1、本科毕业论文系列开题报告水产养殖条石鲷发育早期脂肪酸组成研究一、选题的背景与意义条石鲷OPLEGNATHUSFASCIATUS，TDHA和二十碳五烯酸205N3EPA,N6系列的花生四烯酸204N6AA。已经确定卵子及仔鱼中高含量的N3不饱和脂肪酸是成功发育所必需的，204N6也被认为有重要的作用，因为它在海水鱼类生活史的早期组成了磷脂酰肌醇7。在海洋经济养殖鱼类大菱鲆中，N3系列不饱和脂肪酸和204N6在卵子成熟过程中含量显著增高，可知其对于仔稚鱼早期发育的重要性8；而在对另一种养殖鱼类马面鲀的研究中，可以看出其卵巢中含有丰富的长链多不饱和脂肪酸，尤其是EPA与DHA之和较高，在总脂达到14
2、50，在磷酸脂肪酸中达到了20489。22海水鱼类仔稚鱼必需脂肪酸研究概述海水鱼类的仔稚鱼需要3种必需脂肪酸,即二十二碳六烯酸226N3DHA,二十碳五烯酸205N3EPA和二十碳四烯酸204N6AA已有的研究表明，正如哺乳动物一样,海水鱼类的神经细胞膜和视觉细胞膜中含有丰富的DHA。缺乏DHA的鲱鱼COREGONUSHOYI幼鱼,由于视力减弱,在光强较弱的条件下,捕捉食物的能力则会下降，神经和视觉的发育不良10。相应的，EPA也对海水鱼类仔稚鱼神经系统的形成有一定影响。AA则是形成鱼类磷脂酰肌醇PI的重要脂肪酸,虽然含量低,但也有促进鱼类生长的作用。AA在刺激蛋白酶过程中为第二信使，是合成类
3、二十烷酸如前列腺素、白细胞三烯、血栓烷等的前体,这些生物活性物质具有重要的生理功能,影响生殖、消化和呼吸系统,影响膜对离子的通透性及抑制脂质分解等11研究表明，海水鱼类对其体内不同种类脂肪酸的利用存在先后次序，饱和脂肪酸最先被利用，然后是低不饱和脂肪酸，最后是高不饱和脂肪酸12。而海水鱼类的仔稚鱼比起成鱼而言，需要更多的N3多不饱和脂肪酸N3PUFA以满足其生长和存活的需求。在相关的饥饿实验中，大菱鲆SCOPHTHALMUSMAXIMUS和金头鲷SPARUSAURATA等鱼类，体内的饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸是首先被利用的重要能源，其余脂肪酸则按照其饱和度，也就是N9系列，N6系列，N3系列的
4、顺序被先后利用。N3系列中的DHA226N3是最后被利用的13。在前人对处于发育期的仔鱼进行的饥饿实验中，结果显示，DHA是各极性脂中最优先被保存下来的。被保存下来的DHA在仔鱼摄取外源营养后，又被重新吸收形成甘油磷脂中，从而参与生物膜构建。除此之外，饥饿的海水鱼类仔稚鱼体内的廿碳四烯酸，也会如DHA一般被优先保存，这一点说明了N6系列的高不饱和脂肪酸在仔稚鱼发育中的重要作用14。DHA和EPA对海水仔稚鱼的生理作用不尽相同，作为必需脂肪酸的营养价值也有一定差异。研究表明，比起DHA和EPA在总脂中的含量，DHA与EPA的比值对于仔稚鱼的生长发育有着更为重要的意义。当海水比目鱼仔稚鱼饲料中DH
5、AEPA的比例约为21时,仔稚鱼的生长和成活率令人满意15；EPA与DHA比例从361降低到081时,金鲷仔鱼的生长速度会进一步提高16。多方面的研究表明，DHA作为仔稚鱼的必需脂肪酸,比EPA更为重要。高含量的EPA会导致磷脂结构组成不平衡，影响仔稚鱼的正常生长17由于海水鱼类仔稚鱼自身无法合成DHA与EPA等多种脂肪酸，因此，通过饲喂饵料生物作为外源营养对其体内DHA与EPA的比例进行调控，对于海水鱼类的经济养殖有着重要意义。23饵料生物的选择及强化轮虫、卤虫无节幼体作为海水鱼类仔稚鱼的饵料，已经被广泛应用于苗种生产。研究已证明，随着饵料中高不饱和脂肪酸含量的提高，海水鱼类仔稚鱼体内的脂肪
6、酸组成会产生相应变化，生长速度、存活率、抗逆能力和应激抵抗能力会随之提高，从而有利于提高幼体的存活率。因此，使饵料中的高不饱和脂肪酸含量和比例适宜，在海水鱼苗培育中具有重要作用18。但是，由于轮虫和卤虫无节幼体体内缺乏DHA，EPA、AA和N3族多不饱和脂肪酸含量又较低，因此投喂未经营养强化的轮虫、卤虫无节幼体不利于苗种的成活、生长以及抗病抗逆能力。生物的脂肪酸组成在很大程度上取决于生物本身的吸收和合成能力，裸腹溞和卤虫的幼体等其他甲壳类合成EPA的能力远高于轮虫19。卤虫成体中不饱和脂肪酸较饱和脂肪酸比例大得多，且长链多烯酸含量较高，其中较有价值的不饱和脂肪酸就包括EPA20。海水小球藻的脂
