1、本科毕业设计（20_届）乌贼墨汁粗多糖的抗菌活性研究所在学院专业班级食品质量与安全学生姓名学号指导教师职称完成日期年月目录1绪论错误未定义书签。11概述错误未定义书签。12多糖的研究状况错误未定义书签。121简介错误未定义书签。1211分布与种类错误未定义书签。1212化学组成及结构错误未定义书签。122多糖的作用错误未定义书签。1221抗肿瘤、提高免疫力错误未定义书签。1222抗氧化作用错误未定义书签。1223抗菌作用错误未定义书签。1224其他作用错误未定义书签。13研究目的、意义与主要内容错误未定义书签。2材料与方法错误未定义书签。21材料与试剂错误未定义书签。22主要仪器错误未定义书签
2、。23方法错误未定义书签。231粗多糖的提取错误未定义书签。232多糖含量的测定错误未定义书签。233供试菌种活化与菌悬液的制备错误未定义书签。234粗多糖加样做抑菌圈错误未定义书签。235不同浓度粗多糖的抑菌性能的比较错误未定义书签。236确定粗多糖对不同菌株的最小抑菌浓度（MIC）错误未定义书签。237粗多糖对不同菌株的抑菌率33结果与讨论错误未定义书签。31粗多糖含量的测定错误未定义书签。311标准曲线错误未定义书签。312多糖含量测定错误未定义书签。32粗多糖对不同菌株的抑菌作用错误未定义书签。33不同浓度粗多糖的抑菌性能的比较错误未定义书签。34粗多糖对不同菌株的最小抑菌浓度MIC错
3、误未定义书签。35粗多糖对不同菌株的抑菌率错误未定义书签。4小结8致谢9参考文献错误未定义书签。摘要乌贼墨是乌贼加工中的废弃物，但其具有一定的利用价值。本实验以金乌贼SEPIAESCULENTAHOYLE墨汁为原料，对乌贼墨汁粗多糖的抗菌活性进行研究，分析乌贼墨多糖对细菌或真菌是否具有抗菌活性。采用碱性蛋白酶醇沉法从新鲜乌贼墨囊中提取获得占乌贼墨汁总重量为3899的粗多糖。本实验主要是根据抑菌圈的有无及其直径大小来判断乌贼墨汁粗多糖对细菌和真菌的抑菌效果。结果表明，乌贼墨汁粗多糖对青霉和黑曲霉无明显抗菌作用，但对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌和枯草芽孢杆菌有明显的抗菌作用，浓度越高抗菌活性越强；
4、乌贼墨汁粗多糖对枯草芽孢杆菌的抑菌效果最明显，金黄色葡萄球菌次之，大肠埃希氏菌第三，并且测得乌贼墨汁粗多糖对该三种细菌的最小抑菌浓度MIC分别为75MG/ML、90MG/ML、100MG/ML，抑菌率分别为2260、1521、1505。关键词乌贼墨汁；粗多糖；抗菌活性ABSTRACTCUTTLEFISHINKISTHECASTOFFOFCUTTLEFISHPROCESSING,BUTITHASACERTAINVALUEINUSETHEPOLYSACCHARIDESCONTAINEDINCUTTLEFISHINKWEREOBTAINEDTHEANTIBACTERIALACTIVITYOFCRUD
5、EPOLYSACCHARIDEINCUTTLEFISHINKWASSTUDIEDANDITWASANALYSEDTHATIFTHEPOLYSACCHARIDESCONTAINEDINCUTTLEFISHINKSHOWEDANTIBACTERIALACTIVITYONFUNGUSESORBACTERIACRUDEPOLYSACCHARIDESWEREEXTRACTEDFROMINKSACOFCUTTLEFISHBYALCALASEALCOHOLMETHODANDITSYIELDOBTAINED3899CRUDEPOLYSACCHARIDESCONTAINEDINCUTTLEFISHINKDOES
