1、初始污染菌和微粒污染控制验证方案 1.目的 通过设计试验确认 XX 半成品的储存环境和存放有效期。其可能存在的环节如下： （1）在内包装封口前初始污染菌是否满足控制要求（定期监控） ； （2）等待灭菌的产品，密封严实存放在外包间，其初始污染菌随储存时间变化。 2.适用范围 本验证方案适用于本产品，通过试验研究，以确定在各种情况下的储存有效期。 3.发放范围 管理者代表、生产部和质量部等有关部门及人员。 4.规范性引用文件 中华人民共和国药典2015 版 附录 微生物限度检查法 5. 组织和职责 根据验证工作量的大小，本公司成立验证组，由公司管理者代表任组长，生产部、质量部、有关 部门及人员任组
2、员。验证小组职责： 负责验证方案的起草、批准； 负责验证的协调工作，以保证验证方案规定项目的顺利实施； 负责验证数据结果的审核； 负责验证报告的审批； 负责发放验证证书； 负责确定该项验证的再验证周期。 5.1 主责部门 本方案的主责部门为公司管理者代表，其职责为:负责审批验证方案和验证报告，颁发验证证书。 5.2 相关部门 本方案的相关部门为质量部，其职责为：按标准操作规程及验证方案进行各项确认，及时报告确 认结果，形成验证报告；负责操作培训和现场监督。 6.步骤和方法 6.1 计划及进度 本验证由质量部提出完整的验证计划，经验证小组批准后实施，由质量部完成，整个验证活动分 为两个阶段完成：
3、 运行确认(OQ) 从 年 月 日到 年 月 日 性能确认(PQ) 从 年 月 日到 年 月 日 6.2 初始污染菌和微粒检测方法及可接受标准 6.2.1 抽样方法和抽样规律 以每一个生产批为产品抽样批，随机抽取样品 1 片（长宽约 5cm2cm）记为 1 单位，在洁净条件 下精确称重，并标记。 需要临时或长期存放时间预计不超过 30 天（1 个月） ，综合细菌的生长规律及可能存在的存放天 数，其抽样检测的时间设计为存入后：第 1 天、第 2 天、第 3 天、第 5 天、第 7 天、第 15 天、第 30 天。 QOS-P002-736-02-01-0 1 6.2.2 供试液制备 1) 取 0
4、.9%的生理盐水溶液 10ml，盛于已灭菌的试管内； 2) 将取样依次投入试管，充分摇匀。 6.2.3 接种与培养 1) 取上述供试液 1ml 加入 9ml 生理盐水溶液，稀释成 1:10；取上述稀释液 2ml，分别注入 2 个已 灭菌的平皿内(每个平皿注入 1 ml)； 2) 同时取 1ml 加入盛有 9ml 生理盐水溶液的试管中，稀释成 1：100，再取此稀释液 2ml，分别注 入 2 个已灭菌平皿内(每个平皿注入 1 ml)； 3) 用已灭菌的营养琼脂培养基，融化待冷却到 40-50，分别倾注 15ml 上述 4 个平皿，盖好上 盖，并以顺时针或逆时针方向快速转动平皿，使供试液与培养基充
5、分混匀。 4) 以上平皿做好标记，以免混淆。 5) 待培养基凝固后，将平皿移入 37的培养箱中培养不少于 482 小时。 6.2.4 菌落计数 1) 当菌落数大于 300 CFU 时，应将原液稀释成 1：1000，即取供试液 1ml 加入 0.9%的氯化钠溶液 9ml 中取得，然后重新接种及培养。 2) 当细菌生长呈片状、花点样菌落，该平皿不以计数。 3) 若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计 数后乘以 2，以代表全平皿菌落数。 4) 计数方法 平均数值稀释倍数 菌落数/质量（g）= 质量 a) 首先选取平均菌落数在 30300 之间的平皿，作为菌
6、落总数测定的范围。 b) 如只有一个稀释级平均菌落数在 30300 之间，则菌落数为该稀释级的菌落数乘以稀释倍数。 c) 如有两个相邻稀释级的平均菌落数在 30300 之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。 高稀释级的平均平板菌落数稀释倍数 比值= 低稀释级的平均平板菌落数稀释倍数 当比值2 时，则以 2 个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值2 时，则以低稀释级的平均菌落 数乘以稀释倍数报告。 d) 如各稀释级平均菌落数均在 300 以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平 均菌落数均在 30 以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。 e) 如各稀释级平均菌落数均不在 30300
7、 之间，则以最接近 30 或 300 的稀释级平均菌落数乘以 稀释倍数报告。 f) 如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于 1 时，应报告菌数为10 个 /g。 g) 如有 3 个稀释级平均菌落数均在 30300 之间，则以后 2 级计算级间比值报告。 h) 菌落计数的报告，菌落数在 10 以内时，按实有数值报告。大于 100 时，采用二位有效数字， 在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。 例： 不同稀释度的平均菌落数 例次 10-1 10-2 10-3 两相邻稀释度 菌数之比 菌落总数 个/g 报告方式 个/g 1 136
8、5 164 20 - 16400 16000 或 1.6104 2 2760 295 46 1.6 38000 38000 或 3.8104 3 2890 271 60 2.2 27100 27000 或 2.7104 4 不可计 4650 513 - 513000 510000 或 5.1105 5 27 11 5 - 270 270 或 2.7102 QOS-P002-736-02-01-0 2 i）总稀释倍数计算时应包括取样时的10ml，即已稀释10倍。 6.2.5 可接受标准 初始污染菌和微粒控制值：100 CFU/单位 6.3 验证内容 6.3.1 包装封口前的半成品 生产批号 初始污染菌检测均值（CFU/单位） 结果评价 结论：灭菌前初始污染菌 主检： 复检： 日期： 年 月 日 6.3.2 等待灭菌的半成品 存放时间 初始污染菌检测均值（CFU/单位） 评价 第 1 天 第 2 天 第 3 天 第 7 天 第 15 天 第 30 天 结论：半成品初始污染菌 主检： 复检： 日期： 年 月 日 以上记录要三次生产批。 7.批准结论 验证组组长对验证报告进行审查、批准、并出具合格证明（合格验证报告） 。 8.再验证周期 a）常规再验证周期一年； b) 定期对初始污染菌和微粒的检测，定期汇总并进行趋势分析；