7、肪中也含有较丰富的EPA约占总脂的2030,但缺乏DHA2122。因此，利用含有丰富DHA，EPA，AA，N3族多不饱和脂肪酸等不饱和脂肪酸的强化剂对轮虫等饵料生物进行强化，是现今海水鱼类饵料生物养殖方面的一个主要方向。在强化剂的选择与饵料生物培育方面，前人已做过多项研究2326。其中，在邱小琮27等的实验中，投喂以不同强化剂强化的轮虫和卤虫无节幼体，显著地提高了牙鲆仔鱼的成活率，其中又以V强化酵母强化剂的效果最好。海水鱼类仔稚鱼摄食强化过的轮虫和卤虫无节幼体后，体内多不饱和脂肪酸含量随着饵料中含量升高而升高，这正是牙鲆仔鱼生长速度和成活率提高的重要因素之一。24在海水鱼类育苗中的应用价值目前
8、,我国养殖的重要经济鱼类，如真鲷PAGRUSMAJOR、黑鲷SPARUSMACROCEPHALUS和牙鲆PARALICHTHYSOLIVACEUS等，在人工育苗过程中，常有仔稚鱼大量死亡的情况出现，成活率一般低于20。王丹丽28等在对重要经济鱼类大黄鱼（PSEUDOSCIAENACROCEA）的研究中，分析了大黄鱼早期发育阶段体内脂肪酸的种类和相对含量，并重点比较了发病稚鱼与正常稚鱼的脂肪酸变化特点。通过对其变化规律的研究得出结论导致大黄鱼稚鱼阶段经常出现的“胀鳔病”发生的内在原因，可能是DHA和EPA的缺乏以及AA偏高。研究结果为预防“胀鳔”鱼苗的发生提供了理论依据。仔稚鱼从吸收卵黄内源营养
9、转变为摄取外源营养后，营养物质的缺乏和组成不平衡是导致其大量死亡的一个重要原因。因此，开展仔稚鱼营养方面的分析，对其脂肪酸的组成和饵料摄入进行研究，不仅有重要的科学意义，也有广阔的应用前景。3、研究及展望研究证实,DHA能直接影响人类大脑功能,促进学习记忆能力同时对多种疾病如动脉粥样硬化和某些肿瘤具有预防和治疗功效。EPA对体内合成前列腺素和凝血烷等激素具有重要作用,这类激素直接参与体内渗透压调节,心血管功能和神经发育等29。鉴于人体不能自身合成多不饱和脂肪酸，合理的脂肪酸摄入对身体健康极为重要。条石鲷（OPLEGNATHUSFASCIATUS，TS）是一种具有较高经济价值的海产鱼类，主要分布
10、于我国的黄海、东海，日本的北海道以南等海30。成鱼体态优美，色泽艳丽，具有较高的观赏价值；兼之肉质细嫩、营养价值高，口感独特，深受消费者的青睐31。随着其养殖规模的不断扩大，条石鲷在营养价值和经济价值上的重要性也日益凸显，对其进行基础研究显得尤为重要。本课题主要是分析条石鲷未受精卵、受精卵、未开口仔鱼、饲喂轮虫后的仔鱼、饲喂卤虫后的仔鱼、幼鱼以及成鱼体内的脂肪酸组成种类以及含量变化规律。这对于条石鲷养殖的健康可持续发展，提高生产者的积极性，以及提高条石鲷养殖业的经济效益有重大的意义。参考文献1周光正,王远隆,王淑君海水仔稚鱼对于N3高度不饱和脂肪酸需求量的研究现状J海洋湖沼通报,1996372
11、752朱碧英,陈全震鱼油脂肪酸组成及其含量分析J东海海洋,1999,17261633刘洪祥食品保健精致鱼油开发J天然产物研究与开发,1993,5371784陈丽花,肖作兵,周培根中国对虾的脂肪酸分析及其营养价值评价J上海海洋大学学报,2010,1911251295王维群营养学M北京高等教育出版社,2005762586李淡秋二十种淡水鱼虾脂肪酸组成的分析研究J水产科技情报,1991,18373787TOCHERDR,SARGENTJRANALYSESOFLIPIDSANDFATTYACIDSINRIPEROESOFSOMENORTHWESTEUROPEANFISHJLIPIDS,1984,194
12、924998马爱军,雷霁霖,陈四清,张秀梅,陈大刚大菱鲆产卵季节对卵子的生物学及生化特征的影响J海洋与湖沼,2002,331,75809杨文鸽马面鲀卵巢中磷脂成分与脂肪酸的分析J宁波大学学报理工版,2000,131535610BELLMV,BATTYRS,DICKJRETALDIETARYDEFICIENCYOFDOCOSAHEXAENOICACIDIMPAIRSVISIONATLOWLIGHTINTENSITIESINJUVENILEHERRINGCLUPEAHARENGUSLJLIPIDS,1995A,3044344911沈同,王镜岩,赵邦悌生物化学,上册M北京高等教育出版社,198035