6、NTSHOWANTIBACTERIALACTIVITYONPENICILLIUMGLAUCUMANDASPERGILLUSNIGERANDSHOWSSIGNIFICANTANTIBACTERIALACTIVITYONSTAPHYLOCOCCUSAUREUS,ESAHERICHIACOLIANDBACILLUSSUBTILIS,THEANTIBACTERIALACTIVITYWASINCREASEDINDOSEDEPENDENTWAYSBYPOLYSACCHARIDESCONTAINEDINCUTTLEFISHINKSOMEOFTHECHARACTERSOFTHEANTIBACTERIALSUB
7、STANCEWERESTUDIEDTHEANTIBACTERIALACTIVITYONBACILLUSSUBTILISISTHEMOSTSIGNIFICANT,ANDITISTHETHIRDOBVIOUSNESSONESAHERICHIACOLITHEMINIMALINHIBITORYCONCENTRATIONMICOFTHECRUDEPOLYSACCHARIDESONBACILLUSSUBTILIS,STAPHYLOCOCCUSAUREUSANDESAHERICHIACOLIARE75MG/ML,90MG/MLAND100MG/ML,RESPECTIVELYTHEANTIBACTERIALR
8、ATEOFTHECRUDEPOLYSACCHARIDESONBACILLUSSUBTILIS,STAPHYLOCOCCUSAUREUSANDESAHERICHIACOLIARE2260,1521AND1505,RESPECTIVELYKEYWORDSCUTTLEFISHINKCRUDEPOLYSACCHARIDEANTIBACTERIALACTIVITY111绪论11概述乌贼CUTTLEFISK属于软体动物门PHYLUMMOLLUSCA头足纲CLASSCEPHALOPODE乌贼目SEPIOIDEANAEF乌贼科SEPIDACKEFERTEIN乌贼属SEPIALINNAEUS的一种海洋生物，具有
9、较高营养和多种药用功能。其种类繁多，最常见的有金乌贼SEPIAESCULENTAHOYLE、曼氏无针乌贼SEPIALLAMAINDRONIDEROCHEBRUNE、虎斑乌贼SEPIAPHARAONISEHRENBERG、白斑乌贼SEPIALATIMANUSQUOYETGAIMRD、拟目乌贼SEPIALYCIDASGRAY等1。乌贼墨存在于墨囊中，是乌贼遇到天敌时喷出来染黑周围水域的黑色物质，以混乱天敌视野和麻痹天敌嗅觉1，是一种防身物质，主要是由黑色素和蛋白聚糖组成2。王夙博等2通过酶解作用和阴离子交换凝胶渗透色谱法从曼氏无针乌贼的墨汁中分离得到的曼氏无针乌贼墨汁多糖（SIP），其主链是由海藻
10、糖、N乙酰半乳糖胺和甘露糖以221的摩尔比组成，通过高效凝胶过滤色谱光散射（HPSECMALLS）分析法得到SIP是分子量为113104DA的均匀结构。日本MOCHIZUKI指出SHIOKARA一种腌制发酵的鱿鱼产品中加入乌贼墨明显改善该产品的保存性能3，这表明乌贼墨还具有抗菌作用。王劲松3研究了乌贼墨中抗菌活性物质的提取及其抗菌活性，得到一种具有有较强的抗菌活性的物质，该物质吸水后变棕黄色。12多糖的研究状况121简介1211分布与种类多糖存在和分布极为广泛，几乎存在于所有植物、微生物、动物等有机体中。在植物中,尤其是从中药中提取的水溶性多糖最为重要。糖类又称为碳水化合物,是植物光合作用的初
