1、1.概述：无菌药品的容器应能在整个有效期内有完好的密封性，防止微生物的浸入。药品包 材的设计及选择要考察相互的配合情况。无菌容器/密封件系统的完整性测试可以在培养基 灌装时进行。 2.目的：评估产品包装的密封性，以充分保护产品在储存期的无菌状态。 3.依据：药品生产质量管理规范2010 修订版：附录 1：第九十五条 无菌药品包装容器的密 封性应经过验证，以避免产品遭受污染。 4.责任：质量部、生产部对本验证负责。 5.微生物浸入试验法验证密封完整性： 往产品容器内灌入培养基并按照常规方式压塞封盖，灭菌后冷却备用。将冷却后的容器倒 置并将瓶口完全浸没于高浓度（10 8CFU/ml）的运动性菌液中
2、，4 小时后，将容器外表面消毒 并培养，看是否有挑战性细菌在容器内生长。 多准备一些灌装培养基的样品，在与产品相同地的贮存条件下贮存。在贮存的一定时间间 隔（12,24，36 和 48 个月等），取出部分样品，进行微生物浸入 试验，以确定密封系统在贮存期 内的有效性。 6.范围：西林瓶、胶塞及铝盖的密封性验证，共有 10ml 及 2ml 两种规格。 7.用品：胆盐乳糖培养基 铜绿假单胞菌（ATCC 9027） 乙酸 异丙醇 8.实施： 无菌药品包装容器的密封性验证方案 制定人 审核人 批准人 日 期 日 期 日 期 生效日期 修订日期 8.1 制备样品： 取已经按相应清洗灭菌操作规程制备好的西
3、林瓶、胶塞及铝塑组合盖 150 套，西林瓶内 灌装入已灭菌的胆 盐乳糖培养基，在正常生 产线上抽真空、压塞、 轧盖。将每一试样品倒转， 使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在 3035 竖立倒置培养 14 天，培养基应澄清， 无菌落生长。 8.2 制备微生物菌悬液： 从铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的新鲜斜面上取培养物，分别接入含 6ml 无菌胆盐乳糖培 养基的试管中，在 3035 下培养 1824h；将每管的培养物分 别转入含 600ml 相同培养基的 容器内，于 3035下培养（约 24 小时），在培养 结 束时，能明显见容器内培养基出现浑浊， 计数，当菌落数大于 108CFU/ml
4、 时，停止培养，待用（在微生物侵入试验开始，所用菌悬液浓 度（活菌数）必须达到 1108CFU/ml。）。 8.3 营养试验： 8.3.1 该实验目的是确认胆盐乳糖培养基对铜绿假单胞菌促菌生长能力。 所有样品培养 14 天均不长菌时，从上述 8.1 试验样品中随机取 20 个带盖试验样品，每个试验 样品内接种 100CFU 铜绿假单胞菌。在 3035 下培养 7 天，或培养至所有试样品都呈阳性 结果。 8.3.2 结果判断： 若 7 天内，所有接种铜绿假单胞菌的试验样品中，微生物生长良好，则容器内培养基的促 菌生长能力可判为合格。使用革兰染色镜检，置于紫外灯下，培养基呈 蓝绿色荧光，则确认试
5、验样品容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌，即为阳性。 若 7 天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长条件不好或经鉴别后受其它菌 种污染，则试验失败，需重新作营养试验。 8.4 微生物侵入试验： 8.4.1 将铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的菌悬液倒入适当的容器内，从上述 8.1 样品中取 100 只 试验样品倒置于菌悬液中,使试样容器内的培养基充分接触封口内表面，样品的颈部及封口的 外表面应完全浸泡在菌悬液中（如图 1 所示）。 图 1 微生物挑战试验示意图 8.4.2 将试验样品在菌悬液中持续浸泡约 4h 后，取出试验样品，擦干容器外残余的菌悬液，其 外表用含 0.5%过乙酸的
6、 70%异丙醇消毒五分钟（注意不要破坏其密封口），放入塑料袋中，置 3035下培养 7 天。检查试验样品内微生物生长 情况，有生长记作“”，无生 长记作“”。 8.4.3 阳性对照： 阳性对照试验样品不经菌悬液浸泡，其外表用含 0.5%过乙酸的 70%异丙醇 消毒五分钟后，接种 10100CFU 铜绿假单胞菌，进 行阳性对照试验。 8.5 结果评价要求: 营养试验和阳性 对照试验 都合格，微生物侵入 试验才有效。 挑战试验中如有 长菌，需记录长菌的瓶数并须按下述要求作进一步调查。 仔细去除微生物生 长的容器的盖和塞，检查容器封口是否有缺损，造成微生物侵入。 将观察到试验样 品封口的缺陷，采用拍照或其他适当方式 详细记录。 如果任何挑战试验中长 菌的试验样品不是由于容器封口明 显的物理性缺损所致，容器密封 性挑战试验作失败论。 9 注意事项： 微生物侵入试验用菌悬 液经灭菌后丢弃。 在培养期内，当试验中发现任何带盖试样品长菌时，则试验无效，须弃去全部试样品，重新 从头开始试验。 微生物培养及侵入试验应 在不影响生产环境的地方（中心化 验室阳性室）进行。 10 再验证周期 当轧盖设备发 生变化时应进 行再验证。 改变胶塞、西林瓶及铝盖尺寸、材 质时应进行再验证。