13、3712谢小军,邓利饥饿对鱼类生理生态学影响的研究进展J水生生物学报,1998,22218118813刘镜恪,陈晓琳海水仔稚鱼的必需脂肪酸N3系列高度不饱和脂肪酸研究概况J青岛海洋大学学报,2002,32689790214刘镜恪,周利,雷霁霖海水仔稚鱼脂类营养研究进展J海洋与湖沼,2002,33444645015RODRIGUEZC,PEREZJA,LORENZOA,ETALN3HUFAREQUIREMENTOFLARVALGILTHEADSEABREAMSAURATAWHENUSINGHIGHLEVELSOFEICOSAPENTAENOICACIDJCOMPBIOCHEMPHYSIOL,19
14、94,107A69369816刘镜恪海鱼早期阶段必需脂肪酸和磷脂的研究现状与展望J海洋水产研究,2002,232586317RAINUZZOJR,REITANKI,OLSENYTHESIGNIFICANCEOFLIPIDSATEARLYSTAGESOFMARINEFISHAREVIEWJAQUACULTURE,1997,15510311518黄磊,詹勇,许梓荣饵料中高不饱和脂肪酸在海水鱼苗培育中的作用J齐鲁渔业,2003,2012101319童圣英,姜宏,陈炜不同培养条件下蒙古裸腹脂肪酸组成比较J中国水产科学,1998,53586320徐秀兰,蒋企洲,胡磊军,伊静卤虫中蛋白质和脂肪酸组成的研究
15、J中国生化药物杂志,1997,18628929121王胜,刘永坚,田丽霞,等斜带石斑仔鱼不同饵料的营养分析及其对生长和鱼体脂肪酸组成的影响J中山大学学报自然科学版,2003,42221021322王大志,彭兴跃,李少菁,程兆第海水小球藻脂肪酸组成研究J海洋科学,1999,4687023张利民,常建波N3多价不饱和脂肪酸营养强化轮虫技术研究J水产学报,1997,21441542124郑乐云不同饵料对点带石斑鱼幼鱼生长、存活的影响J台湾海峡,2004,23334134625龚小玲,苏锦祥,段晓英,姜秀凤不同饵料培养的轮虫对假睛东方仔鱼脂肪酸的影响J中国水产科学,1999,6311912226周光正
16、饵料对培养轮虫BRACHIONUSPLICATILIS脂肪酸组成的影响J海洋科学,1996,5,272827邱小琮营养强化的轮虫、卤虫对牙鲆仔鱼的成活、生长及体脂肪酸组成的影响J水产科学,2004,2324828王丹丽,徐善良,严小军,等大黄鱼仔、稚、幼鱼发育阶段的脂肪酸组成及其变化J水产学报,2006,30224124529薄海波,王霞碱催化法衍生化气相色谱/质谱法分析青海湖裸鲤鱼油中脂肪酸J色谱,2006,21218118430朱元鼎福建鱼类志下卷M福州福建科学技术出版社,1985,25425531武云飞,门强,康斌两种珍稀鱼类的形态学和生态学的补充研究J青岛海洋大学学报,1999,294
17、581585本科毕业设计（20_届）条石鲷发育早期脂肪酸组成研究目录引言161材料与方法1711样品采集1712仪器与试剂1713GC/MS分析条件1714实验方法17141总脂的提取BLIGHDYER法17142皂化18143脂肪酸甲脂化18144GC/MS分析18145脂肪酸的定性测定1915数据分析统计与检验192结果1921各样品的总脂含量变化1922脂肪酸的种类组成特点21221未受精卵的脂肪酸组成特点21222胚胎期脂肪酸组成特点22223前仔鱼期脂肪酸组成特点22224后仔鱼期脂肪酸组成特点22225稚鱼期体内脂肪酸组成特点22226幼鱼期脂肪酸组成特点2223几种重要脂肪酸的实
18、际含量比较223讨论2431条石鲷发育早期各阶段SFA、MUFA和PUFA的含量变化2432条石鲷发育早期各阶段主要脂肪酸组成的变化2433稚鱼期的特点与“胀鳔病”的发生2434条石鲷鱼苗脂肪酸组成与其他鱼类比较2535条石鲷鱼苗摄食饵料对其脂肪酸的影响254小结25致谢错误未定义书签。参考文献26摘要用GC/MS法对条石鲷发育早期不同发育阶段（未受精卵、胚胎、前仔鱼期、后仔鱼期卤虫、后仔鱼期轮虫、稚鱼、幼鱼）的脂肪酸组成及含量进行了分析研究。共检测到28种脂肪酸，其中饱和脂肪酸SFA13种，单不饱和脂肪酸MUFA7种，多不饱和脂肪酸PUFA8种。结果表明SFA、MUFA和PUFA的含量在开口