11、生产物,是一类最丰富的天然产物,除了作为植物的贮藏养料和骨架之外,还通过它们进行合成了植物中的绝大部分成分4。如龙眼5、南瓜6、茶7、芦荟8等皆含有大量糖类。植物多糖包括淀粉,纤维素，果聚糖,半纤维素,树胶,粘液质,粘胶质,卡拉胶及其它葡聚糖4。动物多糖几乎存在于所有动物组织器官中，如海洋动物中的棘皮动物（海参9）、软体动物（乌贼2、鲍鱼10、缢蛏11）、鱼类（鲨鱼12,13）等，哺乳动物等的某些组织（皮、软骨、分泌腺、细胞壁等）都有多糖的存在。动物多糖主要存在于细胞间质中，但机体中多糖的分布不是均一的，而是随组织类型而定。动物多糖包括糖原,甲壳素,肝素,硫酸软骨素,透明质胶,硫酸角质素,酸性
12、粘多糖或糖胺聚糖。肝素、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸角质素都属糖胺聚糖,由于在体内常以蛋白质结合状态存在,故统称为蛋白聚糖4。微生物多糖，主要研究的是真菌多糖，如香菇14、黑木耳15等。1212化学组成及结构16多糖是由许多单糖分子,通过苷键连接而成的多于20个糖基的糖链。由于连接方式不同,可以形成直链多糖、叉链多糖,有时也可以形成环状的多糖。多糖的组成因所含单糖的种类、比例及其它原子基团的多少和位置而异,因组成所含苷键的类型,苷键的比例以及与此相关的支链程度等有所不同。多糖的结构分析较为复杂。因为组成多糖的单糖品种繁多,而且即使只有一种单糖,其连接方式也不同及可能有分枝。多糖的结构可分为一级结
13、构、二级结构、三级结构和四级结构。SUBOWANG等5的研究表明龙眼多糖（LPSS）是一种型吡喃环杂多糖，其次级产物LPSN是由木糖和葡萄糖以119的质量比组成的；LPSA1由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖和半乳糖以质量比1164433228构成；LPSA2仅由鼠李糖组成。LPSA1和LPSA2的总糖醛酸含量分别为6和19。这些发现表明了龙眼多糖各种各样的化学结构以及其丰富的单糖和糖醛酸的化学组成。122多糖的作用1221抗肿瘤、提高免疫力动物多糖具有抗肿瘤、提高免疫力作用。多糖抗癌的原因大多是激活了体内免疫系统，改善了机体免疫力。王夙博等2将曼氏无针乌贼墨汁中多糖硫酸化，其产物（SIPS）无细胞毒性
14、,在体外试验中对肿瘤细胞生长有抑制作用,并能显著减弱人卵巢癌细胞SKOV3中基质金属蛋白酶2（MMP2）的表达和活性、12抑制SKOV3细胞的侵袭和迁移。苏秀榕等9研究发现海参粗多糖具有明显的抗肿瘤活性,其抑瘤率为7356。从皱纹盘鲍10中提取的鲍鱼多糖能够明显增加巨噬细胞吞噬能力,增强迟发超敏反应。1222抗氧化作用赵艳景等11利用超声波提取法对缢蛏多糖，结果表明其多糖对超氧阴离子具有一定的清除能率。钦传光等发现泥鳅多糖17具有清除活性氧的作用和对OH导致DNA链损伤的抑制作用。1223抗菌作用陶海南等18对紫萁多糖抗菌活性进行了研究，结果表明从紫萁中分离到的紫萁多糖，对金黄色葡萄球菌和藤黄
