J, Farmer AJ, Perera R, et al. Meta-analysis of the effects of n-3 polyunsaturated fatt
13、y acids on lipoproteins and other emerging lipid cardiovascular risk markers in patients with type 2 diabetes. Diabetologia. 2007;50(8):1593-1602.10. 王顺，马爱群，宋少武，权青海，郑晓晖，赵新. 短期补充鱼油对超重高血压患者大动脉弹性的改善作用. 中国微循环杂志 . 2007;22(1):24-26.11. 刘立新. Omega-3 脂肪酸对高血压合并颈动脉粥样硬化患者血管内皮功能的影响. 中国临床药理学杂志 . 2010;26(5):330-3
14、34.12. 陈洁文 张, 李 铎. 高血压患者血清磷酯脂肪酸谱与血脂的相关性研究. 心脑血管病防治 . 2006;6(2):70-73.13. Yoon S, Shin C, Park HY, et al. Endothelial nitric oxide synthase gene is associated with vessel stenosis in korean population. Clin Chim Acta. 2005;353(1-2):177-185.14. Lacolley P, Gautier S, Poirier O, et al. Nitric oxide syn
15、thase gene polymorphisms, blood pressure and aortic stiffness in normotensive and hypertensive subjects. J Hypertens. 1998;16(1):31-35.15. Xin Y, Song X, Xue H, et al. A common variant of the enos gene (e298d) is an independent risk factor for left ventricular hypertrophy in human essential hyperten
16、sion. Clin Sci (Lond). 2009;117(2):67-73.16. Djuric T, Zivkovic M, Stankovic A, et al. Endothelial nos g894 t and mmp-3 5a/6a gene polymorphisms and hypertension in serbian population. J Clin Lab Anal. 2005;19(6):241-246.17. Tsujita Y, Baba S, Yamauchi R, et al. Association analyses between genetic
17、polymorphisms of endothelial nitric oxide synthase gene and hypertension in japanese: The suita study. J Hypertens. 2001;19(11):1941-1948.18. Ehret GB, Morrison AC, OConnor AA, et al. Replication of the wellcome trust genome-wide association study of essential hypertension: The family blood pressure
18、 program. Eur J Hum Genet. 2008;16(12):1507-1511.19. Ahlqvist E, Ahluwalia TS, Groop L. Genetics of type 2 diabetes. Clin Chem. 2011;57(2):241-254.20. Klimentidis YC, Abrams M, Wang J, et al. Natural selection at genomic regions associated with obesity and type-2 diabetes: East asians and sub-sahara
19、n africans exhibit high levels of differentiation at type-2 diabetes regions. Hum Genet. 2011;129(4):407-418.21. Perkovic V, Huxley R, Wu Y, et al. The burden of blood pressure-related disease: A neglected priority for global health. Hypertension. 2007;50(6):991-997.22. Sesso HD, Buring JE, Rifai N,
20、 et al. C-reactive protein and the risk of developing hypertension. JAMA. 2003;290(22):2945-2951.23. Yin J, Peng Y, Wu J, et al. Toll-like receptor 2/4 links to free fatty acid-induced inflammation and beta-cell dysfunction. J Leukoc Biol. 2013.24. Devaraj S, Dasu MR, Rockwood J, et al. Increased to
21、ll-like receptor (tlr) 2 and tlr4 expression in monocytes from patients with type 1 diabetes: Further evidence of a proinflammatory state. J Clin Endocrinol Metab. 2008;93(2):578-583.25. Dasu MR, Devaraj S, Park S, et al. Increased toll-like receptor (tlr) activation and tlr ligands in recently diag
22、nosed type 2 diabetic subjects. Diabetes Care. 2010;33(4):861-868.26. Jialal I, Huet BA, Kaur H, et al. Increased toll-like receptor activity in patients with metabolic syndrome. Diabetes Care. 2012;35(4):900-904.27. Kim K, Jung N, Lee K, et al. Dietary omega-3 polyunsaturated fatty acids attenuate
23、hepatic ischemia/reperfusion injury in rats by modulating toll-like receptor recruitment into lipid rafts. Clin Nutr. 2013;32(5):855-862.28. He GZ, Zhou KG, Zhang R, et al. The effects of n-3 pufa and intestinal lymph drainage on high-mobility group box 1 and toll-like receptor 4 mrna in rats with i
24、ntestinal ischaemia-reperfusion injury. Br J Nutr. 2012;108(5):883-892.29. Suganami T, Tanimoto-Koyama K, Nishida J, et al. Role of the toll-like receptor 4/nf-kappab pathway in saturated fatty acid-induced inflammatory changes in the interaction between adipocytes and macrophages. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2007;27(1):84-91.