19、之前均呈逐渐下降，开口之后迅速回升；必需脂肪酸中的EPADHA含量，在摄食卤虫阶段的稚鱼期最低，但C181（油酸）、C182N6（亚油酸）和C183N3（亚麻酸）含量则显著高于其他各阶段。此外，还将条石鲷鱼苗脂肪酸组成与其他鱼类进行了比较分析，并探讨了稚鱼期的特点与“胀鳔病”的发生与预防。关键词条石鲷；发育早期；胚胎；仔稚幼鱼；脂肪酸ABSTRACTTHEFATTYACIDCOMPOSITIONANDCONTENTATDIFFERENTDEVELOPMENTALSTAGESUNFERTILIZEDSTAGE,EMBRYOSTAGE,PRELARVALSTAGE,POSTLARVAROTIFER
20、STAGE,POSTLARVAARTEMIASTAGE,JUVENILEANDFINGERLINGOFTHEOPLEGNATHUSFASCIATUSWEREANALYZEDBYTHEMEANSOFGC/MSTWENTYEIGHTFATTYACIDSWEREFOUND,INWHICHTHEREWERE13SATURATEDFATTYACIDSSFA,7MONOUNSATURATEDFATTYACIDSMUFA,AND18POLYUNSATURATEDFATTYACIDSPUFATHERESULTINDICATESTHATTHECONTENTOFSFA,MUFAANDPUFAWEREGRADUAL
21、LYDECLINEDATFIRST,THENREBOUNDEDAFTERFEEDINGWITHTHEOPENINGBAITSTHECONTENTOFESSENTIALFATTYACIDEFAOFEPADHAREACHEDTHELOWESTPOINTATTHESTAGEOFJUVENILE,WHILETHECONTENTOFC181OLEICACID,C182N6LAANDC183N3ALAWERESIGNIFICANTLYHIGHERTHANOTHERSTAGESFUTHERMORE,WECOMPAREDTHEFATTYACIDCOMPOSITIONOFOPLEGNATHUSFASCIATUS
22、WITHOTHERFISH,DISCUSSEDTHEMAINFEATUREOFJUVENILEANDTHEOCCURRENCEANDPREVENTIONOFTHE“SWIMBLADDERBULDGE”DISEASEKEYWORDSOPLEGNATHUSFASCIATUS,DEVELOPMENTALSTAGES,EMBRYO,YOUNGFISH,FATTYACID引言条石鲷OPLEGNATHUSFASCIATUS，TS，俗称日本鹦鹉鱼，隶属于鲈形目PERCIFORMES，石鲷科OPLEGNATHIDAE，石鲷属（OPLEGNATHUS），主要分布于我国的黄海、东海，日本的北海道以南等海域1。肉质
23、细嫩、营养价值高，是一种具有较高经济价值的海产鱼类2。条石鲷皮下含有丰富的胶质，口感独特，深受消费者的青睐；其幼鱼体态优美、色泽鲜艳、条纹美丽，具有较高的观赏价值。在北方，可采用海上网箱、池塘与室内相结合的养殖模式，南方可以在海上进行网箱养殖3。随着其养殖规模的不断扩大，条石鲷在营养价值和经济价值上的重要性也日益凸显，因此对其进行基础研究显得尤为重要。脂肪酸在生物体生命过程中具有重要的作用。它们是构成机体脂肪和类脂的基本物质，是细胞膜磷脂的重要成分，能够直接调节细胞膜的组成及蛋白质与膜内受体，调节脂质代谢与酶作用，影响酶活性；与细胞核转录因子作用，修饰基因表达；影响MRNA稳定性，调节酶的表达
24、4。各种脂肪酸可根据饱和度的不同分为饱和脂肪酸SFA、单不饱和脂肪酸MUFA）、多不饱和脂肪酸PUFA5。MUFA可降低血浆总胆固醇、血压的作用，也可防止记忆下降。动物体内能够合成SFA和MUFA，但不能合成亚油酸C182和亚麻酸C183等，因此将动物维持正常生长发育需要而体内又不能合成的脂肪酸称为必需脂肪酸，如亚油酸、亚麻酸、AA、EPA及DHA等67。人体同样不能自身合成多不饱和脂肪酸，合理的脂肪酸摄入对身体健康极为重要。N3族多不饱和脂肪酸N3PUFA中，有代表性的物质包括二十碳五烯酸EPA和二十二碳六烯酸DHA等8。EPA和DHA主要来源于海洋生物或深海鱼类，是生理作用最重要的N3族脂