15、色八叠球菌均有一定的抑制作用，应用于临床外科烧烫伤的治疗时发现该多糖在生物体皮肤上具有协同的抗菌护肤功效。叶锦林等19发现紫球藻水提物和胞外分泌物抗菌性能较强，对革兰氏阳性细菌特别是对金黄色葡萄球菌和八叠球菌的抑菌作用较为明显。夏乾峰等20研究发现方格星虫多糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌埃希茵、枯草杆菌有明显的抗茵活性。1224其他作用刺参酸性粘多糖21能够抑制纤维蛋白单体的聚集，机理是提高纤溶活性，增加纤溶敏感性，改变凝胶结构以促进纤溶和直接降解纤维蛋白。鲨鱼软骨酸性多糖具有一定的降血脂的作用12，机理可能与其提高毛细血管内脂蛋白脂酶活性并促进该酶释放有关。李东霞等13证实中华鳖多糖、壳聚糖具
16、有极显著的抗疲劳活性，能有效减轻运动机体中乳酸的堆积并能迅速消除堆积的乳酸，增强有氧代谢耐力，从而延缓小鼠机体疲劳的发生并加速疲劳的恢复。13研究目的、意义与主要内容日本学者TAKAYA指出，海洋生物中含有结构我们熟悉或不熟悉的、具有生理活性的物质，很多生理活性还没有被深入的研究，而这些研究都可能引导我们去开发一种新的药物资源或得到一种新的有药用的化合物1。乌贼具有高营养、生活史较短、生长快和分布广等特点，是一类很有发展前景的海水养殖种类，也是海洋中最大、最具潜在价值的蛋白质资源。在乌贼加工后一般会产生的墨囊（包括墨汁、皮、骨、内脏等废弃物。在当前乌贼资源日渐衰竭的情况下，这是一项非常可观的资
17、源。开发利用乌贼墨不仅可变废为宝，获得经济效益，还可以改善环境，取得良好的社会效益。目前，有关乌贼墨和动物多糖的研究日益增多，但文献报道中对乌贼墨汁多糖的研究较少，为提高乌贼的利用价值，本实验以金乌贼SEPIAESCULENTAHOYLE墨汁为原料，研究对乌贼墨汁粗多糖的抗菌活性进行研究，分析乌贼墨多糖对细菌或真菌的抗菌活性，从而提高乌贼资源的利用率并开发新的抗菌剂。2材料与方法21材料与试剂金乌贼（购于宁波庄市菜市场）。生理盐水、氢氧化钠、盐酸、甲醇、乙醇、丙酮均为国产分析纯。供试菌种细菌大肠埃希氏菌（ESAHERICHIACOLI）、金黄色葡萄球菌（STAPHYLOCOCCUSAUREUS
18、）、枯草芽孢杆菌（BACILLUSSUBTILIS）；真菌青霉（PENICILLIUMGLAUCUM）、黑曲霉（ASPERGILLUSNIGER）。营养琼脂培养基（杭州微生物试剂有限公司），用于细菌培养，其主要成分为蛋白胨、牛肉粉、氯化钠、琼脂；用法取本品35G，加1000ML蒸馏水，煮沸溶解。经115，15MIN灭菌后备用。马铃薯培养基（杭州微生物试剂有限公司），用于霉菌分离培养，其主要成分马铃薯浸出粉100G/L、葡萄糖200G/L、琼脂130G/L；用法取本品43G加1000ML蒸馏水，煮沸溶解。经115，15MIN灭菌后备用。液体培养基，其配方酵母膏5G/L，蛋白胨10G/L，NACL
19、5G/L；用法取酵母膏5G，蛋白胨10G，NACL5G，加1000ML蒸馏水，煮沸溶解且调PH70即可。经115，15MIN灭菌后备用。22主要仪器13DKS22恒温水浴锅；AB104N分析天平；高速冷冻离心机；真空冷冻干燥器；T6新悦可见光分光光度计；RE522旋转蒸发器；DELTA320酸度计；恒温培养箱；高压灭菌锅；移液管；玻璃平皿；打孔器；超净工作台。23方法231粗多糖的提取本实验采用酶醇沉法10,20,27粗提乌贼墨汁粗多糖。先从乌贼中获得新鲜墨囊，收集起来置于20以下冻藏，4解冻刺破墨囊取墨。加水并调PH为8，加4的碱性蛋白酶后置于50的DKS22恒温水浴锅中3H。然后在100条
