1、9 种杀菌剂对樟子松枯梢病的室内毒力测定摘要：利用菌丝生长速率法和孢子萌发抑制法， 测定了 9 种杀菌剂对松球壳孢菌的毒力，筛选出有效控制松枯梢病的高效杀菌剂。主要结果：抑制菌丝生长试验，25%苯醚甲环唑效果最好，对病原菌抑制的EC50 值为 0.0797mgL-1，32.5%苯甲+醚菌酯次之；在抑制孢子萌发方面，32.5%苯甲+醚菌酯效果最好，对分生孢子萌发抑制的 EC50 值为0.0481mgL-1，25%苯醚甲环唑次之。综合分析，32.5%苯甲+醚菌酯和25%苯醚甲环唑不但可以抑菌菌丝生长，还可以有效抑制孢子萌发，同传统杀菌剂多菌灵、代森锰锌比较，苯醚甲环唑和醚菌酯等新型杀菌剂更具优势，
2、可以作为防治樟子松枯稍病的备选药剂。 关键词：樟子松枯梢病；无公害杀菌剂；毒力测定 中图分类号：S482.2 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2012）-12-0038-2 樟子松（Pinus sylvestris var mongolica）因具有耐干旱、耐瘠薄、抗寒、速生等生物学特性，而且材质优良，用途广泛，成为用材林、防护林以及绿化的优良树种。樟子松现已成为三北防护林工程和治沙工程建设的主要造林树种之一1。樟子松枯梢病是由由松球壳孢菌（Sphaeropsis sapinea（Fr）Dyko et Sutton）引起的樟子松人工林主要病害2-5，在北方地区包括黑龙江、吉林、辽
3、宁以及内蒙古均有发生，随着樟子松人工林面积的逐年扩大，樟子松枯梢病害日趋严重，造成了巨大的经济损失。对樟子松枯梢病的有效持续控制是当前研究的重点，目前樟子松枯梢病主要以化学防治结合营林措施为主6-7，经过多年的研究，形成了有效的防控方法和技术，但是也存在一定的问题，农药品种老旧，病原产生抗药性，以及防治过程中造成的环境污染等一系列问题亟待解决。本文的主要工作是对高效无公害农药品种进行筛选，以期筛选得到好的农药品种，为樟子松枯梢病的防治提供理论基础。 1 材料和方法 1.1 供试菌株和药剂 1.1.1 病原菌株 供试病原菌松球壳孢菌（Sphaeropsis sapinea（Fr）Dyko et
4、Sutton）分离自黑龙江省牡丹江海林林业局奋斗林场樟子松人工林，4保存于 PDA 斜面。 1.1.2 供试药剂 选用 9 种无公害农药进行毒力测定，具体名称种类见表 1。 1.2 试验方法 对樟子松枯稍病菌松球壳孢菌的毒力测定，分别采取菌丝生长抑制法和孢子萌发抑制法进行筛选，通过计算抑制中浓度（EC50） ，筛选出高效的无公害农药品种。 1.2.1 菌丝生长抑制法 采用直接添加法，用无菌水将杀菌剂分别配制成 10 倍的母液，用移液器分别吸取定量药液加入到 100mL PDA 培养基中（培养基温度为 50左右）混匀，使其终浓度分别为100、200、500、1000、2000、3000、5000
5、、8000 倍 8 个浓度梯度，倒入直径为 9cm 的培养皿制成带药平板培养基，进行抑菌测定，以无菌水作空白对照。在培养好的松球壳孢菌（Sphaeropsis sapinea）菌落边缘用0.5cm 打孔器切取菌丝块，分别移到混有供试农药的 PDA 平板培养基上，每处理 3 个重复。在 25恒温培养箱培养 48h 后，采用十字交叉法测量松球壳孢菌（Sphaeropsis sapinea）菌落直径，计算菌落直径平均值和菌丝生长抑制率。 菌丝生长抑制率/%=1-（处理菌落直径-菌饼直径）/（对照菌落直径-菌饼直径）100%） 1.2.2 孢子萌发抑制法 用无菌水冲洗培养好的松球壳孢菌（Sphaero
6、psis sapinea）菌落平板，收集孢子，计数后稀释到一定浓度，配制成孢子悬浮液， 。采用悬滴法测定 9 种杀菌剂不同浓度梯度对松球壳孢菌（Sphaeropsis sapinea）孢子萌发的影响，使用的药物浓度梯度同上，分别取待测农药（含 2%葡萄糖）及病原孢子悬浮液各 20L 滴于载玻片上，混合，将载玻片置于保湿器中，置于 25恒温箱中培养，以 2%葡萄糖溶液与松球壳孢菌（Sphaeropsis sapinea）孢子液的混合作对照，每处理 3 个重复，24h 后镜检松球壳孢菌（Sphaeropsis sapinea）分生孢子的萌发率，每个梯度镜检 10 个视野，将结果累加。 孢子萌发抑制