25、肪酸9，对人体而言，具有降血压、抗血栓、预防心血管疾病及抗肿瘤等多种重要的生理功能，在降低血脂、降低心脑血管疾病发病率方面有显著作用10。研究证实DHA能直接影响人大脑功能,同时对多种疾病如动脉粥样化具有预防和治疗功能11。同样，EPA对体内合成前列腺素和凝血烷等激素具有重要作用12。正因为鱼类富含人体必须氨基酸、多聚不饱和脂肪酸以及其他矿物元素，一直以来作为人类重要食物和营养源。近年来，随着人们对健康与营养水平要求提高，水产养殖业的迅速发展，国内外对鱼类脂肪酸的研究也越来越广泛，从鱼类中摄取脂肪酸的重要性已日益受到关注13。海洋生物和深海鱼类中富含多不饱和脂肪酸，尤其是EPA和DHA含量比淡
26、水鱼高出许多14。国内外有关鱼类脂肪酸营养的研究表明，海水硬骨鱼类需要高度不饱和脂肪酸，尤其是N3HUFA是海水仔稚鱼的必需脂肪酸15，海水鱼类必需的长链多不饱和脂肪酸HUFA有以下三种N3系列的C226N3DHA二十二碳六烯酸和C205N3EPA二十碳五烯酸，N6系列的C204N6花生四烯酸，AA1618。海水鱼体组织中DHA和EPA的含量远高于AA，因此鱼类对N3系列不饱和脂肪酸，尤其是DHA、EPA有更高的需求19。同时，研究还表明幼鱼和成鱼对必需脂肪酸的需求和转化途径不同，脂肪酸在鱼苗期起着十分重要的作用，特别是高度不饱和脂肪酸中的N3系列如DHA、EPA和AA是海水仔、稚、幼鱼的必需
27、脂肪酸，对维持细胞膜结构和机能的完整性极为重要，而且是构成统称为类二十烷酸的高生物活性旁分泌素的前体20。通过研究比较海水鱼类各发育阶段的脂肪酸组成与变化,可以阐明该鱼在不同生长发育阶段的脂肪酸需求，也可为科学调配人工配合饲料、配制鱼苗开口饵料提供理论支持21。目前对各种海淡水鱼类的脂肪酸研究众多，但对条石鲷的脂肪酸组成研究方面少有人涉及。本课题拟通过分析条石鲷未受精卵、胚胎、仔鱼前期、仔鱼后期、稚鱼及幼鱼体内的脂肪酸种类、组成以及含量变化规律，来探明条石鲷生长过程中脂肪酸的积累、转化和利用情况。这对评价条石鲷不同发育阶段的营养状况有重要参考价值，也可为条石鲷育苗工艺的完善提供技术支撑。1材料
28、与方法11样品采集实验所用材料于2009年5月,取自宁波市海洋与渔业研究院横码基地。按不同的发育阶段分别采样，共获取未受精卵、胚胎、前仔鱼期、后仔鱼期（摄食轮虫，以下简称“后仔鱼期轮虫”）、仔鱼后期（摄食轮虫和卤虫，以下简称“后仔鱼期卤虫”）、稚鱼、幼鱼等7个样品。取样后立即冷冻，用冰瓶带回,置于实验室76的冰箱中保存。12仪器与试剂QP2010气相色谱质谱分析仪，带AOC20自动进样器日本SHIMADZU公司，30M025MM025MSPB50色谱柱美国SUPELCO公司；半自动测序系统美国BIORAD公司等；14BF3CH3OH溶液和标准脂肪酸甲酯美国ALLTECH公司，色谱纯正己烷美国T
29、EDIA公司，其他试剂为国产分析纯。13GC/MS分析条件GC条件进样口温度250，载气为纯度为99999的高纯氦，柱流速081ML/MIN，柱前压730KPA，柱起始温度150，保持35MIN，以20/MIN升至200，再以5/MIN升至280，保持37MIN。分流进样1L，分流比501。MS条件离子源选用电子轰击ELECTRONIMPACT,EI源，电子能量为70EV，离子源温度200，接口温度250，选取全程离子碎片扫描SCAN模式，质量扫描范围为40600，溶剂延迟35MIN。用化学电离CHEMICALIONIZATION,CI源分析时，反应气为甲烷。14实验方法141总脂的提取BLI
30、GHDYER法步骤一把取来的样品匀浆以后，放在冷冻干燥机上彻底干燥；步骤二在电子天平上准确称量0102G左右干样，把称来的干样放入15ML离心管中，往离心管中加入76MLCHCL3/CH3OH/H2O1208的混合液，在超声波清洗机中超声提取2MIN，然后在旋涡混合器上剧烈振荡5MIN；步骤三把离心管放入台式离心机中离心，在三千转的转速下离心15MIN，离心完毕后取上层清液，滴入125ML的分液漏斗中；步骤四往离心管中的下层样品再加入76MLCHCL3/CH3OH/H2O1208的混合液，在涡旋混合器上剧烈振荡5ML，然后在超声清洗机中超声提取2ML；步骤五重复步骤三；步骤六重复步骤四步骤五；
31、步骤七向装有全部上层清液的分液漏斗中加入6MLCHCL3，从而使CHCL3/CH3OH/H2O2208，然后用双手振荡分液漏斗中的混合液30S；步骤八振荡完毕后，再向分液漏斗中加入6ML饱和食盐水，从而使CHCL3/CH3OH/H2O2228，然后用双手振荡分液漏斗中的混合液30S；步骤九把分液漏斗放到分液漏斗架上，使里面的样品静置分层，过夜，以上下层的液体清晰分开即分界面彻底清晰为效果最佳；步骤十待分层完毕后，把下层液体转移到蒸发瓶中，用旋转蒸发器在30左右加热蒸发蒸发瓶中的样品，在蒸发时注意不要使瓶中的样品喷出来，待蒸发到一定量时，把样品瓶从旋转蒸发器上取下，用少量氯仿把蒸发瓶中的样品洗到