20、件下灭酶10MIN后，置于高速冷冻离心机中，9000R/MIN离心20MIN取上清液。在上清液中加入四分之一体积的15的三氯乙酸过夜，再置于高速冷冻离心机中，9000R/MIN离心20MIN取上清液。将上清液置于RE522旋转蒸发器中旋转蒸发浓缩，再调PH为7，并加入4倍乙醇进行沉淀。取沉淀物冷冻干燥，得微黄色多糖样品。232多糖含量的测定本实验采用苯酚硫酸法5,8测量粗多糖中的多糖含量。标准溶液配制精密称取100干燥至恒重的葡萄糖标准品100MG置于100ML容量瓶中，加蒸馏水溶解，取10ML上述溶液定容至100ML，配制成100G/ML的葡萄糖标准溶液备用。苯酚溶液的配制取苯酚6ML，加蒸
21、馏水定容至100ML，得6的苯酚置于棕色瓶中保存备用。标准曲线的制备精密吸取标准品溶液0、02ML、04ML、06ML、08ML、10ML，分别置于具塞试管中，各加蒸馏水，使总体积为2ML，再分别加苯酚试液1ML，摇匀，迅速滴加浓硫酸50ML，摇匀后放置5MIN，置沸水浴中加热15MIN，取出冷却至室温，在T6新悦可见光分光光度计上，选择在490NM处测定其吸光度。233供试菌种活化与菌悬液的制备3预先将三种供试细菌接入营养琼脂斜面培养基上进行活化，置于37恒温培养箱中培养24H；将两种供试真菌接入马铃薯斜面培养基上进行活化，置于28恒温培养箱中培养72H。然后用接种环分别挑取一环已活化好的菌
22、种放入9ML无菌生理盐水中，振荡摇匀，制成各种菌的菌悬液，备用。234粗多糖加样做抑菌圈3在灭菌的平底培养皿中各倒入1520ML、50左右的灭菌培养基，迅速摇匀，水平凝固成平板，每个菌做2个平行。取配好的菌悬液01ML接种于相应的培养基上均匀涂布。将粗多糖用无菌水溶解配制成浓度为50MG/ML的溶液，以无菌水作为空白对照。分别于培养皿中用打孔器打3个孔，一个孔中注满无菌水，另两个孔中均加入样品溶液，作为平行实验组。细菌37恒温培养24H后，测抑菌圈大小，量取抑菌圈直径取平均值，并照相。真菌28恒温培养72H后，测抑菌圈大小，量取抑菌圈直径取平均值，并照相。235不同浓度粗多糖的抑菌性能的比较3
23、在灭菌的平底培养皿中各倒入1520ML、50左右的灭菌培养基，迅速摇匀，水平凝固成平板，每个菌做两个平行。取配好的菌悬液01ML接种于相应的培养基上均匀涂布。取粗多糖用无菌水配制成浓度为30MG/ML、40MG/ML、50MG/ML的溶液系列，分别于培养皿中用打孔器打3个孔，每个孔中分别注满30MG/ML、40MG/ML、50MG/ML的样品溶液。细菌37恒温培养24H后，测抑菌大小，量取抑菌圈直径取平均值，并照相。真菌28恒温培养72H后，测抑菌圈大小，量取抑菌圈直径取平均值，并照相。236确定粗多糖对不同菌株的最小抑菌浓度（MIC）3活化菌种，制备菌悬液，分别配制一系列浓度的粗多糖溶液，取
24、无菌的装有8ML液体培养基的试管，分别加入1ML的菌悬液及1ML粗多糖溶液，使粗多糖的最终浓度为50MG/ML、55MG/ML、60MG/ML、65MG/ML、70MG/ML、75MG/ML、80MG/ML、85MG/ML、90MG/ML、100MG/ML。每一浓度的粗多糖溶液平行做两次。将装有细菌的试管置于恒温培养箱中37培养12H，装有真菌的试管置于恒温培养箱中28培养48H，另将一支不加粗多糖的试管置于冰箱保存作空白，然后在560NM处测定OD560。其中OD560为0的液体培养基中所加的粗多糖的浓度即是粗多糖的最小抑菌浓度（MIC）。237粗多糖对不同菌株的抑菌率314在4ML液体培养
