1、毕业论文开题报告 环境科学 温度对恶臭假单胞菌生物学特性的影响 1课题研究意义及国内外研究现状 随着世界水产养殖业的不断发展，特别是高密度养殖技术的推广，水产养殖动物疾病时有暴发与流行，病害问题已成为水产养殖业持续发展的主要制约因素。其中恶臭假单胞菌是危害水产养殖动物的最严重的疾病之一。 恶臭假单胞菌是环境中存在的一种革兰氏阴性杆菌，有些菌株为卵圆形，单端丛毛菌，运动活泼，专性需氧，是一种致病菌。其主要危害对象是水产动物，如 三疣梭子蟹、欧洲鳗鲡和大黄鱼等， 常从腐败的鱼类中检出。樊海平在论述鱼的烂腮病时提到 此菌是鱼的白云病和烂腮病的病原菌，并可引起鱼类的死亡，给海水养殖业造成了巨大的经济损
2、失。动物实验的结果还表明恶臭假单胞菌是丹顶鹤的致病菌，同时证实对禽类有致病性（但对哺乳动物的昆明系小鼠没有致病性）。近年来还对人类健康有一定的危害，可引起人类非特异性尿道炎，病人手术后感染很多也是由恶臭假单胞菌引起的。 假单胞菌 为条件致病菌，其致病性主要取决于鱼体的生理状态及水环境的理化条件。 大量研究表明，革兰氏阴性菌如大肠杆菌（ Escherichia coli）、霍乱弧菌（ Vibrio cholerae）、耶尔森氏菌（ Yersinia）、爱德华氏菌（ Edwardsiella）等的外膜蛋白 (Outer membrane Protein,OMP)是细菌的粘附素，在致病和免疫中起重要
3、作用。 Merino 等曾报道温度影响嗜水气单胞菌外膜的组成成分和毒力 ,孙建和等采用 SDS-PAGE 技术研究发现，温度对嗜水气单胞菌外膜蛋白的表达量具有明显影响，但并未有新条带的增加。 Gonzalez-Serrano 等人也指出嗜水气单胞菌在不同温度下所表达的溶血素和细胞毒素的活性不同。任静等研究表明原料乳中嗜冷菌所产脂肪酶的最大酶活力随培养温度的升高而升高 。国外研究显示，在不同生长温度条件下，极地嗜冷菌生成的胞外蛋白酶量存在差异，但蛋白水解活性组分的组成却是一致的。革兰氏阴性菌胞壁上的脂多糖 (lipopolysaccaride， LPS)是导致感染敷血症性休克发生的一系列毒性反应
4、的主要病源物。经不同培养时间提取哈氏弧菌的 LPS，在 0h-48h 内产量逐渐增加， LPS 电泳图谱存在差异。温度条件还对菌株合成次生代谢产物有所影响。对于恶臭假单胞菌在不同温度的情况下的生物学特性尚知甚少。 本研究开展培养温度对恶臭假单胞菌生物学特性的影响研究，包括不同培养温度下产酶特性、 外膜蛋白种类、脂多糖特性等 ， 为阐明恶臭假单胞菌不同温度条件下的致病机理提供部分基础 。 2课题研究的主要内容、预期目标和研究方案 研究内容 ： 1、不同温度下酶的产生种类研究 选取 5 个不同温度 4/15/20/25/30 进行培养，测定不同培养温度下 胞外、 胞内产物的产酶特性，包括 淀粉酶
5、、蛋白酶、磷脂酶等。 2、不同培养温度下外膜蛋白组成的比较 以十二烷基肌氨酸 Sarkosyl 法提取菌株外膜蛋白，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE，检测主要条带的差异。 3、不同培养温度下菌体脂多糖的差异 采用酚水法提 取脂多糖， SDS-PAGE 后银染，检测分子量和主要条带的差异。 预期目标 ： 1.不同温度下酶的产生种类不同。 2.不同温度下 提取的 外膜蛋白 含量 不同，随温度的增大产量增加，所对应的高分子量外膜蛋白条带增多。 3.不同温度下粗提脂多糖中外膜蛋白含量随培养温度的升高呈增多的趋势，不同温度下谱带存在差异。 3 课题进度计划 1、 2011.102011.11，不同
6、温度下 产酶 特性 的 研究； 2、 2011.122012.1，不同培养温度下外膜蛋白组成的比较； 3、 2011.122012.1，不同培养温度下菌体 脂多糖的差异； 4、 2012.32012.4，总结报告的撰写和结题。 4 参考文献 1 毛芝娟 ,楼丹 ,杨波等 .用灭活哈维弧菌菌苗浸泡免疫大黄鱼的研究 J.华中农业大学 学报 .2004,23(3): 326-330. 2 王学高 ,黄增荣 ,袁明 .三疣梭子蟹牛奶病病原的分离鉴定 J.西北农林科技大学学报 . 2007, 35(6): 29-33. 3 樊海平 .恶臭假单胞菌引起的欧洲鳗鲡烂鳃病 J.水产学报 .2001,25(2)
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