32、已知重量的4ML样品瓶中，用氮气吹到样品瓶的重量的不再变化即恒重为止，然后往4ML样品瓶中充氮气冷冻保存；142皂化步骤一往4ML样品瓶中加入2ML56的KOH甲醇水（V/V41），然后在4ML样品里吹一分钟氮气，把样品瓶放入60的水中皂化2H；步骤二皂化完成后，把皂化液转移到15ML离心管中，往离心管中加入1ML的饱和NACL溶液，用盐酸（V/V11）调PH使小于1；步骤三用2ML的氯仿正己烷（V/V14）洗样品瓶并合并到离心管中，在涡旋混合器上涡旋振荡数分钟，把离心管放入离心机中以4000R/MIN离心，离心10MIN，用吸管把上层液吸到另一个离心管中；步骤四重复步骤三；步骤五再重复步骤三
33、，得到上层提取液即为脂肪酸；143脂肪酸甲脂化步骤一提取液用2ML重蒸水洗一次，然后把离心管放入涡旋振荡器上振荡，以4000R/MIN离心，离心十分钟，把上层液准确移入干净并干燥的4ML样品瓶中，把样品瓶放到旋转蒸发器上蒸干，在4ML样品瓶中加入05MLBF3甲醇液，往样品瓶中吹氮气1MIN，然后放入60的水中甲脂化1H；步骤二一小时后把4ML样品瓶从水中取出，待冷却后移到干净并干燥的15ML离心管中，在离心管中加入1ML饱和NACL溶液；步骤三原来的样品瓶用2ML正己烷洗到离心管中，在涡旋混合器上涡旋振荡数分钟，把离心管放入离心机中以4000R/MIN离心，大约离心十几分钟，用吸管把上层液吸
34、到另一个尖头离心管中；步骤四重复步骤三；步骤五再用3ML氯仿正己烷（V/V14）抽提一次，合并提取液；步骤六往提取液中加入1G无水硫酸钠，用滴管准确移取上层液移入4ML样品瓶中氮气吹干，用1ML正己烷定容到洁净并干燥的15ML样品瓶中,最后把样品上GC/MS进行分析测定。144GC/MS分析GC条件进样口温度250，载气为纯度为99999的高纯氦，柱流速081ML/MIN，柱前压730KPA，柱起始温度150，保持35MIN，以20/MIN升至200，再以5/MIN升至280，保持37MIN。分流进样1L，分流比501；MS条件离子源选用电子轰击（ELECTRONIMPACT,EI）源，电子能
35、量为70EV，离子源温度200，接口温度250，选取全程离子碎片扫描（SCAN）模式，质量扫描范围为40600，溶剂延迟35MIN。用化学电离（CHEMICALIONIZATION,CI）源分析时，反应气为甲烷。145脂肪酸的定性测定在上述分析条件下，每一脂肪酸组分都有各自保留时间，此保留时间即为定性依据之一。从GCCIMSTIC图中各组分的质谱，可以初步确定出各组分的分子量；再根据GCEIMSTIC中各组分的离子碎片质量谱图，通过NIST库并参考脂肪酸标准谱图可以定性出所有的脂肪酸。15数据分析统计与检验首先使用EXCEL，对收集到的数据进行初步整理和分析，计算均值与方差；其后，使用SPSS
36、130统计软件对数据进行进一步分析，即进行均值的多重比较。比较时首先选定因变量和分组变量，再使用LSD法（最小显著差数法）和DUNCAN法（新复极差法）对各组数据进行多重比较，最后输出统计量，分析其差异。2结果21各样品的总脂含量变化条石鲷各阶段样品的总脂含量测定结果见表1。由表1可见，7个样品的总脂含量为927864538991924MG/G，饲喂轮虫的仔鱼后期总脂含量最高，约占总量（干样）的39。条石鲷在胚胎及仔鱼前期发育期间，脂肪作为其能量的主要来源，总脂的绝对含量由未受精卵的30600MG/G急剧跌至9278MG/G。仔鱼后期期摄食轮虫后又迅速回升至38991MG/G，此后其总脂含量呈
37、逐步递减趋势，至幼鱼期，总脂含量降为29269MG/G，相较于仔鱼后期轮虫期，下跌达2493。表1条石鲷各发育阶段总脂含量（MG/G）TAB1TOTALLIPIDCONTENTINOPLEGNATHUSFASCIATUSOFDIFFERENTDEVELOPMENTALSTAGESMG/G样品SAMPLE未受精期UNFERTILIZEDSTAGE胚胎期EMBRYOSTAGE前仔鱼期PRELARVALSTAGE后仔鱼期轮虫POSTLARVAROTIFERSTAGE后仔鱼期卤虫POSTLARVAARTEMIASTAGE稚鱼期JUVENILE幼鱼期FINGERLING总脂含量3060023774424