25、基中添加1ML粗多糖50MG/ML，加入1ML菌悬液，一定温度下培养（细菌37，12H，真菌28，48H），以没有加样品的培养基（加入同样量的菌悬液）为对照组，计算抑菌率。抑菌率（细菌）12H后对照组OD值/12H后添加组OD值；抑菌率（真菌）48H后对照组OD值/48H后添加组OD值。3结果与讨论31粗多糖含量的测定311标准曲线以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，见图1，其回归方程为A00076C00037（R209991），其中A为吸收度，C为葡萄糖的浓度（G/ML）。图1标准曲线图312多糖含量测定精密称取一定量的乌贼墨汁粗多糖粉末，加蒸馏水定容至100ML,取20ML测定其吸
26、光度，根据该回归方程计算本实验所得的乌贼墨汁中的多糖含量占总乌贼墨汁含量的3899。32粗多糖对不同菌株的抑菌作用图2为粗多糖对STAPHYLOCOCCUSAUREUS的抑菌效果图，图中编号为3的小孔中注入的为无菌蒸馏水，无明显抑菌圈，编号为1和2的两个小孔中均注入的为50MG/ML的粗多糖，有明显的抑菌圈。图3为粗多糖对ESAHERICHIACOLI的抑菌效果图，图中编号为1的小孔中注入的为无菌蒸馏水，无明显抑菌圈，编号为2和3的两个小孔中均注入的为50MG/ML的粗多糖，有明显的抑菌圈。图4为粗多糖对BACILLUSSUBTILIS的抑菌效果图，图中编号为2的小孔中注入的为无菌蒸馏水，无明
27、显抑菌圈，编号为1和3的两个小孔中均注入的为50MG/ML的粗多糖，有明显的抑菌圈。图5为粗多糖对PENICILLIUMGLAUCUM的抑菌效果图，图中编号为1的小孔中注入的为无菌蒸馏水，无明显抑菌圈，编号为2和3的两个小孔中均注入的为50MG/ML的乌贼墨汁粗多糖，也无明显的抑菌圈。图6为粗多糖对ASPERGILLUSNIGER的抑菌效果图，图中编号为2的小孔中注入的为无菌蒸馏水，无明显抑菌圈，编号为1和3的两个小孔中均注入的为50MG/ML的粗多糖，也无明显的抑菌圈。图26分别为粗多糖在50MG/ML的浓度下对STAPHYLOCOCCUSAUREUS、ESAHERICHIACOLI、BAC
28、ILLUSSUBTILIS、15图2粗多糖对STAPHYLOCOCCUSAUREUS的抑菌圈图3粗多糖对ESAHERICHIACOLI的抑菌圈图4粗多糖对BACILLUSSUBTILIS的抑菌圈图5粗多糖对PENICILLIUMGLAUCUM的抑菌圈图6粗多糖对ASPERGILLUSNIGER的抑菌圈16PENICILLIUMGLAUCUM、ASPERGILLUSNIGER的抑菌效果图,以无菌水作为对照组，可判断粗多糖对STAPHYLOCOCCUSAUREUS、ESAHERICHIACOLI、BACILLUSSUBTILIS等三种细菌有明显抗菌效果，对PENICILLIUMGLAUCUM、AS
29、PERGILLUSNIGER等两种真菌的抗菌效果则不明显，结果见表1。表1乌贼墨汁粗多糖抑菌效果MM乌贼墨汁粗多糖浓度50MG/ML菌种STAPHYLOCOCCUSAUREUSESAHERICHIACOLIBACILLUSSUBTILISPENICILLIUMGLAUCUMASPERGILLUSNIGER抑菌效果注“”表示有明显抑菌圈，“”表示无明显抑菌圈。33不同浓度粗多糖的抑菌性能的比较图711分别为粗多糖在30MG/ML、40MG/ML、50MG/ML的浓度下对STAPHYLOCOCCUSAUREUS、ESAHERICHIACOLI、BACILLUSSUBTILIS、PENICILLIU