7、率（%）=（1-处理孢子萌发数/对照孢子萌发数）100% 1.3 数据统计分析 采用 DPS 统计软件和 Excel 软件对测定数据进行处理和计算，将菌丝生长抑制率和孢子萌发抑制率分别换算成机率值（y） ，药剂浓度换算成浓度对数（x） ，按浓度对数与机率值回归法求得线性回归方程y=a+bx，并以回归方程计算各供试药剂对立枯丝核菌和腐皮镰刀军菌丝生长和孢子萌发的抑制中浓度（EC50） 、机率值与浓度对数之间回归的相关系数 r 值，比较不同杀菌剂对松球壳孢菌（Sphaeropsis sapinea）的抑制作用。 2 结果与分析 2.1 杀菌剂对松球壳孢菌菌丝生长的抑制作用 不同浓度的杀菌剂与其对松
8、球壳孢菌的抑制率之间是一种不对称的S 型曲线关系，将浓度转化为对数，抑制率转化为概率值时，浓度与抑制率之间表现为一元直线回归关系，通过相关性分析，可以检验线性关系的显著性，分析比较杀菌剂对病菌的毒力。 试验结果看出，9 种杀菌剂的毒力回归方程表明，y 与 x 间都存在极显著的直线回归关系，9 种杀菌剂对松球壳孢菌的菌丝生长均具有一定的抑制作用。对病菌抑制的 EC50 值，25%苯醚甲环唑效果最好，对病原菌抑制的 EC50 值为 0.0797mgL-1，32.5%苯甲+醚菌酯次之，其他依次为50%戊唑醇、25%苯唑醚菌酯、25%醚菌酯、50%嘧菌环胺、50%异菌脲、80%多菌灵 85%代森锰锌，
9、同传统杀菌剂多菌灵和代森锰锌等相比，苯醚甲环唑和醚菌酯等杀菌剂表现了更强抑制菌丝生长的作用，新型杀菌剂可以作为替代品在防治中进行应用。 2.2 不同药剂对松球壳孢菌孢子萌发的抑制作用 不同杀菌剂对松球壳孢孢子萌发的抑制作用结果见表 3，9 种杀菌剂对松球壳孢菌分生孢子的萌发均具有一定的抑制作用。其中，对孢子萌发抑制的 EC50 值，32.5%苯甲+醚菌酯效果最好，对分生孢子萌发抑制的EC50 值为 0.0481mgL-1，25%苯醚甲环唑次之；其他依次为 25%醚菌酯、25%苯唑醚菌酯、50%嘧菌环胺、50%戊唑醇、50%异菌脲、85%代森锰锌和80%多菌灵。9 种杀菌剂对孢子萌发的抑制作用和
10、菌丝生长的抑制作用排序大体相同，同传统农药多菌灵、代森锰锌等相比，新型杀菌剂醚菌酯、苯醚甲环唑等具有更有效的抑制菌丝生长和孢子萌发的作用。 3 结论 本文重点研究了 9 种高效无公害杀菌剂对松球壳孢菌的室内毒力测定，测定对菌丝生长和孢子萌发的抑制作用，建立毒力回归方程并计算了对菌丝生长和孢子萌发抑制作用的 EC50 值。通过比较排序，苯醚甲环唑和醚菌酯等新型杀菌剂表现了较强的抑菌作用，同传统杀菌剂多菌灵和甲基托布津相比，更加具有优势。建议在进一步的防治试验中，选择苯醚甲环唑和醚菌酯等新型杀菌剂进行樟子松枯梢病的防治研究。 参考文献 1 邹良，孟庆超.东北内蒙地区樟子松病害及防治J.防护林科技，
11、1995.2：42-44. 2 黄敬林，张力.樟子松枯梢病研究进展J. 东北林业大学学报，2005，33（2）：83-85. 3 吴小芹.全球松树枯梢病发生状况及防治策略 J.世界林业研究， 1999，12（1）：16-20. 4 Wilson L F. Pine spittlebug： its ecology and managementM.United States of Agriculture-Forest service， Agriculture Handbook， 1991.30-35. 5 项存悌，原树忠.樟子松枯梢病的研究J.东北林学院学报， 1981，2：1-10. 6 吴景云.樟子松幼苗枯梢病危害与防治J.防护林科技， 2001，48（3）：70-71. 7 王德宏，徐志和.樟子松枯梢病及其防治措施J.林业科技， 2000，25（2）：27-28. 作者简介：宋修春（1974-） ，黑龙江省森工总局海林林业局奋斗林场营林助理工程师，从事森林经营，森林保护等方面工作。