38、B9278645A38991924E37624278E320031279D29269TOTALFATCONTENT867C1215C注采用DUNCAN氏新复极差检验法。N3,表中上标字母不同（A、B、C、D、E）表示有显著差异（P005）。NOTESDUNCANSMULTIPLERANGETESTWITHINAROW,MEANSWITHTHESAMESUPERSCRIPTARENOTSIGNIFICANTLYDIFFERENTATP005表2条石鲷各发育阶段脂肪酸组成（）TAB2FATTYACIDCOMPOSITIONINOPLEGNATHUSFASCIATUSOFDIFFERENTDEVEL
39、OPMENTALSTAGES脂肪酸FATTYACID未受精期UNFERTILIZEDSTAGE胚胎期EMBRYOSTAGE前仔鱼期PRELARVALSTAGE后仔鱼期轮虫POSTLARVAROTIFERSTAGE后仔鱼期卤虫POSTLARVAARTEMIASTAGE稚鱼期JUVENILE幼鱼期FINGERLINGC140094001A105014AB146008C189014D204006D125006BC194029D12MC150007001A008002A007002A031008C049004D024016BC017004AB14MC160010003A016005AB010004A0
40、21003B034006C043002D011001AC1602163395BC2403071C2322233C2246088BC1965099B1549106A2107059BCC161N9822100C742040BC917070C617103AB602014AB473049A436245AC162N4013003BC020007D003001A018004CD023004DE029005E007002AB14MC170037012A075055AB034034A079012AB095009B071010AB034017A15MC170009006A021010B012008AB01400
41、4AB038003C078007D020002BC170069004AB079013BC063009A093005DE088006CD077006BC104004E3,7,11,15MC200006003AB010006BC003001A028002E017003D018002D014002CDC180860176A893048A741112A1311074C1244051C1060080B1324090CC181N91007038B957073B1283055D768025A1086003C1948034E1305027DC181N7557000B599053BC626053C593018B
42、C718013D1090032E431008AC182N6123009A120026A130018A0395022B689024D645035CC183N3074016A086044A112030A326080B714108C1520122D246010BC190014003AB039019C008001A026002BC014003AB007002A020002ABC191N9014003A037017B007001A016002A009003A006002A009004AC200050013C024005A112009E083007D045003BC036007AB153010FC201N
43、9102023BC061013A123018C095007B069003A104003BC203016DC202N7126019D086001C133010D054007B036003A030003A060003BC204N6447026C382007B397016B672017E568027C185018A187005AC205N31099196C852067B728131B1343033D801025B539066A481008AC220003001A005002A006002A037008B026001B037003B113019CC221N9022008BCD006005A002600