30、MGLAUCUM和ASPERGILLUSNIGER的抑菌效果图。其中抑菌性能结果与章节32中的实验结果一致，即粗多糖对STAPHYLOCOCCUSAUREUS、ESAHERICHIACOLI和BACILLUSSUBTILIS有明显抑菌效果，而对PENICILLIUMGLAUCUM和ASPERGILLUSNIGER的抑菌效果不明显。根据图79中的不同浓度粗多糖对一种菌的抑菌圈直径大小比较可判断粗多糖的抗菌强度随着粗多糖的浓度增加而增强，并且同一浓度下的粗多糖对不同菌株的抑菌效果也有差异，表现为对BACILLUSSUBTILIS的抑菌效果最明显，STAPHYLOCOCCUSAUREUS次之，ESA
31、HERICHIACOLI最弱，结果见表2。表2不同浓度乌贼墨汁粗多糖对不同菌株的抑菌效果MM乌贼墨汁粗多糖浓度10MG/ML抑菌圈直径MMSTAPHYLOCOCCUSAUREUSESAHERICHIACOLIBACILLUSSUBTILIS304050961081269199112102113139图7不同浓度的粗多糖对STAPHYLOCOCCUS图8不同浓度的粗多糖对ESAHERICHIACOLIAUREUS的抑菌圈的抑菌圈17图9不同浓度的粗多糖对BACILLUSSUBTILIS图10不同浓度的粗多糖对PENICILLIUM的抑菌圈GLAUCUM的抑菌圈图11不同浓度的粗多糖对ASPERG
32、ILLUSNIGER的抑菌圈34粗多糖对不同菌株的最小抑菌浓度MIC粗多糖对不同菌株的最小抑菌浓度（MIC）见表3所示。根据表3中的数据比较可知，粗多糖对BACILLUSSUBTILIS的抑菌效果最好，STAPHYLOCOCCUSAUREUS次之。表3乌贼墨汁粗多糖对不同菌株的MICMG/ML菌种STAPHYLOCOCCUSAUREUSESAHERICHIACOLIBACILLUSSUBTILIS乌贼墨汁粗多糖MICMG/ML901007535粗多糖对不同菌株的抑菌率粗多糖对不同菌株的抑菌率见表4所示。根据表4中的数据比较可知，粗多糖对BACILLUSSUBTILIS的抑菌效果最好，STAPH
33、YLOCOCCUSAUREUS次之。18表4乌贼墨汁粗多糖对不同菌株的抑菌率乌贼墨汁粗多糖浓度10MG/ML菌种STAPHYLOCOCCUSAUREUSESAHERICHIACOLIBACILLUSSUBTILIS抑菌率1521150522604小结本实验以金乌贼SEPIAESCULENTAHOYLE墨汁为原料，采用碱性蛋白酶醇沉法从新鲜乌贼墨囊中提取获得占乌贼墨汁总重量为3899的粗多糖。本实验主要是根据抑菌圈的有无及其直径大小来判断乌贼墨汁粗多糖对细菌和真菌的抑菌效果。结果表明，粗多糖对PENICILLIUMGLAUCUM和ASPERGILLUSNIGER无明显抗菌作用，但对STAPHYL
34、OCOCCUSAUREUS、ESAHERICHIACOLI和BACILLUSSUBTILIS有明显的抗菌作用，浓度越高抗菌活性越强。并且分析发现粗多糖对BACILLUSSUBTILIS的抑菌效果最明显，STAPHYLOCOCCUSAUREUS次之，ESAHERICHIACOLI最弱。通过本实验还测得了粗多糖对该三种细菌（BACILLUSSUBTILIS、STAPHYLOCOCCUSAUREUS和ESAHERICHIACOLI）的最小抑菌浓度分别为75MG/ML、90MG/ML和100MG/ML，抑菌率分别为2260、1521和1505。对乌贼墨汁粗多糖抗菌具体机制还有待进一步研究。19参考文献
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