44、4CD014002AB017001BC031009DC225N3701069F646029E461049C796012G491019D052010A159008BC226N31543269C1713213C1600241C426069B594051B150028A1569128CC240005002A00019001C020001C011001B035000DC241N9030007C015006A016007B073004E041002D033004CD086007FSFA3325575AB3678052BC3464313ABC4177143D3840164CD3134176A4146090
45、DMUFA2553157B2417145AB2972151C2188118A2539006B3671084D2501246BPUFA4123418D3905130CD3564274ABC3635192BC3621158BC3195260A3353157ABEPADHA2641465E2565151E2328308DE1769090C1394040B689094A2049136CD注采用DUNCAN氏新复极差检验法。N3,表中上标不同字母（A、B、C、D、E、F）表示有显著性差异（P005）。NOTESDUNCANSMULTIPLERANGETESTWITHINAROW,MEANSWITHTHE
46、SAMESUPERSCRIPTARENOTSIGNIFICANTLYDIFFERENTATP005020406080100未受精期胚胎期前仔鱼期后仔鱼期轮虫后仔鱼期卤虫稚鱼期幼鱼期发育阶段DEVELOPMENTSTAGES脂肪酸含量FACONTENTSFAMUFAPUFA图1条石鲷各发育阶段SFA、MUFA和PUFA的百分比含量FIG1SFA,MUFAANDPUFACONTENTINOPLEGNATHUSFASCIATUSOFDIFFERENTDEVELOPMENTALSTAGES22脂肪酸的种类组成特点条石鲷发育早期各阶段脂肪酸组成及百分比含量测定结果见表2。从未受精卵开始至幼鱼共检测出28
47、种脂肪酸，起始碳链长度在14碳24碳之间。其中饱和脂肪酸SFA13种，单不饱和脂肪酸MUFA7种，多不饱和脂肪酸PUFA8种。SFA、MUFA、PUFA三者百分含量在各阶段的变化见图1。221未受精卵的脂肪酸组成特点从未受精卵中检测出28种脂肪酸，此时以PUFA为主，占4123，在各阶段中含量最高；SFA次之，为3325；MUFA稍低为2553。所检测到的脂肪酸中，C160（棕榈酸）、C226N3DHA含量最高，分别为2163和1543。C205N3EPA和C181N9（油酸）次之，分别为1099和1007。C204N6（花生四烯酸）含量为447，DHA为1713，而EPA显著高于其他各发育阶
48、段（P005）。EPADHA含量居各阶段之首。222胚胎期脂肪酸组成特点受精前后的脂肪酸组成及百分含量变化较小，除未检测到C240之外，其余被检测出的脂肪酸与未受精卵中相同。脂肪酸仍以SFA和PUFA为主，分别占3678和3905，MUFA的含量为2417。同未受精卵相比，PUFA含量有所降低，而SFA含量则有所上升。其中，C160棕榈酸和C226N3DHA含量最高，分别为2403和1713，高于未受精卵中的含量，同时也是各阶段最高值。C205N3EPA和C204N6（花生四烯酸）的含量相较于未受精卵时期显著降低（P005），分别为852和382。223前仔鱼期脂肪酸组成特点未开口幼鱼体内除未
49、检测到C221N9和C240之外，其余被检测出的脂肪酸与未受精卵中相同。被检测出的脂肪酸以PUFA为主，为3564，但显著低于未受精卵时期（P005）。SFA和MUFA的含量分别为3464和2972。C160棕榈酸、C226N3DHA、C181N9（油酸）的含量相对较高，分别为2322、1600、1283。C204N6（花生四烯酸）含量为397。224后仔鱼期脂肪酸组成特点此阶段仔鱼摄食轮虫和卤虫，相较于前三个阶段，SFA显著增加（P005）。摄食轮虫阶段SFA含量为4177，是各阶段中相对最高的。C160棕榈酸仍是百分含量最高的脂肪酸，但已逐渐降至20以下；而C170、C180（硬脂酸）含量显著增加
